プロファム試験法

１．装置
　ガスクロマトグラフ・質量分析計を用いる。

２．試薬・試液
　次に示すもの以外は，第２　添加物の部Ｃ　試薬・試液等の項に示すものを用いる。
　なお，「（特級）」と記載したものは，日本工業規格試薬の特級の規格に適合するものであることを示す。
アセトニトリル　アセトニトリル300mlをすり合わせ減圧濃縮器を用いて濃縮し，アセトニトリルを除去する。この残留物をｎ-ヘキサン５mlに溶かし，その５μlを電子捕獲型検出器付きガスクロマトグラフに注入して試験するとき，ガスクロマトグラム上のｎ-ヘキサン以外のピークの高さは，２×10−11ｇのγ-ＢＨＣが示すピークの高さ以下でなければならない。
アセトン　アセトン300mlをすり合わせ減圧濃縮器を用いて濃縮し，アセトンを除去する。この残留物をｎ-ヘキサン５mlに溶かし，その５μlを電子捕獲型検出器付きガスクロマトグラフに注入して試験するとき，ガスクロマトグラム上のｎ-ヘキサン以外のピークの高さは，２×10−11ｇのγ-ＢＨＣが示すピークの高さ以下でなければならない。
塩化ナトリウム　塩化ナトリウム（特級）。当該農薬等の成分である物質の分析の妨害物質を含む場合には，ｎ-ヘキサン等の溶媒で洗浄したものを用いる。
オクタデシルシリル化シリカゲルミニカラム（1,000mg）　内径12〜13mmのポリエチレン製のカラム管に，オクタデシルシリル化シリカゲル1,000mgを充てんしたもの又はこれと同等の分離特性を有するものを用いる。
カラムクロマトグラフィー用シリカゲル（粒径63〜200μm）　カラムクロマトグラフィー用に製造したシリカゲル（粒径63〜200μm）を130℃で12時間以上加熱した後，デシケーター中で放冷する。
グラファイトカーボン及びアミノプロピルシリル化シリカゲル積層ミニカラム（500mg／500mg）　内径12〜13mmのポリエチレン製のカラム管に，グラファイトカーボン500mg及びアミノプロピルシリル化シリカゲル500mgを充てんしたもの又はこれと同等の分離特性を有するものを用いる。
ケイソウ土　化学分析用ケイソウ土を用いる。
トルエン　トルエン300mlをすり合わせ減圧濃縮器を用いて濃縮し，トルエンを除去する。この残留物をｎ-ヘキサン５mlに溶かし，その５μlを電子捕獲型検出器付きガスクロマトグラフに注入して試験するとき，ガスクロマトグラム上のｎ-ヘキサン以外のピークの高さは，２×10−11ｇのγ-ＢＨＣが示すピークの高さ以下でなければならない。
ｎ-ヘキサン　ｎ-ヘキサン300mlをすり合わせ減圧濃縮器を用いて５mlに濃縮し，この５μlを電子捕獲型検出器付きガスクロマトグラフに注入して試験するとき，ガスクロマトグラム上のｎ-ヘキサン以外のピークの高さは，２×10−11ｇのγ-ＢＨＣが示すピークの高さ以下でなければならない。
水　蒸留水を用いる。当該農薬等の成分である物質の分析の妨害物質を含む場合には，ｎ-ヘキサン等の溶媒で洗浄したものを用いる。
無水硫酸ナトリウム　無水硫酸ナトリウム（特級）。当該農薬等の成分である物質の分析の妨害物質を含む場合には，ｎ-ヘキサン等の溶媒で洗浄したものを用いる。
0.5mol／lリン酸緩衝液（pＨ7.0）　リン酸二ナトリウム（十二水和物）136.85ｇ及びリン酸一ナトリウム（二水和物）17.92ｇを量り採り，水に溶解して1,000mlとする。

３．標準品
プロファム　本品はプロファム99％以上を含む。
　融点　本品の融点は87℃である。

４．試験溶液の調製
ａ　抽出法
(1)　穀類，豆類及び種実類の場合
　検体を420μmの標準網ふるいを通るように粉砕した後，その10.0ｇを量り採り，水20mlを加え，15分間放置する。
　これにアセトニトリル50mlを加え，３分間細砕した後，ケイソウ土を１cmの厚さに敷いたろ紙を用いて吸引ろ過する。ろ紙上の残留物を採り，アセトニトリル20mlを加え，３分間細砕した後，上記と同様に操作して，ろ液を合わせ，アセトニトリルを加えて100mlとする。
　上記の溶液20mlを100mlの分液漏斗に採り，塩化ナトリウム10ｇ及び0.5mol／ｌリン酸緩衝液（pH7.0）20mlを加え，振とう機を用いて10分間激しく振り混ぜた後，静置し，水層を捨て，アセトニトリル層を採る。
　オクタデシルシリル化シリカゲルミニカラム（1,000mg）にアセトニトリル10mlを注入し，流出液は捨てる。このカラムに上記のアセトニトリル層を注入する。溶出液を50mlの三角フラスコに採った後，アセトニトリル２mlを上記のカラムに注入し，溶出液を上記の三角フラスコに合わせる。これに適量の無水硫酸ナトリウムを加え，時々振り混ぜながら15分間放置した後，すり合わせ減圧濃縮器中にろ過する。アセトニトリル10mlを用いて三角フラスコを洗い，その洗液でろ紙上の残留物を洗う操作を２回繰り返す。両洗液をその減圧濃縮器中に合わせ，40℃以下でアセトニトリルを除去する。
　この残留物をトルエン及びアセトニトリルの混液（１：３）２mlに溶解する。
(2)　果実，野菜，茶及びホップの場合
　果実及び野菜の場合は，検体約１kgを精密に量り，必要に応じ適量の水を量って加え，細切均一化した後，検体20.0ｇに相当する量を量り採る。
　茶及びホップの場合は，検体を粉砕した後，その5.00ｇを量り取り、水20mlを加えて，15分間放置する。
　これにアセトニトリル50mlを加え，３分間細砕した後，ケイソウ土を１cmの厚さに敷いたろ紙を用いて吸引ろ過する。ろ紙上の残留物を採り，アセトニトリル20mlを加え，３分間細砕した後，上記と同様に操作して，ろ液を合わせ，アセトニトリルを加えて100mlとする。
　上記の溶液20mlを100mlの分液漏斗に採り，塩化ナトリウム10ｇ及び0.5mol／lリン酸緩衝液（pＨ7.0）20mlを加え，振とう機を用いて10分間激しく振り混ぜた後，静置し，水層を捨てる。アセトニトリル層を50mlの三角フラスコに採り，適量の無水硫酸ナトリウムを加え，時々振り混ぜながら15分間放置した後，すり合わせ減圧濃縮器中にろ過する。アセトニトリル10mlを用いて三角フラスコを洗い，その洗液でろ紙上の残留物を洗う操作を２回繰り返す。両洗液をその減圧濃縮器中に合わせ，40℃以下でアセトニトリルを除去する。
　この残留物をトルエン及びアセトニトリルの混液（１：３）２mlに溶解する。
(3)　(1)及び(2)に掲げる食品以外の食品の場合
　(1)又は(2)の場合に準じて抽出を行う。
ｂ　精製法
　グラファイトカーボン及びアミノプロピルシリル化シリカゲル積層ミニカラム（500mg／500mg）にトルエン及びアセトニトリルの混液（１：３）10mlを注入し,流出液は捨てる。このカラムにａ　抽出法で得られた溶液を注入した後，トルエン及びアセトニトリルの混液（１：３）20mlを注入し，溶出液をすり合わせ減圧濃縮器中に採り，40℃以下でトルエン及びアセトニトリルを除去する。この残留物にアセトン及びｎ-ヘキサンの混液（１：１）を加えて溶かし，正確に２ml（穀類，豆類，種実類，茶及びホップの場合は１ml）として，これを試験溶液とする。

５．操作法
ａ　定性試験
　次の操作条件で試験を行う。試験結果は標準品と一致しなければならない。
操作条件
カラム　内径0.25mm，長さ30ｍのケイ酸ガラス製の細管に，ガスクロマトグラフィー用５％フェニル−メチルシリコンを0.25μmの厚さでコーティングしたものを用いる。
カラム温度　50℃で１分間保持し，その後毎分25℃で昇温し，125℃に達した後毎分10℃で昇温し，300℃に到達後6.5分間保持する。
試験溶液注入口温度　250℃
検出器　280℃で操作する。
ガス流量　キャリヤーガスとしてヘリウムを用いる。流速を至適条件に調整する。
注入方式　スプリットレス
測定質量数（m/z）　93，137及び179
ｂ　定量試験
　ａ　定性試験と同様の操作条件で得られた試験結果に基づき，ピーク高法又はピーク面積法により定量を行う。
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