アミトロール試験法
１．装置
蛍光検出器付き高速液体クロマトグラフ及び液体クロマトグラフ・質量分析計を用いる。
２．試薬・試液
次に示すもの以外は，第２ 添加物の部Ｃ 試薬・試液等の項に示すものを用いる。
| ア | セトン アセトン300mlをすり合わせ減圧濃縮器を用いて濃縮し，アセトンを除去する。この残留物をｎ-ヘキサン５mlに溶かし，その５μlを電子捕獲型検出器付きガスクロマトグラフに注入して試験するとき，ガスクロマトグラム上のｎ-ヘキサン以外のピークの高さは，２×10−11ｇのγ-ＢＨＣが示すピークの高さ以下でなければならない。 |
| エ | タノール エタノール300mlをすり合わせ減圧濃縮器を用いて濃縮し，エタノールを除去する。この残留物をｎ-ヘキサン５mlに溶かし，その５μlを電子捕獲型検出器付きガスクロマトグラフに注入して試験するとき，ガスクロマトグラム上のｎ-ヘキサン以外のピークの高さは，２×10−llｇのγ-ＢＨＣが示すピークの高さ以下でなければならない。 |
| ケ | イソウ土 学分析用ケイソウ土を用いる。 |
| 酢 | 酸緩衝液 0.05mol／l酢酸溶液800mlに0.05mol／l酢酸ナトリウム溶液を加えて1,000mlとする。 |
| 弱 | 酸性陽イオン交換樹脂 カラムクロマトグラフィー用に製造した弱酸性陽イオン交換樹脂を１mol／l塩酸を用いて洗い，次いで2.8％アンモニア水を用いて洗う。さらに１mol／l塩酸を用いて洗い，次いで水を用いて洗液が中性となるまで洗う。 |
| フ | ルオレスカミン 純度98％以上の試薬を用いる。 |
| 水 | 蒸留水を用いる。当該農薬等の成分である物質の分析の妨害物質を含む場合には，ｎ-ヘキサン等の溶媒で洗浄したものを用いる。 |
| リ | ン酸緩衝液 0.05mol／lリン酸一ナトリウム溶液に10％リン酸を加えてpH3.0に調整する。 |
３．標準品
| ア | ミトロール 本品はアミトロール98％以上を含む。 |
| 融点 | 本品の融点は157〜159℃である。 |
４．試験溶液の調製
ａ 抽出法
(1) 穀類，豆類，種実類，果実，野菜，抹茶及びホップの場合
穀類，豆類及び種実類の場合は，検体を420μmの標準網ふるいを通るように粉砕した後，その30.0ｇを量り採る。
果実及び野菜の場合は，検体約１kgを精密に量り，必要に応じ適量の水を量って加え，細切均一化した後，検体30.0ｇに相当する量を量り採る。
抹茶の場合は，検体30.0ｇを量り採る。
ホップの場合は，検体を粉砕した後，30.0ｇを量り採る。
これにエタノール80mlを加え，３分間細砕した後，ケイソウ土を１cmの厚さに敷いたろ紙を用いて吸引ろ過し，ろ液を200mlのメスシリンダーに移す。ろ紙上の残留物を採り，60％エタノール40mlを加え，３分間細砕した後，上記と同様に操作して，ろ液を上記のメスシリンダーに合わせ，ろ液の容量を量る。
上記のろ液10mlを200mlの丸底フラスコに移し，過酸化水素水１mlを加える。これに還流冷却器を取り付けて75℃の水浴中で30分間加熱した後，放冷する。
(2) 抹茶以外の茶の場合
検体10.0ｇを100℃の水600mlに浸し，室温で５分間放置した後，ろ過し，冷後ろ液12mlを200mlの丸底フラスコに移し，過酸化水素１mlを加える。これに還流冷却器を取り付けて75℃の水浴中で30分間加熱した後，放冷する。
(3) (1)及び(2)に掲げる食品以外の食品の場合
(1)の場合に準じて抽出を行う。
ｂ 精製法
内径10mm，長さ300mmのクロマトグラフ管に，強酸性陽イオン交換樹脂（粒径0.063〜0.156mm）１mlを水に懸濁したものを入れ，カラムの上端に少量の水が残る程度まで水を流出させる。このカラムに水５mlを注入し，流出液は捨てる。次いでａ 抽出法で得られた溶液を注入した後，水10mlで上記の丸底フラスコを洗い，洗液をカラムに注入し，流出液は捨てる。次いで2.8％アンモニア水12mlを注入し，溶出液をすり合わせ減圧濃縮器中に採り，ｎ-プロパノール30mlを加え，45℃以下で水及びｎ-プロパノールを除去する。この残留物に水５mlを加えて溶かす。
内径10mm，長さ300mmのクロマトグラフ管に，弱酸性陽イオン交換樹脂（粒径0.33〜0.50mm）５mlを水に懸濁したものを入れ，カラムの上端に少量の水が残る程度まで水を流出させる。このカラムに水10mlを注入し，流出液は捨てる。次いで上記の溶液を注入し，流出液は捨てる。次いで水50mlを注入し，流出液は捨てる。更に2.8％アンモニア水35mlを注入し，溶出液をすり合わせ減圧濃縮器中に採り，ｎ-プロパノール100mlを加え，45℃以下でアンモニア水及びｎ-プロパノールを除去する。
ｃ 蛍光化
この残留物に酢酸緩衝液２mlを加えて溶かす。この溶液１mlに0.25％フルオレスカミン・アセトン溶液100μlを加え，よく振り混ぜた後，１時間放置する。これに0.05mol／lホウ酸ナトリウム溶液0.5mlを加え，これを試験溶液とする。
５．操作法
ａ 定性試験
次の操作条件で試験を行う。試験結果は標準品について，４．試験溶液の調製のｃ 蛍光化と同様に操作して得られたものと一致しなければならない。
操作条件
| カ | ラム充てん剤 オクタデシルシリル化シリカゲル（粒径５μm）を用いる。 |
| カ | ラム管 内径4.6mm，長さ150mmのステンレス管を用いる。 |
| カ | ラム温度 40℃ |
| 検 | 出器 励起波長380nm，蛍光波長484nmで操作する。 |
| 移 | 動相 アセトニトリル及びリン酸緩衝液の混液（３：７）を用いる。アミトロールが約15分で流出する流速に調整する。 |
ａ 定性試験と同様の操作条件で得られた試験結果に基づき，ピーク高法又はピーク面積法により定量を行う。
ｃ 確認試験
ａ 定性試験と同様の操作条件で液体クロマトグラフィー質量分析を行う。試験結果は標準品について，４．試験溶液の調製のｃ 蛍光化と同様に操作して得られたものと一致しなければならない。また，必要に応じ，ピーク高法又はピーク面積法により定量を行う。