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スピロメシフェン試験法（畜水産物）

１． 分析対象化合物

スピロメシフェン
4-ヒドロキシ-3-メシチル-1-オキサスピロ［4.4］ノナ-3-エン-2-オン（以下、エノール体という。）

２． 装置

液体クロマトグラフ・質量分析計（LC/MS）又は液体クロマトグラフ・タンデム型質量分析計（LC/MS/MS）

３．試薬、試液

４．試験溶液の調製

１）抽出

試料5.00ｇにアセトニトリル、ギ酸及び水（80：１：20）混液100 mL並びにｎ-ヘキサン10 mLを加え、ホモジナイズした後、毎分3,000回転で５分間遠心分離を行う。アセトニトリル、ギ酸及び水混液層を採り、ｎ-ヘキサン層及び残留物にアセトニトリル、ギ酸及び水（80：１：20）混液50 mLを加えてホモジナイズし、上記と同様に遠心分離を行う。得られたアセトニトリル、ギ酸及び水混液層を合わせ、アセトニトリル、ギ酸及び水（80：１：20）混液を加えて正確に200 mLとし、この20 mLを採り、40℃以下で約４mLまで濃縮する。

２）精製

オクタデシルシリル化シリカゲルミニカラム（1,000 mg）にアセトニトリル及び水各10 mLを順次注入し、流出液は捨てる。このカラムに１）で得られた溶液に水10 mLを加えたものを注入した後、容器をアセトニトリル及び0.01％ギ酸溶液（２：３）混液10 mLで洗い、洗液をカラムに注入し、流出液は捨てる。次いでアセトニトリル及び0.01％ギ酸溶液（９：１）混液10 mLを注入し、溶出液に同混液を加えて正確に10 mLとしたものを試験溶液とする。

５．検量線の作成

スピロメシフェン標準品の0.0005〜0.01 mg/L及びエノール体標準品の0.00025〜0.005 mg/Lを含むアセトニトリル及び0.01％ギ酸溶液（９：１）混液の混合標準溶液を数点調製する。それぞれLC/MSの場合は10μL、LC/MS/MSの場合は４μLを注入し、ピーク高法又はピーク面積法で検量線を作成する。

６．定量

試験溶液10μLをLC/MSに、又は４μLをLC/MS/MSに注入し、５の検量線でスピロメシフェン及びエノール体の含量を求める。次式により、エノール体を含むスピロメシフェンの含量を求める。

７．確認試験

LC/MS又はLC/MS/MSにより確認する。

８．測定条件

９．定量限界

各化合物　0.01 mg/kg　（エノール体はスピロメシフェン換算）

10．留意事項

１）試験法の概要

スピロメシフェン及びエノール体を試料からアセトニトリル、ギ酸及び水（80：１：20）混液にｎ-ヘキサンを加えた溶液で抽出する。ｎ-ヘキサンを分離し、アセトニトリル、ギ酸及び水混液層をオクタデシルシリル化シリカゲルミニカラムで精製した後、LC/MS又はLC/MS/MSで測定及び確認する方法である。なお、スピロメシフェン及びエノール体のそれぞれについて定量を行い、エノール体についてはその含量に換算係数を乗じてスピロメシフェンの含量に変換し、これらの和を分析値とする。

２）注意点

(1) スピロメシフェンからエノール体への変換を抑えるためにギ酸酸性下にて抽出を行う。

(2) 精製が不十分な場合は、グラファイトカーボンミニカラム（250 mg）による精製を追加するとよい。

操作概要を以下に示す。オクタデシルシリル化シリカゲルミニカラム精製操作で、アセトニトリル及び0.01％ギ酸溶液（２：３）混液10 mLをカラムに注入し、流出液を捨てた後、予めアセトニトリル及び0.01％ギ酸溶液（９：１）混液５mLで洗浄したグラファイトカーボンミニカラムをオクタデシルシリル化シリカゲルミニカラムの下部に接続する。この連結カラムにアセトニトリル及び0.01％ギ酸溶液（９：１）混液10 mLを注入し、溶出液にアセトニトリル及び0.01％ギ酸溶液（９：１）混液を加えて正確に10 mLとしたものを試験溶液とする。

11．参考文献

なし

12．類型

Ｃ

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