オキソリニック酸試験法（農産物）
１．分析対象化合物
オキソリニック酸
２．装置
蛍光光度型検出器付き高速液体クロマトグラフ（HPLC-FL）
液体クロマトグラフ・質量分析計（LC/MS）
３．試薬、試液
次に示すもの以外は、総則の３に示すものを用いる。
| 液 | 相分離ろ紙 液相分離ろ紙（化学分析用ろ紙をシリコン処理したもの） |
| ト | リ-ｎ-オクチルアミン トリ-ｎ-オクチルアミン（純度97％以上のもの） |
| オキソリニック酸標準品 本品はオキソリニック酸99％以上を含み、融点は250℃以上である。 |
４．試験溶液の調製
１）抽出
穀類の場合は、試料10.0ｇに水20 mLを加え、２時間放置する。
果実、野菜及びハーブの場合は、試料20.0ｇを量り採る。
これに12 mol/L塩酸及びメタノール（１：９）混液100 mLを加え、振とうした後、ガラス繊維ろ紙を用いて吸引ろ過する。ろ紙上の残留物を同混液50 mLで洗浄し、ろ液を合わせ、５％塩化ナトリウム溶液200 mLを加え、ジクロロメタン50 mLずつで２回振とう抽出する。ジクロロメタン層を合わせ、液相分離ろ紙を用いてろ過し、40℃以下で濃縮し、溶媒を除去する。
この残留物を４mol/L水酸化カリウム溶液及びメタノール（１：３）混液５mLに溶かし、10％塩化ナトリウム溶液50 mL及びジクロロメタン50 mLを加え、振とうする。水層を採り、これに1.2 mol/L塩酸30 mLを加え、ジクロロメタン50 mLずつで２回振とう抽出する。ジクロロメタン層を合わせ、液相分離ろ紙を用いてろ過し、40℃以下で濃縮し、溶媒を除去する。この残留物をジクロロメタン10 mLに溶かす。
２）精製
シリカゲルミニカラム（690 mg）にジクロロメタン５mLを注入し、流出液は捨てる。このカラムに１）で得られた溶液を注入し、流出液は捨てる。さらにアセトン８mL及び8.5％リン酸溶液0.8 mLを順次注入し、各流出液は捨てる。次いで、ジクロロメタン15 mLを注入し、溶出液を40℃以下で濃縮し、溶媒を除去する。この残留物を４mol/L水酸化カリウム及びメタノール （１：３）混液に溶解し、正確に８mL（穀類の場合は４mL）としたものを試験溶液とする。
５．検量線の作成
オキソリニック酸標準品を４mol/L水酸化カリウム溶液及びメタノール（１：３）混液に溶解し、0.025〜0.5 mg/Lの標準溶液を調製する。この20μLをHPLCに注入してピーク高法又はピーク面積法で検量線を作成する。
６．定量
試験溶液20μLをHPLCに注入し、５の検量線でオキソリニック酸の含量を求める。
７．確認試験
LC/MSにより確認する。
８．測定条件
HPLC
| 検 | 出器：FL（励起波長270 nm、蛍光波長370 nm） |
| カ | ラム：オクタデシルシリル化シリカゲル、内径２〜６mm、長さ150〜300 mm |
| カ | ラム温度：40℃ |
| 移 | 動相：アセトニトリル、0.5％クエン酸溶液及び0.3％トリ-ｎ-オクチルアミン・テトラヒドロフラン溶液（１：８：１）混液 |
| 流 | 量：１mL/min |
| 保 | 持時間の目安：６分 |
LC/MS
| カ | ラム：オクタデシルシリル化シリカゲル（粒径５μm） 内径２mm、長さ150 mm |
| カ | ラム温度：40℃ |
| 移 | 動相：0.01%酢酸及びアセトニトリル（７：３）混液から100％アセトニトリルまでの濃度勾配を20分間で行う。 |
| イ | オン化モード：ESI（+） |
| 主 | なイオン（m/z）：262 |
| 保 | 持時間の目安：10分 |
９．定量限界
0.01 mg/kg
10．留意事項
１）試験法の概要
オキソリニック酸を試料から塩酸酸性下でメタノール抽出し、ジクロロメタンに転溶する。酸・アルカリ分配及びシリカゲルミニカラムによる精製の後、HPLC-FLで測定し、LC/MSで確認する方法である。
11．参考文献
| １ | ）上路雅子ら、2002年度版残留農薬分析法、391頁、ソフトサイエンス社 |
12．類型
| Ａ | （環境省告示第73号「オキソリニック酸試験法」平成７年11月28日） |