| １． | 分析対象化合物 フルベンダゾール |
| ２． | 装置 紫外分光光度型検出器付き高速液体クロマトグラフを用いる。 |
| ３． | 試薬・試液 次に示すもの以外は，総則の３に示すものを用いる。 アルミナ(酸性)ミニカラム(1,850mg) 内径8〜9mmのポリエチレン製のカラム管に，カラムクロマトグラフィー用に製造したアルミナ(酸性)1,850mgを充てんしたもの又はこれと同等の分離特性を有するものを用いる。 |
| ４． | 標準品 フルベンダゾール 本品はフルベンダゾール99％以上を含む。 融点 本品の融点は260°である。 |
| ５． | 試験溶液の調製 a 肝臓の場合 (1) 抽出法 肝臓の場合は，細切均一化した後，その10.0gを量り採り，酢酸エチル50mlを加え，細砕した後，毎分2,600回転で5分間遠心分離を行い，上澄液を200mlの三角フラスコ中に移す。沈殿に酢酸エチル50mlを加え，細砕した後，上記と同様の条件で遠心分離を行い，上澄液をその三角フラスコ中に合わせ，適量の無水硫酸ナトリウムを加え，時々振り混ぜながら15分間放置した後，すり合わせ減圧濃縮器中にろ過し，40°以下で酢酸エチルを除去する。この残留物にアセトニトリル50mlを加えて溶かし，200mlの分液漏斗(I)中に移し，アセトニトリル飽和n−ヘキサン50mlを加え，振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後，静置し，アセトニトリル層を200mlの分液漏斗(II)中に移す。これにアセトニトリル飽和n―ヘキサン50mlを加え，振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後，静置し，アセトニトリル層をすり合わせ減圧濃縮器中に移し，n−ヘキサン層を分液漏斗(I)中に合わせ，アセトニトリル10mlを加え，振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後，静置し，アセトニトリル層をそのすり合わせ減圧濃縮器中に合わせ，40°以下でアセトニトリルを除去する。この残留物に酢酸エチル10mlを加えて溶かす。 (2) 精製法 イ アルミナ(酸性)カラムクロマトグラム アルミナ(酸性)ミニカラム(1,850mg)に，酢酸エチル10mlを注入し，流出液は捨てる。このカラムに(1) 抽出法で得られた溶液を注入した後，酢酸エチル10mlを注入し，流出液は捨てる。このカラムに酢酸エチル及び無水エタノールの混液(4：1)15mlを加え，流出液をすり合わせ減圧濃縮器中に採り，40°以下で酢酸エチル及びエタノールを除去する。この残留物にメタノール5mlを加えて溶かす。 ロ オクタデシルシリル化シリカゲルカラムクロマトグラム オクタデシルシリル化シリカゲルミニカラム(360mg)に，メタノール10mlを注入し，流出液は捨てる。このカラムにイ アルミナ(酸性)カラムクロマトグラムで得られた溶液を注入した後，メタノール10mlを注入し，流出液をすり合わせ減圧濃縮器中に採り，40°以下でメタノールを除去する。この残留物にアセトニトリル及び水の混液(7：13)1.0mlを加えて溶かし，これを試験溶液とする。 b 筋肉の場合 (1) 抽出法 a 肝臓の場合の(1) 抽出法を準用する。この場合において，同(1) 抽出法中「細切均一化し」とあるのは，「可能な限り脂肪層を除き，細切均一化し」と読み替えるものとする。 (2) 精製法 アルミナ(酸性)ミニカラム(1,850mg)に，酢酸エチル10mlを注入し，流出液は捨てる。このカラムに(1) 抽出法で得られた溶液を注入した後，酢酸エチル10mlを注入し，流出液は捨てる。このカラムに酢酸エチル及び無水エタノールの混液(4：1)15mlを加え，流出液をすり合わせ減圧濃縮器中に採り，40°以下で酢酸エチル及びエタノールを除去する。この残留物にアセトニトリル及び水の混液(7：13)1.0mlを加えて溶かし，これを試験溶液とする。 ｃ 卵の場合 (1) 抽出法 卵の殻を除き，十分均一化した後，その2.5gを量り採り，酢酸エチル50mlを加え，均一化した後，毎分2,600回転で5分間遠心分離を行い，上澄液を200mlの三角フラスコ中に移す。沈殿に酢酸エチル50mlを加え，均一化した後，上記と同様の条件で遠心分離を行い，上澄液をその三角フラスコ中に合わせ，適量の無水硫酸ナトリウムを加え，時々振り混ぜながら15分間放置した後，すり合わせ減圧濃縮器中にろ過し，40°以下で酢酸エチルを除去する。この残留物にアセトニトリル50mlを加えて溶かし，200mlの分液漏斗(I)中に移し，アセトニトリル飽和n−ヘキサン50mlを加え，振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後，静置し，アセトニトリル層を200mlの分液漏斗(II)中に移す。これにアセトニトリル飽和n―ヘキサン50mlを加え，振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後，静置し，アセトニトリル層をすり合わせ減圧濃縮器中に移し，n−ヘキサン層を分液漏斗(I)中に合わせ，アセトニトリル10mlを加え，振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後，静置し，アセトニトリル層をそのすり合わせ減圧濃縮器中に合わせ，40°以下でアセトニトリルを除去する。この残留物に酢酸エチル10mlを加えて溶かす。 (2) 精製法 a 筋肉の場合の (2) 精製法を準用する |
| ６． | 操作法 a 定性試験 次の操作条件で試験を行う。試験結果は標準品と一致しなければならない。 操作条件 カラム充てん剤 オクタデシルシリル化シリカゲル(粒径5μm)を用いる。 カラム管 内径4.0〜6.0mm，長さ150mmのステンレス管を用いる。 カラム温度 40° 検出器 吸光波長313nmで操作する 移動相 アセトニトリル及び水の混液(7：13)を用いる。フルベンダゾールが約10分で流出する流速に調整する。 b 定量試験 a 定性試験と同様の操作条件で得られた試験結果に基づき，ピーク高法又はピーク面積法により定量を行う。 |
| ７． | 定量限界 筋肉及び肝臓 0.002 mg/kg， 卵 0.04 mg/kg |
| ８． | 留意事項 |
| ９． | 参考文献 なし |
| １０． | 類型 A |