| １． | 分析対象化合物 フルアジホップ、フルアジホップブチル、フルアジホップP、フルアジホップPブチル |
| ２． | 装置 アルカリ熱イオン化検出器又は高感度窒素・リン検出器付きガスクロマトグラフ及びガスクロマトグラフ・質量分析計を用いる。 |
| ３． | 試薬、試液 次に示すもの以外は, 総則の３に示すものを用いる。 ブチルエステル化剤 三フッ化ホウ素エーテル錯体10gをn―ブタノール25mlに溶かす。 |
| ４． | 標準品 フルアジホップブチル 本品はフルアジホップブチル98％以上を含む。 融点 本品の融点は13°である。 |
| ５． | 試験溶液の調製 a 抽出法 (1) 豆類及び種実類の場合 検体を420μmの標準網ふるいを通るように粉砕した後、その10.0gを量り採り、水20mlを加え、2時間放置する。 これにアセトン100ml及び4mol／l塩酸5mlを加え、3分間細砕した後、ケイソウ土を1cmの厚さに敷いたろ紙を用いてすり合わせ減圧濃縮器中に吸引ろ過する。ろ紙上の残留物を採り、アセトン50mlを加え、3分間細砕した後、上記と同様に操作して、ろ液をその減圧濃縮器中に合わせ、40°以下で約30mlに濃縮する。 これをあらかじめ10％塩化ナトリウム溶液100mlを入れた300mlの分液漏斗に移す。酢酸エチル100mlを用いて上記の減圧濃縮器のナス型フラスコを洗い、洗液を上記の分液漏斗に合わせる。振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後、静置し、酢酸エチル層を300mlの三角フラスコに移す。水層に酢酸エチル50mlを加え、上記と同様に操作して、酢酸エチル層を上記の三角フラスコに合わせる。これに適量の無水硫酸ナトリウムを加え、時々振り混ぜながら15分間放置した後、すり合わせ減圧濃縮器中にろ過する。次いで酢酸エチル20mlを用いて三角フラスコを洗い、その洗液でろ紙上の残留物を洗う操作を2回繰り返す。両洗液をその減圧濃縮器中に合わせ、40°以下で約1mlに濃縮し、更に室温で窒素気流下で乾固する。 この残留物にn−ヘキサン飽和アセトニトリル30mlを加え、100mlの分液漏斗に移す。これにn−ヘキサン30mlを加え、振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後、静置し、アセトニトリル層をすり合わせ減圧濃縮器中に移す。n−ヘキサン層にn−ヘキサン飽和アセトニトリル30mlを加え、上記と同様の操作を2回繰り返し、アセトニトリル層をその減圧濃縮器中に合わせ、40°以下で約1mlに濃縮し、更に室温で窒素気流下で乾固する。 (2) 果実、野菜及びホップの場合 果実及び野菜の場合は、検体約1kgを精密に量り、必要に応じ適量の水を量つて加え、細切均一化した後、検体20.0gに相当する量を量り採る。 ホップの場合は検体を粉砕した後、検体5.00gを量り採り、水20mlを加え、2時間放置する。 これにアセトン100ml及び4mol／l塩酸5mlを加え、3分間細砕した後、ケイソウ土を1cmの厚さに敷いたろ紙を用いてすり合わせ減圧濃縮器中に吸引ろ過する。ろ紙上の残留物を採り、アセトン50mlを加え、3分間細砕した後、上記と同様に操作して、ろ液をその減圧濃縮器中に合わせ、40°以下で約30mlに濃縮する。 これをあらかじめ10％塩化ナトリウム溶液100mlを入れた300mlの分液漏斗に移す。酢酸エチル100mlを用いて上記の減圧濃縮器のナス型フラスコを洗い、洗液を上記の分液漏斗に合わせる。振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後、静置し、酢酸エチル層を300mlの三角フラスコに移す。水層に酢酸エチル50mlを加え、上記と同様に操作して、酢酸エチル層を上記の三角フラスコに合わせる。これに適量の無水硫酸ナトリウムを加え、時々振り混ぜながら15分間放置した後、すり合わせ減圧濃縮器中にろ過する。次いで酢酸エチル20mlを用いて三角フラスコを洗い、その洗液でろ紙上の残留物を洗う操作を2回繰り返す。両洗液をその減圧濃縮器中に合わせ、40°以下で約1mlに濃縮し、更に室温で窒素気流下で乾固する。 b 加水分解 a 抽出法で得られた残留物にメタノール20mlを加えて溶かし、100mlのナス型フラスコに移し、1.5mol／l水酸化ナトリウム溶液10mlを加える。これに還流冷却器を取り付けて、80°の水浴中で30分間加熱した後、放冷する。これをすり合わせ減圧濃縮器中に移し、40°以下で大部分のメタノールを除去する。この残留物をガラスろ過器(細孔記号G3)を用いて吸引ろ過し、ろ液を300mlの分液漏斗(I)に移す。ガラスろ過器上の残留物を少量のアセトン及び水を用いて洗い、洗液を上記の分液漏斗に合わせる。これにエーテル50ml及び10％塩化ナトリウム溶液100mlを加え、振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後、静置し、水層を300mlの分液漏斗(II)に移す。これに4mol／l塩酸を加えてpH1以下に調整し、酢酸エチル50mlを加え、振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後、静置し、酢酸エチル層を300mlの三角フラスコに移す。水層に酢酸エチル50mlを加え、上記と同様に操作して、酢酸エチル層を上記の三角フラスコに合わせる。これに適量の無水硫酸ナトリウムを加え、時々振り混ぜながら15分間放置した後、すり合わせ減圧濃縮器中にろ過する。次いで酢酸エチル20mlを用いて三角フラスコを洗い、その洗液でろ紙上の残留物を洗う操作を2回繰り返す。両洗液をその減圧濃縮器中に合わせ、40°以下で約1mlに濃縮する。 c ブチルエステル化 b 加水分解で得られた溶液を20mlのナス型フラスコに移し、更に室温で窒素気流下で乾固した後、ブチルエステル化剤1mlを加える。上記のナス型フラスコに還流冷却器を取り付けて、90°の水浴中で30分間加熱した後、放冷する。これをあらかじめ10％塩化ナトリウム溶液50ml及びn−ヘキサン50mlを入れた200ml分液漏斗に移し、振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後、静置し、n−ヘキサン層を200mlの三角フラスコに移す。水層にn−ヘキサン50mlを加え、上記と同様に操作して、n−ヘキサン層を上記の三角フラスコに合わせる。これに適量の無水硫酸ナトリウムを加え、時々振り混ぜながら15分間放置した後、すり合わせ減圧濃縮器中にろ過する。次いでn−ヘキサン10mlを用いて三角フラスコを洗い、その洗液でろ紙上の残留物を洗う操作を2回繰り返す。両洗液をその減圧濃縮器中に合わせ、40°以下で約2mlに濃縮する。 d 精製法 内径15mm、長さ300mmのクロマトグラフ管に、カラムクロマトグラフィー用合成ケイ酸マグネシウム5gをn−ヘキサンに懸濁したもの、次いでその上に無水硫酸ナトリウム約5gを入れ、カラムの上端に少量のn−ヘキサンが残る程度までn−ヘキサンを流出させる。このカラムにc ブチルエステル化で得られた溶液を注入した後、エーテル及びn−ヘキサンの混液(1：19)50mlを注入し、流出液は捨てる。次いでエーテル及びn−ヘキサンの混液(1：1)100mlを注入し、流出液をすり合わせ減圧濃縮器中に採り、40°以下で約1mlに濃縮し、更に室温で窒素気流下で乾固する。この残留物にアセトンを加えて溶かし、正確に5mlとして、これを試験溶液とする。 |
| ６． | 操作法 a 定性試験 次の操作条件で試験を行う。試験結果は標準品と一致しなければならない。 操作条件 カラム 内径0.25mm、長さ30mのケイ酸ガラス製の細管に、ガスクロマトグラフィー用5％フェニル―メチルシリコンを0.25μmの厚さでコーティングしたもの。 カラム温度 50°で1分間保持し、その後毎分25°で昇温する。125°に到達後、毎分10°で昇温し、300°に到達後5分間保持する。 試験溶液注入口温度 260° 検出器 300°で操作する。 ガス流量 キャリヤーガスとしてヘリウムを用いる。フルアジホップブチルが約15分で流出する流速に調整する。空気及び水素の流量を至適条件に調整する。 b 定量試験 a 定性試験と同様の操作条件で得られた試験結果に基づき、ピーク高法又はピーク面積法により定量を行う。 c 確認試験 b 定性試験と同様の操作条件でガスクロマトグラフィー・質量分析を行う。試験結果は標準品と一致しなければならない。また、必要に応じ、ピーク高法又はピーク面積法により定量を行う。 |
| ７． | 定量限界 0.01 mg/kg |
| ８． | 留意事項 フルアジホップは、フルアジホップをフルアジホップブチルに変換した後、フルアジホップブチルについて定量を行い、これを分析値とすること。 フルアジホップの分析値には、フルアジホップ、フルアジホップブチル、フルアジホップP及びフルアジホップPブチルが含まれる。 |
| ９． | 参考文献 なし |
| １０． | 類型 A |