| １． | 分析対象化合物 |
| 農薬等の成分である物質 | 分析対象化合物 |
| チアベンダゾール | チアベンダゾール，5−ヒドロキシチアベンダゾール |
| 5−プロピルスルホニル−1H−ベンズイミダゾール−2−アミン | 5−プロピルスルホニル−1H−ベンズイミダゾール−2−アミン |
| ２． | 装置 紫外分光光度型検出器及び蛍光検出器付き高速液体クロマトグラフを用いる。 |
| ３． | 試薬・試液 次に示すもの以外は，総則の３に示すものを用いる。 アルミナ(中性)ミニカラム(1,850mg) 内径8〜9mmのポリエチレン製のカラム管に，カラムクロマトグラフィー用に製造したアルミナ(中性)1,850mgを充てんしたもの又はこれと同等の分離特性を有するものを用いる。 |
| ４． | 標準品 |
| ５． | 試験溶液の調製 a 抽出法 (1) 筋肉，脂肪，肝臓及び腎臓の場合 検体を細切均一化した後，その5.00gを量り採り，酢酸エチル50ml及び4mol／l炭酸カリウム溶液1mlを加え，細砕した後，毎分2,600回転で5分間遠心分離を行い，上澄液を200mlの三角フラスコ中に移す。沈殿に酢酸エチル50mlを加え，細砕した後，上記と同様の条件で遠心分離を行い，上澄液をその三角フラスコ中に合わせる。これに適量の無水硫酸ナトリウムを加え，時々振り混ぜながら15分間放置した後，すり合わせ減圧濃縮器中にろ過し，40°以下で酢酸エチルを除去する。この残留物にアセトニトリル50mlを加えて溶かし，200mlの分液漏斗(I)中に移す。これにアセトニトリル飽和n−ヘキサン50mlを加え，振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後，静置し，アセトニトリル層を200mlの分液漏斗(II)中に移す。これにアセトニトリル飽和n−ヘキサン50mlを加え，振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後，静置し，アセトニトリル層をすり合わせ減圧濃縮器中に移し，n−ヘキサン層を分液漏斗(I)中に合わせる。これにアセトニトリル10mlを加え，振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後，静置し，アセトニトリル層をそのすり合わせ減圧濃縮器中に合わせ，40°以下でアセトニトリルを除去する。この残留物に酢酸エチル1mlを加えて溶かす。 (2) 乳の場合 試料5.00gを量り採り，酢酸エチル50ml及び4mol／l炭酸カリウム溶液1mlを加え，毎分2,600回転で5分間遠心分離を行い，上澄液を200mlの三角フラスコ中に移す。沈殿に酢酸エチル50mlを加え，細砕した後，前記と同様の条件で遠心分離を行い，上澄液をその三角フラスコ中に合わせる。これに適量の無水硫酸ナトリウムを加え，時々振り混ぜながら15分間放置した後，すり合わせ減圧濃縮器中にろ過し，40°以下で酢酸エチルを除去する。この残留物にアセトニトリル50mlを加えて溶かし，200mlの分液漏斗(I)中に移す。これにアセトニトリル飽和n−ヘキサン50mlを加え，振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後，静置し，アセトニトリル層を200mlの分液漏斗(II)中に移す。これにアセトニトリル飽和n―ヘキサン50mlを加え，振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後，静置し，アセトニトリル層をすり合わせ減圧濃縮器中に移し，n―ヘキサン層を分液漏斗(I)中に合わせる。これにアセトニトリル10mlを加え，振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後，静置し，アセトニトリル層をそのすり合わせ減圧濃縮器中に合わせ，40°以下でアセトニトリルを除去する。この残留物に酢酸エチル1mlを加えて溶かす。 b 精製法 アルミナ(中性)ミニカラム(1,850mg)に，酢酸エチル10mlを注入し，流出液は捨てる。このカラムにa 抽出法で得られた溶液を注入し，流出液は捨てる。このカラムに酢酸エチル及びメタノールの混液(3：7)15mlを注入し，流出液をすり合わせ減圧濃縮器中に採り，40°以下で酢酸エチル及びメタノールを除去する。この残留物にアセトニトリル及び0.025mol／lリン酸1ナトリウム溶液の混液(1：4)1.0mlを加えて溶かし，これを試験溶液とする。 |
| ６． | 操作法 a 定性試験 次の操作条件で試験を行う。試験結果は標準品と一致しなければならない。 操作条件 カラム充てん剤 オクタデシルシリル化シリカゲル(粒径5μm)を用いる。 カラム管 内径4.0〜6.0mm，長さ150mmのステンレス管を用いる。 カラム温度 40° 検出器 チアベンダゾール及び5−プロピルスルホニル−1H−ベンズイミダゾール−2−アミンの試験を行う場合は，励起波長300nm，蛍光波長370nmで操作する。 5−ヒドロキシチアベンダゾールの試験を行う場合は，吸光波長298nmで操作する。 移動相 アセトニトリル及び0.025mol／lリン酸一ナトリウム溶液の混液(1：4)を用いる。チアベンダゾールが約10分で流出する流速に調整する。 b 定量試験 a 定性試験と同様の操作条件で得られた試験結果に基づき，ピーク高法又はピーク面積法により定量を行う。 |
| ７． | 定量限界 チアベンダゾール 0.002 mg/kg ５−ヒドロキシチアベンダゾール 0.02 mg/kg ５−プロピルスルホニル−１H−ベンズイミダゾール−２−アミン 0.01mg/kg |
| ８． | 留意事項 （１）試験溶液の調製 精製法において用いるアルミナ(中性)ミニカラムは，予め標準品を用いて，その保持，溶出性能及び精製効果を確認すると伴に，定量限界がチアベンダゾールについては0.002 mg/kg以下、５−ヒドロキシチアベンダゾールについては0.02 mg/kg以下、５−プロピルスルホニル−１H−ベンズイミダゾール−２−アミンについては0.01mg/kg以下であることを確認すること。 （２）その他 以下の試験法については本通知の試験法と同等以上の性能を有すると認められる試験法であるので留意されたい。 チアベンダゾール及び５−プロピルスルホニル−１H−ベンズイミダゾール−２−アミン試験法の５．試験溶液の調製のａ 抽出法を次の方法によるもの a 抽出法 検体を細切均一化した後，その5.00gを量り採り，飽和炭酸水素ナトリウム及び飽和炭酸ナトリウムの混液（1：9）1ml及び酢酸エチル50mlを加え，細砕した後，毎分2,600回転で5分間遠心分離を行い，上澄液を200mlの三角フラスコ中に移す．以下５．試験溶液の調製のａ 抽出法と同様に操作する。 |
| ９． | 参考文献 なし |
| １０． | 類型 A |