| １． | 分析対象化合物 イマザモックス、イマザモックスアンモニウム塩 |
| ２． | 装置 紫外分光光度型検出器付き高速液体クロマトグラフ及び液体クロマトグラフ・質量分析計を用いる。 |
| ３． | 試薬、試液 次に示すもの以外は, 総則の３に示すものを用いる。 塩酸溶液 水500mlに1mol／l塩酸を加えて、pH2.5に調整する。 |
| ４． | 標準品 イマザモックス 本品はイマザモックス97％以上を含む。 融点 本品の融点は165〜167°である。 |
| ５． | 試験溶液の調製 a 抽出法 検体を420μmの標準網ふるいを通るように粉砕した後、その10.0gを量り採る。 これに0.02mol／l塩酸及びメタノールの混液(2：3)100mlを加え、3分間細砕した後、ケイソウ土を1cmの厚さに敷いたガラス繊維ろ紙を用いてすり合わせ減圧濃縮器中に吸引ろ過する。ろ紙上の残留物を採り、0.02mol／l塩酸及びメタノールの混液(2：3)50mlを加え、3分間細砕した後、上記と同様に操作して、ろ液をその減圧濃縮器中に合わせ、50°以下で約10mlに濃縮する。 これに酢酸亜鉛0.5gを加え、10秒間穏やかに振り混ぜ、5分間放置した後、ガラス繊維ろ紙を用いて吸引ろ過する。使用した減圧濃縮器のナス型フラスコを水10mlで洗い、その洗液でろ紙上の残留物を洗い、吸引ろ過する。全ろ液を100mlの三角フラスコに合わせる。 b 精製法 (1) オクタデシルシリル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー オクタデシルシリル化シリカゲルミニカラム(1,000mg)にメタノール5mlを注入し、流出液は捨てる。次いで水5mlを注入し、流出液は捨てる。このカラムにa 抽出法で得られた溶液を注入した後、塩酸溶液5mlを注入し、流出液は捨てる。次いで塩酸溶液及びメタノールの混液(1：1)10mlを注入し、流出液を50mlの三角フラスコに採る。 (2) ベンゼンスルホニルプロピルシリル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー ベンゼンスルホニルプロピルシリル化シリカゲルミニカラム(1,000mg)にメタノール5mlを注入し、流出液は捨てる。次いで塩酸溶液5mlを注入し、流出液は捨てる。このカラムに(1) オクタデシルシリル化シリカゲルカラムクロマトグラフィーで得られた溶液を注入した後、メタノール5mlを注入し、流出液は捨てる。次いで飽和塩化カリウム・メタノール溶液30mlを注入し、流出液を100mlのすり合わせ減圧濃縮器中に採り、40°以下でメタノールを除去する。この残留物に塩酸溶液10mlを加えて溶かす。 (3) シクロヘキシルシリル化シリカゲルカラム及びアミノプロピルシリル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー シクロヘキシルシリル化シリカゲルミニカラム(1,000mg)にメタノール5mlを注入し、流出液は捨てる。次いで塩酸溶液を5mlを注入し、流出液は捨てる。このカラムに(2) ベンゼンスルホニルプロピルシリル化シリカゲルカラムクロマトグラフィーで得られた溶液を注入し、流出液を捨てた後、約1分間吸引を続け、水分を除去する。 別に、アミノプロピルシリル化シリカゲルミニカラム(1,000mg)にメタノール5mlを注入し、流出液は捨てる。このカラムの上に上記のシクロヘキシルシリル化シリカゲルミニカラムを連結し、メタノール5mlを注入し、流出液を捨てた後、シクロヘキシルシリル化シリカゲルミニカラムを分離して捨てる。アミノプロピルシリル化シリカゲルミニカラムにメタノール5mlを注入し、流出液は捨てる。次いでアンモニア水及びメタノールの混液(1：199)15mlを注入し、流出液を50mlのすり合わせ減圧濃縮器中に採り、40°以下でメタノールを除去する。この残留物にメタノール1mlとアセトニトリル25mlを加えて溶かし、100mlの分液漏斗に移し、アセトニトリル飽和n−ヘキサン25mlを加えて5分間激しく振とうする。アセトニトリル層をすり合わせ減圧濃縮器中に採り、40°以下でアセトニトリルを除去する。この残留物に水及びメタノールの混液(3：2)を加えて溶かし、正確に2mlとして、これを試験溶液とする。 |
| ６． | 操作法 a 定性試験 次の操作条件で試験を行う。試験結果は標準品と一致しなければならない。 操作条件 カラム充てん剤 オクタデシルシリル化シリカゲル(粒径5μm)を用いる。 クロマトグラフ管 内径4.0〜6.0mm、長さ250mmのステンレス管を用いる。 カラム温度 40° 検出器 波長254nmで操作する。 移動相 メタノール及び0.01mol／lリン酸の混液(2：3)を用いる。イマザモックスが約18分で流出する流速に調整する。 b 定量試験 a 定性試験と同様の操作条件で得られた試験結果に基づき、ピーク高法又はピーク面積法により定量を行い、イマザモックスの含量を求める。さらに次式により、イマザモックスアンモニウム塩の含量を求める。 イマザモックスアンモニウム塩の含量(ppm)＝イマザモックスの含量(ppm)×1.06 c 確認試験 次の操作条件で5. 試験溶液の調製 b 精製法で得られた試験溶液について液体クロマトグラフィー・質量分析を行う。試験結果は標準品と一致しなければならない。また、必要に応じ、ピーク面積法により定量を行う。 操作条件 カラム充てん剤 オクタデシルシリル化シリカゲル(粒径5μm)を用いる。 クロマトグラフ管 内径2.0mm、長さ150mmのステンレス管を用いる。 カラム温度 40° 移動相 水及びメタノールの混液(3：2)を用いる。イマザモックスが約6分で流出する流速に調整する。 |
| ７． | 定量限界 0.01 mg/kg |
| ８． | 留意事項 イマザモックスアンモニウム塩は、イマザモックスについて定量を行い、その含量に係数を乗じてイマザモックスアンモニウム塩の含量に換算し、これを分析値とすること。 |
| ９． | 参考文献 なし |
| １０． | 類型 A |