2．試薬・試液

次に示すもの以外は、食品、添加物等の規格基準第2添加物の部C試薬・試液等の項に示すものを用いる。

トリメチルシリル化剤　N，O―ビス(トリメチルシリル)トリフルオロアセトアミド0.5mLに酢酸エチルを加えて20mLとする。

パツリン標準溶液　パツリンを酢酸エチル又はアセトニトリルを加えて溶かし、調製する。

3．標準品

パツリン　本品はパツリン98％以上を含む。

融点　本品の融点は110～111℃である。

4．試験溶液の調製

1)　抽出法

検体5.0g(希釈して飲用に供する清涼飲料水にあってはその飲用に際して希釈する倍数の水で、濃縮した原料用果汁にあってはその濃縮した倍数の水で希釈したもの)を正確に採り、30～50mLの共栓付き試験管に入れ、酢酸エチル10mLを加える。1分間激しく振り混ぜた後、静置し、酢酸エチル層を他の30～50mLの共栓付き試験管に移す。水層に酢酸エチル10mLを加え、上記と同様に操作して、酢酸エチル層を上記の共栓付き試験管中に合わせる操作を2回繰り返す。

2)　精製法

1)で得られた溶液に1.5％炭酸ナトリウム溶液2mLを加え、速やかに10～20秒間激しく振り混ぜる。酢酸エチル層を、約10gの硫酸ナトリウムを載せた漏斗又は液層分離ろ紙を用いて減圧濃縮器中にろ過する。残った炭酸ナトリウム層に酢酸エチル5mLを加え30秒間激しく振り混ぜた後、上記と同様に操作して、ろ液をその減圧濃縮器中に合わせ、40℃以下で約2mLに濃縮する。これをガラス試験管又はバイアルに移す。次いで、少量の酢酸エチルを用いて減圧濃縮器を洗い、上記の容器に合わせる操作を3回繰り返し、40℃以下で窒素気流下で酢酸エチルを除去する。この残留物に酢酸水溶液(pH3.6～4.0)1.0mLを正確に加えて溶かし、激しく振り混ぜた後、孔径0.45μmのメンブランフィルターを用いてろ過し、これを試験溶液とする。

ガスクロマトグラフ・質量分析計用試験溶液にあっては、上記の残留物にトリメチルシリル化剤0.5mLを加え、栓をして振り混ぜた後、室温で60分間放置し、これを試験溶液とする。

5．操作法

1)　定性試験

紫外分光光度型検出器付き高速液体クロマトグラフを用いて、次の操作条件で試験を行う。試験結果はパツリン標準溶液と一致しなければならない。

操作条件

カラム充てん剤　シラノール基のフルエンドキャップ処理済みオクタデシルシリル化シリカゲル(粒径5μm)を用いる。

カラム管　内径4.0～4.6mm、長さ250mmのステンレス管を用いる。

カラム温度　40℃

検出器　波長276nm又は290nmで操作する。

移動相　アセトニトリル及び水の混液(4：96)を用いる。パツリンが約14分で流出する流速に調整する。

2)　定量試験

1)定性試験と同様の操作条件で得られた試験結果に基づき、ピーク高法又はピーク面積法により定量を行う。

3)　確認試験

①　高速液体クロマトグラフ・質量分析計を用いて試験を行う場合

1)と同様の操作条件で液体クロマトグラフィー・質量分析を行う。試験結果はパツリン標準溶液と一致しなければならない。また、必要に応じてピーク高法又はピーク面積法により定量を行う。

②　ガスクロマトグラフ・質量分析計を用いて試験を行う場合

次の操作条件で試験を行う。試験結果はパツリン標準溶液について4．のガスクロマトグラフ・質量分析計用試験溶液と同様に操作をして得られたものと一致しなければならない。また、必要に応じ、ピーク高法又はピーク面積法により定量を行う。

操作条件

カラム　内径0.22～0.25mm、長さ25～30mのケイ酸ガラス製の細管に、ガスクロマトグラフィー用35％フェニルポリシルフェニレンシロキサンを0.25～1.5μmの厚さでコーティングしたもの。

カラム温度　80℃で2分間保持し、その後毎分10℃で昇温する。150℃に到達後、毎分5℃で昇温し、230℃に到達後15分間保持する。

試験溶液注入口温度　230℃

注入方式　スプリットレス

検出器　230℃で操作する。

ガス流量　キャリヤーガスとしてヘリウムを用いる。パツリンが約14分で流出する流速に調整する。

Ⅲ．食品製造用水中の化学物質等試験法

食品製造用水中の化学物質等は下表に掲げる方法によって行うこと。

食品製造用水中の化学物質等試験法