なお、改正後の試験法を実施するに際しては、試験法通知別添の第1章総則部分を参考とされたい。

記

1．目次を別紙1のとおり改める。なお、改正部分を下線で示す。

2．第3章個別試験法中「クリスタルバイオレット、ブリリアントグリーン及びメチレンブルー試験法(畜水産物)」に係る部分の次に別紙2の「グリチルリチン酸試験法(畜水産物)」を加える。

目次

第1章　総則

第2章　一斉試験法

・GC／MSによる農薬等の一斉試験法(農産物)

・LC／MSによる農薬等の一斉試験法Ⅰ(農産物)

・LC／MSによる農薬等の一斉試験法Ⅱ(農産物)

・GC／MSによる農薬等の一斉試験法(畜水産物)

・LC／MSによる農薬等の一斉試験法(畜水産物)

・HPLCによる動物用医薬品等の一斉試験法Ⅰ(畜水産物)

・HPLCによる動物用医薬品等の一斉試験法Ⅱ(畜水産物)

・HPLCによる動物用医薬品等の一斉試験法Ⅲ(畜水産物)

第3章　個別試験法

・　BHC、γ―BHC、DDT、アルドリン及びディルドリン、エタルフルラリン、エトリジアゾール、エンドリン、キントゼン、クロルデン、ジコホール、テクナゼン、テトラジホン、テフルトリン、トリフルラリン、ハルフェンプロックス、フェンプロパトリン、ヘキサクロロベンゼン、ヘプタクロル、ベンフルラリン並びにメトキシクロール試験法(農産物)

・　2，4―D、2，4―DB及びクロプロップ試験法(農産物)

・　2，2―DPA試験法(農産物)

・　DCIP試験法

・　DBEDC試験法(農産物)

・　EPN、アニロホス、イサゾホス、イプロベンホス、エチオン、エディフェンホス、エトプロホス、エトリムホス、カズサホス、キナルホス、クロルピリホス、クロルピリホスメチル、クロルフェンビンホス、シアノホス、ジスルホトン、ジメチルビンホス、ジメトエート、スルプロホス、ダイアジノン、チオメトン、テトラクロルビンホス、テルブホス、トリアゾホス、トリブホス、トルクロホスメチル、パラチオン、パラチオンメチル、ピペロホス、ピラクロホス、ピラゾホス、ピリダフェンチオン、ピリミホスメチル、フェナミホス、フェニトロチオン、フェンスルホチオン、フェンチオン、フェントエート、ブタミホス、プロチオホス、プロパホス、プロフェノホス、ブロモホス、ベンスリド、ホキシム、ホサロン、ホスチアゼート、ホスファミドン、ホスメット、ホレート、マラチオン、メカルバム、メタクリホス、メチダチオン及びメビンホス試験法(農産物)

・　EPTC試験法

・　MCPA及びジカンバ試験法

・　Sec―ブチルアミン試験法(農産物)

・　アクリナトリン、シハロトリン、シフルトリン、シペルメトリン、デルタメトリン及びトラロメトリン、ビフェントリン、ピレトリン、フェンバレレート、フルシトリネート、フルバリネート並びにペルメトリン試験法(農産物)

・　アシベンゾラルSメチル試験法

・　アジムスルフロン、ハロスルフロンメチル及びフラザスルフロン試験法

・　アシュラム試験法(農産物)

・　アセキノシル試験法

・　アセタミプリド試験法(農産物)

・　アセフェート、オメトエート及びメタミドホス試験法(農産物)

・　アゾキシストロビン試験法(農産物)

・　アゾキシストロビン、クミルロン及びシメコナゾール試験法(畜水産物)

・　アニラジン試験法(農産物)

・　アミトラズ試験法(農産物)

・　アラクロール、イソプロカルブ、クレソキシムメチル、ジエトフェンカルブ、テニルクロール、テブフェンピラド、パクロブトラゾール、ビテルタノール、ピリプロキシフェン、ピリミノバックメチル、フェナリモル、ブタクロール、フルトラニル、プレチラクロール、メトラクロール、メフェナセット、メプロニル及びレナシル試験法(農産物)

・　アラニカルブ試験法(農産物)

・　アルジカルブ、アルジカルブスルホキシド、アルドキシカルブ、エチオフェンカルブ、オキサミル、カルバリル、ピリミカーブ、フェノブカルブ及びベンダイオカルブ試験法

・　アルベンダゾール、オキシベンダゾール、チアベンダゾール、フルベンダゾール及びメベンダゾール試験法(畜水産物)

・　アンプロリウム及びデコキネート試験法(畜水産物)

・　イオドスルフロンメチル、エタメツルフロンメチル、エトキシスルフロン、シノスルフロン、スルホスルフロン、トリアスルフロン、ニコスルフロン、ピラゾスルフロンエチル、プリミスルフロンメチル、プロスルフロン及びリムスルフロン試験法(農産物)

・　イソウロン、ジウロン、テブチウロン、トリフルムロン、フルオメツロン及びリニュロン試験法(農産物)

・　イソフェンホス試験法

・　イソメタミジウム試験法

・　イナベンフィド試験法

・　イプロジオン試験法

・　イベルメクチン、エプリノメクチン、ドラメクチン及びモキシデクチン試験法(畜水産物)

・　イマザモックスアンモニウム塩試験法

・　イマザリル試験法

・　イマゾスルフロン及びベンスルフロンメチル試験法

・　イミノクタジン試験法

・　イミベンコナゾール試験法

・　インダノファン試験法

・　ウニコナゾールP試験法

・　エスプロカルブ、クロルプロファム、チオベンカルブ、ピリブチカルブ及びペンディメタリン試験法

・　エチクロゼート試験法

・　エチプロール試験法(農産物)

・　エチプロール試験法(水産物)

・　エテホン試験法(農産物)

・　エトキサゾール試験法

・　エトキシキン試験法

・　エトフェンプロックス試験法

・　エトベンザニド試験法

・　エマメクチン安息香酸塩試験法

・　エンロフロキサシン、オキソリニック酸、オフロキサシン、オルビフロキサシン、サラフロキサシン、ジフロキサシン、ダノフロキサシン、ナリジクス酸、ノルフロキサシン及びフルメキン試験法(畜水産物)

・　オキサジクロメホン及びフェノキサニル試験法

・　オキシテトラサイクリン試験法(農産物)

・　オキシテトラサイクリン、クロルテトラサイクリン及びテトラサイクリン試験法

・　オキスポコナゾールフマル酸塩試験法(農産物)

・　オキソリニック酸試験法(農産物)

・　オクスフェンダゾール、フェバンテル及びフェンベンダゾール試験法

・　オリサストロビン試験法(農産物)

・　オルトフェニルフェノール及びジフェニル試験法(農産物)

・　オルメトプリム、ジアベリジン、トリメトプリム及びピリメタミン試験法(畜水産物)

・　カフェンストロール、ジフェノコナゾール、シプロコナゾール、シメトリン、チフルザミド、テトラコナゾール、テブコナゾール、トリアジメノール、フルジオキソニル、プロピコナゾール、ヘキサコナゾール及びペンコナゾール試験法(農産物)

・　カルタップ、ベンスルタップ及びチオシクラム試験法(農産物)

・　カルプロパミド試験法

・　カルベンダジム、チオファネート、チオファネートメチル及びベノミル試験法(農産物)

・　カルボスルファン、カルボフラン、フラチオカルブ及びベンフラカルブ試験法(農産物)

・　カンタキサンチン試験法

・　キザロホップエチル試験法

・　キノメチオネート試験法

・　キャプタン、クロルベンジレート、クロロタロニル及びホルペット試験法

・　キンクロラック試験法

・　クミルロン試験法

・　クリスタルバイオレット、ブリリアントグリーン及びメチレンブルー試験法(畜水産物)

・　グリチルリチン酸試験法(畜水産物)

・　グリホサート試験法

・　グルホシネート試験法

・　クレトジム試験法

・　クロサンテル試験法

・　クロジナホッププロパルギル試験法(農産物)

・　クロチアニジン試験法(農産物)

・　クロチアニジン試験法(畜産物)

・　クロピラリド試験法(農産物)

・　クロフェンテジン試験法

・　クロリムロンエチル及びトリベヌロンメチル試験法

・　クロルスルフロン及びメトスルフロンメチル試験法

・　クロルフェナピル及びビフェノックス試験法(農産物)

・　クロルフルアズロン、ジフルベンズロン、テブフェノジド、テフルベンズロン、フルフェノクスロン、ヘキサフルムロン及びルフェヌロン試験法

・　クロルメコート試験法

・　ゲンタマイシン試験法

・　酸化フェンブタスズ試験法

・　酸化プロピレン試験法(農産物)

・　シアゾファミド試験法(農産物)

・　シアナジン試験法

・　ジアフェンチウロン試験法

・　シアン化水素試験法(農産物)

・　ジクラズリル及びナイカルバジン試験法

・　シクロキシジム試験法

・　ジクロシメット試験法

・　シクロスルファムロン試験法

・　ジクロフルアニド及びトリルフルアニド試験法(農産物)

・　ジクロベニル試験法(農産物)

・　ジクロメジン試験法

・　ジクロルボス及びトリクロルホン試験法

・　ジクワット、パラコート及びメピコートクロリド試験法(農産物)

・　ジチアノン試験法(農産物)

・　ジチオピル及びチアゾピル試験法(農産物)

・　ジノカップ試験法(農産物)

・　ジノテフラン試験法(農産物)

・　ジノテフラン試験法(畜産物)

・　シハロホップブチル及びジメテナミド試験法

・　ジヒドロストレプトマイシン及びストレプトマイシン試験法(農産物)

・　ジヒドロストレプトマイシン、ストレプトマイシン、スペクチノマイシン及びネオマイシン試験法

・　ジフェンゾコート試験法

・　ジフルフェニカン試験法

・　シフルメトフェン試験法(農産物)

・　シプロジニル試験法

・　ジメチピン試験法

・　ジメトモルフ試験法(農産物)

・　ジメトモルフ試験法(畜水産物)

・　シモキサニル試験法

・　臭素試験法

・　シラフルオフェン試験法

・　シロマジン試験法(農産物)

・　シロマジン試験法(畜産物)

・　シンメチリン試験法

・　スピノサド試験法

・　スピラマイシン試験法

・　スピロメシフェン試験法(農産物)

・　スピロメシフェン試験法(畜水産物)

・　スルファキノキサリン、スルファジアジン、スルファジミジン、スルファジメトキシン、スルファメトキサゾール、スルファメトキシピリダジン、スルファメラジン、スルファモノメトキシン及びスルフイソゾール試験法(畜水産物)

・　スルファジミジン試験法

・　セトキシジム試験法

・　セファゾリン、セファピリン、セファレキシン、セファロニウム、セフォペラゾン及びセフロキシム試験法(畜水産物)

・　セフチオフル試験法

・　ゼラノール試験法

・　ダイムロン試験法

・　ダゾメット、メタム及びメチルイソチオシアネート試験法(農産物)

・　ターバシル試験法

・　チアジニル試験法(農産物)

・　チアベンダゾール及び5―プロピルスルホニル―1H―ベンズイミダゾール―2―アミン試験法

・　チオジカルブ及びメソミル試験法(農産物)

・　チルミコシン試験法

・　ツラスロマイシン試験法(畜水産物)

・　テクロフタラム試験法

・　デスメディファム試験法

・　テプラロキシジム試験法

・　テレフタル酸銅試験法

・　トリクラベンダゾール試験法

・　トリクラミド試験法

・　トリクロロ酢酸ナトリウム塩試験法(農産物)

・　トリシクラゾール試験法

・　トリネキサパックエチル試験法

・　トリフルミゾール試験法

・　トリブロムサラン及びビチオノール試験法(畜水産物)

・　トルトラズリル試験法(畜水産物)

・　トルフェンピラド試験法

・　鉛試験法

・　ニコチン試験法(農産物)

・　ニテンピラム試験法

・　ノバルロン試験法

・　バミドチオン試験法

・　バリダマイシン試験法(農産物)

・　ビオレスメトリン試験法

・　ピクロラム試験法

・　ビスピリバックナトリウム塩試験法

・　ヒ素試験法

・　ビフェナゼート試験法(農産物)

・　ビフェナゼート試験法(畜産物)

・　ヒメキサゾール試験法(農産物)

・　ピメトロジン試験法

・　ピラクロストロビン試験法(農産物)

・　ピラクロストロビン試験法(畜産物)

・　ピラクロニル試験法(農産物)

・　ピラゾキシフェン試験法

・　ピラフルフェンエチル試験法

・　ピリダベン試験法

・　ピリダリル試験法(農産物)

・　ピリチオバックナトリウム塩試験法(農産物)

・　ピリデート試験法

・　ピリフェノックス試験法

・　ピリミジフェン試験法

・　ピリメタニル試験法

・　ピルリマイシン試験法

・　ファモキサドン試験法

・　フィプロニル試験法

・　フェノキサプロップエチル試験法

・　フェリムゾン試験法(水産物)

・　フェンアミドン試験法(農産物)

・　フェンアミドン試験法(畜産物)

・　フェントラザミド試験法

・　フェンピロキシメート試験法

・　フェンヘキサミド試験法

・　フェンチン試験法(農産物)

・　ブチレート試験法

・　プラジクアンテル試験法(畜水産物)

・　フラメトピル試験法

・　フルアジナム試験法

・　フルアジホップ試験法

・　フルオピコリド試験法(農産物)

・　フルオルイミド試験法

・　フルカルバゾンナトリウム塩試験法(農産物)

・　フルシラゾール試験法

・　フルスルファミド試験法

・　フルベンジアミド試験法(農産物)

・　フルベンダゾール試験法

・　フルミオキサジン試験法

・　プロクロラズ試験法

・　プロシミドン試験法

・　フロニカミド試験法(農産物)

・　フロニカミド試験法(畜産物)

・　プロパモカルブ試験法

・　プロヒドロジャスモン試験法

・　プロヘキサジオンカルシウム塩試験法

・　ヘキシチアゾクス試験法

・　ペンシクロン試験法

・　ベンジルペニシリン試験法

・　ベンゾビシクロン試験法(農産物)

・　ペンタゾン試験法

・　ベンチアバリカルブイソプロピル試験法(農産物)

・　ペントキサゾン試験法

・　ベンフレセート試験法

・　ボスカリド試験法(農産物)

・　ボスカリド試験法(畜産物)

・　ホセチル試験法

・　マレイン酸ヒドラジド試験法

・　ミクロブタニル試験法

・　メタアルデヒド試験法(農産物)

・　メタベンズチアズロン試験法

・　メタミトロン試験法(農産物)

・　メチオカルブ試験法

・　メトコナゾール試験法(農産物)

・　メトプレン試験法(農産物)

・　メトリブジン試験法

・　メパニピリム試験法

・　モリネート試験法

・　ラクトパミン試験法

・　リン化水素試験法(農産物)

・　レバミゾール試験法

(参考)食品、添加物等の規格基準(昭和34年厚生省告示第370号)に規定する試験法

・　2，4，5―T試験法

・　アゾシクロチン及びシヘキサチン試験法

・　アミトロール試験法

・　アルドリン、エンドリン及びディルドリン試験法

・　カプタホール試験法

・　カルバドックス試験法

・　クマホス試験法

・　クレンブテロール試験法

・　クロラムフェニコール試験法

・　クロルプロマジン試験法

・　ジエチルスチルベストロール試験法

・　ジメトリダゾール、メトロニダゾール及びロニダゾール試験法

・　ダミノジッド試験法

・　デキサメタゾン試験法

・　トリアゾホス及びパラチオン試験法

・　α―トレンボロン及びβ―トレンボロン試験法

・　二臭化エチレン試験法

・　ニトロフラゾン試験法

・　ニトロフラントイン、フラゾリドン及びフラルタドン試験法

・　プロファム試験法

・　マラカイトグリーン試験法

グリチルリチン酸試験法(畜水産物)

1．分析対象化合物

グリチルリチン酸

2．装置

液体クロマトグラフ・タンデム型質量分析計(LC―MS／MS)

3．試薬、試液

次に示すもの以外は、総則の3に示すものを用いる。

アンモニア溶液　アンモニア水10mLに水270mLを加えて混和する。

アンモニア水・メタノール溶液　アンモニア水10mLにメタノール270mLを加えて混和する。

グリチルリチン酸標準品　本品はグリチルリチン酸99％以上を含む。

4．試験溶液の調製

1)抽出

①筋肉、脂肪、肝臓、腎臓、魚介類、乳及びはちみつの場合

試料10.0gにアンモニア溶液10mLを加え、ホモジナイズした後、アンモニア水・メタノール溶液40mL及びn―ヘキサン50mLを加え、さらにホモジナイズした後、毎分3,500回転で5分間遠心分離する。n―ヘキサン層を除去し、アンモニア水・メタノール溶液層を採る。残留物にアンモニア水・メタノール溶液30mL及びn―ヘキサン30mLを加えてホモジナイズした後、上記と同様に遠心分離する。n―ヘキサン層を除去し、アンモニア水・メタノール溶液層を採り、先のアンモニア水・メタノール溶液層に合わせた後、吸引ろ過する。ろ液にアンモニア水・メタノール溶液を加えて正確に100mLとする。

②鶏卵の場合

試料10.0gにアンモニア溶液10mLを加え、ホモジナイズした後、アンモニア水・メタノール溶液40mL及びn―ヘキサン50mLを加え、さらにホモジナイズした後、毎分3,500回転で5分間遠心分離する。n―ヘキサン層を除去し、アンモニア水・メタノール溶液50mLを加え、軽く振り混ぜた後、上記と同様に遠心分離を行い、アンモニア水・メタノール溶液層を採る。残留物にアンモニア水・メタノール溶液30mL及びn―ヘキサン30mLを加えてホモジナイズした後、上記と同様に遠心分離する。n―ヘキサン層を除去し、アンモニア水・メタノール溶液層を採り、先のアンモニア水・メタノール溶液層に合わせた後、吸引ろ過する。ろ液にアンモニア水・メタノール溶液を加えて正確に200mLとする。

2)精製

中性アルミナミニカラム(1,710mg)にメタノール10mLを注入し、流出液は捨てる。このカラムに1)で得られた溶液10mL(鶏卵の場合は20mL)を注入した後、アンモニア水・メタノール溶液10mLを注入し、流出液は捨てる。次いで水30mLを注入し、溶出液に1―プロパノール20mLを加えた後、40℃以下で1―プロパノール及び水を除去する。この残留物を水に溶解し、正確に2mLとしたものを試験溶液とする。

5．検量線の作成

グリチルリチン酸標準品を水及びメタノール(1：1)混液に溶解して1mg／mLとし標準原液とする。標準原液を水で希釈して0.005～0.1mg／L溶液を数点調製し、それぞれ10μLをLC―MS／MSに注入し、ピーク高法又はピーク面積法で検量線を作成する。

6．定量

試験溶液10μLをLC―MS／MSに注入し、5の検量線でグリチルリチン酸の含量を求める。

7．確認試験

LC―MS／MSにより確認する。

8．測定条件

カラム：オクタデシルシリル化シリカゲル、内径2.0mm、長さ150mm、粒子径2μm

カラム温度：40℃

移動相：アセトニトリル、ギ酸及び水混液(25：1：475)から(400：1：100)までの濃度勾配を15分間で行い、(400：1：100)で1分間保持する。

イオン化モード：ESI(－)

主なイオン(m／z)：プリカーサーイオン821、プロダクトイオン351、113

保持時間の目安：11分

9．定量限界

0.01　mg／kg

10．留意事項

1)試験法の概要

グリチルリチン酸を試料からアンモニア溶液、アンモニア水・メタノール溶液及びn―ヘキサンで抽出する。n―ヘキサンを除去後、中性アルミナミニカラムで精製した後、LC―MS／MSで定量及び確認する方法である。

2)注意点

①抽出の際、乳及びはちみつなどの液体試料では、ホモジナイズ抽出の代わりに振とう抽出を行っても良い。

②鶏卵の場合、最初の遠心分離後のアンモニア水・メタノール溶液層はゲル化するが、n―ヘキサン層を除去した後、再度アンモニア水・メタノール溶液を加えて振り混ぜ、遠心分離することで、ゲル化は解消される。

③吸引ろ過は、ケイソウ土を2～3mm程度積層して実施すること。

④グリチルリチン酸は、測定装置内、特にオートサンプラーのニードルに吸着する性質があるため、キャリーオーバー対策を徹底したニードル洗浄機構を有するオートサンプラーを使用することが望ましい。

11．参考文献

厚生労働省監修「食品衛生検査指針　食品添加物編」p.228―232、社団法人　日本食品衛生協会(2003)

12．類型

C