5．検量線の作成

メタアルデヒド標準品の0.002～0.04mg／Lのn―ヘキサン溶液を数点調製し、それぞれ1μLをGC／MSに注入し、ピーク高法又はピーク面積法で検量線を作成する。

6．定量

試験溶液1μLをGC／MSに注入し、5の検量線でメタアルデヒドの含量を求める。

7．確認試験

GC／MS又はGC／MS／MSにより確認する。

8．測定条件

GC／MS

カラム：6％シアノプロピルフェニル―メチルシリコン、内径0.25mm、長さ30m、膜厚1.4μm

カラム温度：50℃(1分)―30℃／分―260℃(3分)

注入口温度：150℃

キャリヤーガス：ヘリウム

イオン化モード(電圧)：EI(70eV)

主なイオン(m／z)：89、45

保持時間の目安：6分

9．定量限界

0.01mg／kg

10．留意事項

1)　試験法の概要

メタアルデヒドを試料からアセトンで抽出し、多孔性ケイソウ土カラム、グラファイトカーボンミニカラム及び合成ケイ酸マグネシウムミニカラムで精製した後、GC／MSで測定及び確認する方法である。

2)　注意点

(1)　濃縮時に揮散しやすいため、精製後の濃縮操作においては3mL程度残すこと。

(2)　GC／MS測定時、注入口温度を低めに設定することで感度が向上することから、注入口温度は150℃に設定したほうがよい。

11．参考文献

なし

12．類型

C

メタベンズチアズロン試験法(農産物)

1．分析対象化合物

メタベンズチアズロン

2．装置

紫外分光光度型検出器付き高速液体クロマトグラフを用いる。

3．試薬、試液

総則の3に示すものを用いる。

4．標準品

メタベンズチアズロン　本品はメタベンズチアズロン99％以上を含む。

融点　本品の融点は119～120°である。

5．試験溶液の調製

a　抽出法

(1)　穀類，豆類及び種実類の場合

検体を420μmの標準網ふるいを通るように粉砕した後，その10.0gを量り採り，水20mlを加え，2時間放置する。

これにアセトン100mlを加え，3分間細砕した後，ケイソウ土を1cmの厚さに敷いたろ紙を用いてすり合わせ減圧濃縮器中に吸引ろ過する。ろ紙上の残留物を採り，アセトン50mlを加え，3分間細砕した後，上記と同様に操作して，ろ液をその減圧濃縮器中に合わせ，40°以下で約30mlに濃縮する。

これをあらかじめ10％塩化ナトリウム溶液100mlを入れた300mlの分液漏斗に移す。n―ヘキサン100mlを用いて上記の減圧濃縮器のナス型フラスコを洗い，洗液を上記の分液漏斗に合わせる。振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後，静置し，n―ヘキサン層を300mlの三角フラスコに移す。水層にn―ヘキサン50mlを加え，上記と同様に操作して，n―ヘキサン層を上記の三角フラスコに合わせる。これに適量の無水硫酸ナトリウムを加え，時々振り混ぜながら15分間放置した後，すり合わせ減圧濃縮器中にろ過する。次いでn―ヘキサン20mlを用いて三角フラスコを洗い，その洗液でろ紙上の残留物を洗う操作を2回繰り返す。両洗液をその減圧濃縮器中に合わせ，40°以下でn―ヘキサンを除去する。

この残留物にn―ヘキサン30mlを加え，100mlの分液漏斗に移す。これにn―ヘキサン飽和アセトニトリル30mlを加え，振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後，静置し，アセトニトリル層を200mlの分液漏斗に移す。n―ヘキサン層にn―ヘキサン飽和アセトニトリル30mlを加え，上記と同様の操作を2回繰り返し，アセトニトリル層を上記の分液漏斗に合わせる。これにアセトニトリル飽和n―ヘキサン50mlを加え、軽く振り混ぜた後，静置し，アセトニトリル層をすり合わせ減圧濃縮器中に移し，40°以下でアセトニトリルを除去する。この残留物にn―ヘキサン2mlを加えて溶かす。

(2)　果実及び野菜の場合

検体約1kgを精密に量り，必要に応じ適量の水を量つて加え，細切均一化した後，検体20.0gに相当する量を量り採る。

これにアセトン100mlを加え，3分間細砕した後，ケイソウ土を1cmの厚さに敷いたろ紙を用いてすり合わせ減圧濃縮器中に吸引ろ過する。ろ紙上の残留物を採り，アセトン50mlを加え，3分間細砕した後，上記と同様に操作して，ろ液をその減圧濃縮器中に合わせ，40°以下で約30mlに濃縮する。

これをあらかじめ10％塩化ナトリウム溶液100mlを入れた300mlの分液漏斗に移す。n―ヘキサン100mlを用いて上記の減圧濃縮器のナス型フラスコを洗い，洗液を上記の分液漏斗に合わせる。振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後，静置し，n―ヘキサン層を300mlの三角フラスコに移す。水層にn―ヘキサン50mlを加え，上記と同様に操作して，n―ヘキサン層を上記の三角フラスコに合わせる。これに適量の無水硫酸ナトリウムを加え，時々振り混ぜながら15分間放置した後，すり合わせ減圧濃縮器中にろ過する。次いでn―ヘキサン20mlを用いて三角フラスコを洗い，その洗液でろ紙上の残留物を洗う操作を2回繰り返す。両洗液をその減圧濃縮器中に合わせ，40°以下でn―ヘキサンを除去する。この残留物にn―ヘキサン2mlを加えて溶かす。

b　精製法

内径15mm，長さ300mmのクロマトグラフ管に，カラムクロマトグラフィー用合成ケイ酸マグネシウム5gをn―ヘキサンに懸濁したもの，次いでその上に無水硫酸ナトリウム約5gを入れ，カラムの上端に少量のn―ヘキサンが残る程度までn―ヘキサンを流出させる。このカラムにa　抽出法で得られた溶液を注入した後，アセトン及びn―ヘキサンの混液(1：49)50mlを注入し，流出液は捨てる。次いでアセトン及びn―ヘキサンの混液(3：17)50mlを注入し，流出液をすり合わせ減圧濃縮器中に採り，40°以下でアセトン及びn―ヘキサンを除去する。この残留物にアセトニトリルを加えて溶かし，正確に2mlとして，これを試験溶液とする。

6．操作法

a　定性試験

次の操作条件で試験を行う。試験結果は標準品と一致しなければならない。

操作条件

カラム充てん剤　オクタデシルシリル化シリカゲル(粒径4～5μm)を用いる。

クロマトグラフ管　内径4～5mm，長さ250～300mmのステンレス管を用いる。

カラム温度　50°

検出器　波長275nmで操作する。

移動相　アセトニトリル及び水の混液(1：1)を用いる。メタベンズチアズロンが約8分で流出する流速に調整する。

b　定量試験

a　定性試験と同様の操作条件で得られた試験結果に基づき，ピーク高法又はピーク面積法により定量を行う。

7．定量限界

0.01mg／kg

8．留意事項

なし

9．参考文献

なし

10．類型

A

メタミトロン試験法(農産物)

1．分析対象化合物

メタミトロン

2．装置

紫外分光光度型検出器付液体クロマトグラフ(HPLC―UV)

液体クロマトグラフ・質量分析計(LC／MS)

3．試薬、試液

次に示すもの以外は、総則の3に示すものを用いる。

メタミトロン標準品　本品はメタミトロン98％以上を含み、融点は167℃である。

4．試験溶液の調製

1)　抽出

試料20.0gに1moL／L塩酸1mL及びアセトン100mLを添加し、30分間振とう抽出する。ガラス繊維ろ紙を用いて吸引ろ過し、ろ紙上の残留物にアセトン50mLを加えて、上記と同様に操作する。得られたろ液を合わせ、40℃以下で20mL以下に濃縮する。

この溶液を多孔性ケイソウ土カラム(20mL保持用)に注入し、10分間放置する。n―ヘキサン50mLをカラムに注入し、流出液は捨てる。次いで、酢酸エチル120mLを注入し、溶出液を40℃以下で濃縮し、溶媒を除去する。この残留物を酢酸エチル及びn―ヘキサン(1：4)混液5mLに溶かす。

2)　精製

アミノプロピルシリル化シリカゲルミニカラム(500mg)に酢酸エチル5mL及びn―ヘキサン5mLを順次注入し、流出液は捨てる。このカラムに1)で得られた溶液を注入する。酢酸エチル及びn―ヘキサン(1：4)混液5mLを注入し、流出液は捨てる。次いで、酢酸エチル及びn―ヘキサン(3：2)混液20mLを注入する。溶出液を40℃以下で濃縮し、溶媒を除去する。この残留物をアセトニトリル及び水(1：4)混液に溶かし、正確に4mLとしたものを試験溶液とする。

5．検量線の作成

メタミトロン標準品の100mg／Lアセトニトリル溶液を調製し、これをアセトニトリル及び水(1：4)混液で希釈し、0.05～1mg／L溶液を数点調製する。それぞれ20μLをHPLCに注入し、ピーク高法又はピーク面積法で検量線を作成する。

6．定量

試験溶液20μLをHPLCに注入し、5の検量線でメタミトロンの含量を求める。

7．確認試験

LC／MSにより確認する。

8．測定条件

HPLC

検出器：UV(波長310nm)

カラム：オクタデシルシリル化シリカゲル、内径2～6mm、長さ150～300mm

カラム温度：40℃

移動相：アセトニトリル及び水(1：4)混液

保持時間の目安：10～15分

9．定量限界

0.01mg／kg

10．留意事項

1)　試験法の概要

試料中のメタミトロンをアセトンで抽出し、多孔性ケイソウ土カラム及びアミノプロピルシリル化シリカゲルミニカラムで精製する。HPLC―UVで測定し、LC／MSで確認する方法である。

2)　注意点

(1)　本法はてんさいを対象とした試験法である。

(2)　メタミトロンは塩基性条件下では不安定なので、抽出時に酸を添加する。

11．参考文献

1)　今月の農業編集室編　改定4版「農薬登録保留基準ハンドブック」p．915、化学工業日報社(2003)

12．類型

A(環境省告示第83号「メタミトロン試験法」平成14年12月24日)

メチオカルブ試験法(農産物)

1．分析対象化合物

メチオカルブ、メチオカルブスルホキシド、メチオカルブスルホン

2．装置

ポストカラム反応蛍光検出器付き高速液体クロマトグラフを用いる。

3．試薬、試液

次に示すもの以外は，総則の3に示すものを用いる。

発蛍光液　水酸化ナトリウム4.0g，o―フタルアルデヒド300mgをエタノール20mlに溶かしたもの，ホウ酸18.5g及び3―メルカプトプロピオン酸100μlを水に溶かして1,000mlとする。

4．標準品

メチオカルブ　本品はメチオカルブ99.5％以上を含む。

融点　本品の融点は121.5°である。

メチオカルブスルホキシド　本品はメチオカルブスルホキシド96.5％以上を含む。

融点　本品の融点は133～134°である。

メチオカルブスルホン　本品はメチオカルブスルホン97.5％以上を含む。

融点　本品の融点は160～163°である。

5．試験溶液の調製

a　抽出法

(1)　穀類，豆類及び種実類の場合

検体を420μmの標準網ふるいを通るように粉砕した後，その10.0gを量り採り，水10mlを加え，2時間放置する。

これにアセトン20mlを加え，2分間細砕した後，塩化ナトリウム1gとジクロロメタン(特級)及びn―ヘキサンの混液(1：1)30mlを加える。これを2分間細砕した後，毎分約3,000回転で約3分間遠心分離を行い，上澄液を200mlの三角フラスコに移す。沈殿にジクロロメタン(特級)及びn―ヘキサンの混液(1：1)40mlを加え，2分間細砕した後，上記と同様の条件で遠心分離を行い，上澄液を上記の三角フラスコに合わせる。これに適量の無水硫酸ナトリウムを加え，時々振り混ぜながら15分間放置した後，すり合わせ減圧濃縮器中にろ過する。次いでジクロロメタン(特級)20mlを用いて三角フラスコを洗い，その洗液でろ紙上の残留物を洗う操作を2回繰り返す。両洗液をその減圧濃縮器中に合わせ，40°以下で約1mlに濃縮し，更に室温で窒素を通じて乾固する。

この残留物にアセトニトリル飽和n―ヘキサン20ml及びアセトニトリル20mlを加えて溶かし，100mlの分液漏斗に移す。振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後，静置し，アセトニトリル層をすり合わせ減圧濃縮器中に移し，40°以下で約1mlに濃縮し，更に室温で窒素を通じて乾固する。この残留物にジクロロメタン(特級)1mlを加えて溶かす。

(2)　果実及び野菜の場合

検体約1kgを精密に量り，必要に応じ適量の水を量つて加え，細切均一化した後，検体20.0gに相当する量を量り採る。

これにアセトン20mlを加え，2分間細砕した後，ジクロロメタン(特級)及びn―ヘキサンの混液(1：1)30mlと塩化ナトリウム1gを加える。これを2分間細砕した後，毎分約3,000回転で約3分間遠心分離を行い，上澄液を200mlの三角フラスコに移す。沈殿にジクロロメタン(特級)及びn―ヘキサンの混液(1：1)40mlを加え，2分間細砕した後，上記と同様の条件で遠心分離を行い，上澄液を上記の三角フラスコに合わせる。これに適量の無水硫酸ナトリウムを加え，時々振り混ぜながら15分間放置した後，すり合わせ減圧濃縮器中にろ過する。次いでジクロロメタン(特級)20mlを用いて三角フラスコを洗い，その洗液でろ紙上の残留物を洗う操作を2回繰り返す。両洗液をその減圧濃縮器中に合わせ，40°以下で約1mlに濃縮し，更に室温で窒素を通じて乾固する。この残留物にジクロロメタン(特級)1mlを加えて溶かす。

b　精製法

アミノプロピルシリル化シリカゲルミニカラム(360mg)に，ジクロロメタン(特級)10mlを注入し，流出液は捨てる。このカラムにa　抽出法で得られた溶液を注入した後，ジクロロメタン(特級)及びメタノールの混液(99：1)10mlを注入する。流出液をすり合わせ減圧濃縮器中に採り，40°以下で大部分のジクロロメタン及びメタノールを除去し，更に室温で窒素を通じて乾固する。この残留物にメタノール0.5mlを加えて溶かし，希塩酸1.5mlを加え，よく振り混ぜた後，孔径0.45μmのメンブランフィルターを用いてろ過し，これを試験溶液とする。

6．操作法

a　定性試験

次の操作条件で試験を行う。試験結果は標準品と一致しなければならない。

操作条件

カラム充てん剤　オクタデシルシリル化シリカゲル(粒径5μm)を用いる。

クロマトグラフ管　内径4.6mm，長さ250mmのステンレス管を用いる。

カラム温度　50°

検出器　励起波長340nm，蛍光波長455nmで操作する。

移動相　A　5％メタノール溶液　B　80％メタノール溶液　メチオカルブが約35分で流出する流速に調整する。

濃度勾配　5％メタノール溶液及び80％メタノール溶液の混液(17：3)で3分間送液した後，A：B(17：3)から(0：1)までの直線濃度勾配を32分間行う。次に80％メタノール溶液を10分間送液した後，5％メタノール溶液及び80％メタノール溶液の混液(17：3)を15分間送液する。

加水分解反応槽　移動相に対し，0.05mol／l水酸化ナトリウム溶液を注入する。注入量を一定に保つ。

加水分解反応槽温度　90°

蛍光反応槽　移動相に対し，発蛍光液を注入する。注入量を一定に保つ。

蛍光反応槽温度　50°

b　定量試験

a　定性試験と同様の操作条件で得られた試験結果に基づき，メチオカルブ，メチオカルブスルホキシド及びメチオカルブスルホンのそれぞれについてピーク高法又はピーク面積法により定量を行い，メチオカルブ，メチオカルブスルホキシド及びメチオカルブスルホンの含量を求め，次式により，メチオカルブスルホキシド及びメチオカルブスルホンを含むメチオカルブの含量を求める。

メチオカルブ(メチオカルブスルホキシド及びメチオカルブスルホンを含む。)の含量(ppm)＝A＋B×0.93＋C×0.88

A：メチオカルブの含量(ppm)

B：メチオカルブスルホキシドの含量(ppm)

C：メチオカルブスルホンの含量(ppm)

7．定量限界

0.004mg／kg

8．留意事項

メチオカルブは、メチオカルブ、メチオカルブスルホキシド及びメチオカルブスルホンのそれぞれについて定量を行い、メチオカルブスルホキシド及びメチオカルブスルホンについてはそれぞれの含量に係数を乗じてメチオカルブの含量に換算し、これらの和を分析値とすること。

9．参考文献

なし

10．類型

A

1―メチルシクロプロペン試験法(農産物)

1．分析対象化合物

1―メチルシクロプロペン

2．装置

水素炎イオン化検出器付きガスクロマトグラフ(GC―FID)

ガスクロマトグラフ・質量分析計(GC―MS)

抽出装置　図に示すものを用いる(資料1参照)。

容量2.2L、内径約9cm、高さ約35cm(上部20cm、下部20cm、接合部5cm)

3．試薬、試液

次に示すもの以外は、総則の3に示すものを用いる。

塩基性硫酸アンモニウム溶液　飽和硫酸アンモニウム溶液1Lにアンモニア水50mLを加える。

イソブチレン標準品　本品はイソブチレン99％以上を含む。

4．試験ガスの調製

乱切りした試料200gを抽出装置に量り採る。

これに塩基性硫酸アンモニウム溶液250mLを加え、ふたを固定用ナットで硬くしめ、5分間ホモジナイズする。30分間放置し、抽出装置内のヘッドスペースガスを試験ガスとする。

5．検量線の作成

イソブチレン標準品を空気で希釈して1000μL／Lとし標準ガスとする。標準ガスを空気で希釈して検量線用ガスを数点調製し、それぞれGCに注入し、ピーク高法又はピーク面積法で検量線を作成する。このときイソブチレン標準ガスは、1―メチルシクロプロペンの同濃度の標準ガスに相当するものとする。なお、本法に従って試験ガスを調製した場合、試料中0.01mg／kgに相当する試験ガス中濃度は0.515μL／L(24℃における値)である。

6．定量

抽出装置のサンプリングバルブよりヘッドスペースガスを採り、GCに注入し、5の検量線で1―メチルシクロプロペン濃度を求め、以下の計算式より試料中の1―メチルシクロプロペン含量を求める。なお試料の比重は1g／cm³と仮定し、また計算には理想気体の状態方程式PV＝nRTを使用する。

A：検量線より求めた1―メチルシクロプロペン濃度(μL／L)

P：ヘッドスペース中の1―メチルシクロプロペン分圧(atm)

V：抽出後のヘッドスペースの体積(L)

n：ヘッドスペース中の1―メチルシクロプロペン量(mol)

R：気体定数0.08206

T：室温(K)

P＝A×1atm＝A×10^－6

V＝抽出装置の体積－塩基性硫酸アンモニウム溶液の体積－試料の体積

＝2.2－0.25－0.2＝1.75

n＝(P×V)／(0.08206×T)

1―メチルシクロプロペン含量(mg／kg)

＝(n×1―メチルシクロプロペンの分子量×10³)／試料量(kg)

＝((PV／0.08206T)×54.1×10³)／0.2

＝(A／T)×5.77

7．確認試験

GC―MSにより確認する。

8．測定条件

(例)

1)GC

検出器：FID

カラム：スチレンジビニルベンゼンポーラスポリマー　内径0.25mm、長さ25m、膜厚3μm

カラム温度：50℃(0分)－20℃／分－170℃(0分)－50℃／分－275℃(0分)

注入口温度：75℃

検出器温度：295℃

キャリヤーガス：ヘリウム

注入量：500μL

保持時間の目安：1―メチルシクロプロペン5分、イソブチレン5分

2)GC―MS

カラム：スチレンジビニルベンゼンポーラスポリマー　内径0.25mm、長さ25m、膜厚3μm

カラム温度：50℃(0分)－20℃／分－270℃(0分)

注入口温度：75℃

キャリヤーガス：ヘリウム

イオン化モード(イオン化エネルギー)：EI(70eV)

主なイオン(m／z)：54、39、27

注入量：500μL

保持時間の目安：5分

9．定量限界

0.01mg／kg

10．留意事項

1)試験法の概要

試料を塩基性硫酸アンモニウム溶液で磨砕し、気相中に生成した1―メチルシクロプロペンをGC―FIDで測定し、イソブチレン検量線による間接定量を行い、GC―MSで確認する方法である。なお、本試験法は果実(かき及びなし)のみでの評価に基づき作成したものであり、そのほかの農産物(穀類、豆類、種実類、野菜及び茶等)への適用については評価されていない。また、本試験法の計算例では、試料の比重を1g／cm³と仮定して算出している点に留意する。

2)注意点

①　1―メチルシクロプロペンは常温で気体のため、抽出装置は密閉性の高いものを使用し、試料採取を含む全ての操作は速やかに行う。

②　細かく切りすぎるとかえって損失する可能性があるので、試料採取の際には細切せずに乱切りとする。

③　1―メチルシクロプロペンは大気中では不安定なため、検量線用標準品として使用することができない。このため代替標準品として、GCの保持時間及びFIDの感度がほぼ等しいイソブチレンを用いて定量を行う。

④　検量線用ガスの調製やGC測定には、ガスタイトシリンジを使用する。

⑤　検量線用ガスの調製では、テドラーバッグに一定量の空気を入れておき、これにイソブチレンを注入して作成する。以下に、検量線の作成例を示した。

ガスタイトシリンジを用いてイソブチレン0.8mLを分取し、予め空気800mLを入れたテドラーバッグに注入して、998.40μL／L(イソブチレン純度99.94％の場合)の標準ガスを調製する。この標準ガスをガスタイトシリンジを用いて0.20、0.41、0.80、4.0および8.0mLを取り、各々を予め空気800mLを入れたテドラーバッグに注入し、0.250、0.511、0.997、4.97および9.89μL／Lの検量線用ガスを調製する。この検量線用ガスをGCに注入し、ピーク高法又はピーク面積法で検量線を作成する。

⑥　添加回収試験は、1―メチルシクロプロペン製剤を水に溶解することにより発生する1―メチルシクロプロペンを添加用ガスとして用いて行う。なお、発生した1―メチルシクロプロペンの添加用ガスの濃度は、イソブチレンの標準ガスで作成した検量線より求め、計算には実測値を用いる。以下に、添加回収試験の例を示した。

操作概要：1―メチルシクロプロペン3.3％製剤80mgを250mL容の密閉容器内で水3mLに溶解すると4814μL／L(理論値)の1―メチルシクロプロペンのガスが作製できるので、これを添加用ガスとする。試料200gに対して0.01mg／kg添加を行う場合、添加用ガスの実測濃度を4814μL／L、室温を24℃と仮定すると、次式により1―メチルシクロプロペンの添加用ガスの添加量は0.187mLとなる。

(計算例)

i)添加用ガス中の1―メチルシクロプロペン濃度

式1：添加用ガス中の1―メチルシクロプロペンのモル数(mol)

3.3(％)×80(mg)×10^－5／54.1＝4.880×10^－5(mol)

式2：添加用ガス中の1―メチルシクロプロペンの体積(μL)

4.880×10^－5(mol)×22.4×10⁶(μL)×(273＋24)／273＝1189(μL)

式3：添加用ガス中の1―メチルシクロプロペン濃度(μL／L)

1189(μL)／(250(mL)－3(mL))×1000＝4814(μL／L)

ii)試料200gに対して0.01mg／kg添加を行う場合の1―メチルシクロプロペン添加用ガスの添加量

式1：0.01mg／kg添加に必要な1―メチルシクロプロペンの重量(g)

添加濃度(mg／kg)×試料重量(kg)／1000＝0.01×0.2／1000＝2.00×10^－6(g)

式2：0.01mg／kg添加に必要な1―メチルシクロプロペンのモル数(mol)

n_A＝1―メチルシクロプロペン重量(g)／分子量

＝2.00×10^－6／54.1＝3.70×10^－8(mol)

式3：添加用ガス中の1―メチルシクロプロペンの分圧(atm)

P＝4814(μL／L)×1(atm)＝4.814×10^－3(atm)

式4：添加用ガス1mL中の1―メチルシクロプロペンのモル数(mol／mL)

n_B＝PV／RT＝4.814×10^－3×0.001／0.08206／297＝1.98×10^－7(mol／mL)

式5：添加用ガスの必要量

必要量(mL)＝n_A(mol)／n_B(mol／mL)

＝3.70×10^－8(mol)／1.98×10^－7(mol／mL)

＝0.187(mL)

11．参考文献

1)1―メチルシクロプロペンの試験法開発に用いた密閉容器の概要(資料1)

2)1―メチルシクロプロペン農薬抄録

12．類型

D

メトコナゾール試験法(農産物)

1．分析対象化合物

メトコナゾール(シス体及びトランス体)

2．装置

アルカリ熱イオン化検出器付きガスクロマトグラフ(GC―FTD)又は高感度窒素・リン検出器付きガスクロマトグラフ(GC―NPD)

ガスクロマトグラフ・質量分析計(GC／MS)

3．試薬、試液

次に示すもの以外は、総則の3に示すものを用いる。

メトコナゾール(シス体)標準品　本品はメトコナゾール(シス体)98％以上を含み、融点は110～113℃である。

メトコナゾール(トランス体)標準品　本品はメトコナゾール(トランス体)98％以上を含み、融点は110～113℃である。

4．試験溶液の調製

1)　抽出

(1)　穀類の場合

試料10.0gを量り採り、水20mLを加え、2時間放置する。

これにアセトン100mLを加え、ホモジナイズした後、吸引ろ過する。ろ紙上の残留物に、アセトン50mLを加えてホモジナイズし、上記と同様にろ過する。得られたろ液を合わせて40℃以下で約30mLまで濃縮する。これに10％塩化ナトリウム溶液100mLを加え、酢酸エチル及びn―ヘキサン(1：1)混液100mL及び50mLで2回振とう抽出する。抽出液に無水硫酸ナトリウムを加えて脱水し、無水硫酸ナトリウムをろ別した後、40℃以下で濃縮し、溶媒を除去する。

この残留物にn―ヘキサン50mLを加え、n―ヘキサン飽和アセトニトリル50mLずつで3回振とう抽出する。抽出液を合わせ、40℃以下で濃縮し、溶媒を除去する。この残留物にアセトン5mLを加えて溶かす。

(2)　果実の場合

果実(みかんの果皮を除く)の場合は、試料20.0gを量り採る。みかんの果皮の場合は、試料10.0gを量り採る。

これにアセトン100mLを加え、ホモジナイズした後、吸引ろ過する。ろ紙上の残留物に、アセトン50mLを加えてホモジナイズし、上記と同様にろ過する。得られたろ液を合わせて40℃以下で約30mLまで濃縮する。これに10％塩化ナトリウム溶液100mLを加え、酢酸エチル及びn―ヘキサン(1：1)混液100mL及び50mLで2回振とう抽出する。抽出液に無水硫酸ナトリウムを加えて脱水し、無水硫酸ナトリウムをろ別した後、40℃以下で濃縮し、溶媒を除去する。この残留物にアセトン5mLを加えて溶かす。

2)　精製

(1)　グラファイトカーボンカラムクロマトグラフィー

グラファイトカーボンミニカラム(500mg)にアセトン10mLを注入し、流出液は捨てる。このカラムに、1)で得られた溶液を注入した後、さらにアセトン15mLを注入する。全溶出液を40℃以下で濃縮し、溶媒を除去する。この残留物に酢酸エチル及びn―ヘキサン(1：9)混液5mLを加えて溶かす。

(2)　アミノプロピルシリル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー

アミノプロピルシリル化シリカゲルミニカラム(360mg)に酢酸エチル及びn―ヘキサン(1：9)混液10mLを注入し、流出液は捨てる。このカラムに(1)で得られた溶液を注入し、流出液は捨てる。さらに、酢酸エチル及びn―ヘキサン(1：9)混液10mLを注入し、流出液は捨てる。次いで、酢酸エチル及びn―ヘキサン(1：1)混液15mLを注入し、溶出液を40℃以下で濃縮し、溶媒を除去する。この残留物をアセトンに溶解し、正確に2mL(穀類の場合は1mL、みかんの果皮の場合は10mL)としたものを試験溶液とする。

5．検量線の作成

メトコナゾール(シス体)標準品及びメトコナゾール(トランス体)標準品の各0.05～1.0mg／Lアセトンの混合標準溶液を数点調製し、それぞれ2μLをGCに注入し、ピーク高法又はピーク面積法で検量線を作成する。

6．定量

試験溶液2μLをGCに注入し、5の検量線でメトコナゾール(シス体)及びメトコナゾール(トランス体)の含量を求め、メトコナゾール(シス体)及びメトコナゾール(トランス体)の和としてメトコナゾールの含量を求める。

7．確認試験

GC／MSにより確認する。

8．測定条件

1)　GC

検出器：FTD又はNPD

カラム：メチルシリコン、内径0.53mm、長さ30m、膜厚1μm

カラム温度：150℃(1分)―10℃／分―280℃(1分)

注入口温度：280℃

検出器温度：320℃

キャリヤーガス：ヘリウム

保持時間の目安：メトコナゾール(シス体)11.4分、メトコナゾール(トランス体)11.7分

2)　GC／MS

カラム：5％フェニル―メチルシリコン　内径0.25mm、長さ30m、膜厚0.25μm

カラム温度：150℃(1分)―10℃／分―300℃(1分)

注入口温度：250℃

キャリヤーガス：ヘリウム

イオン化モード(電圧)：EI(70eV)

主なイオン(m／z)：319、250、125(シス体及びトランス体とも共通)注入量：1μL

保持時間の目安：メトコナゾール(シス体)13.5分、メトコナゾール(トランス体)13.8分

9．定量限界

メトコナゾール(シス体)及びメトコナゾール(トランス体)の総和として0.01mg／kg(みかんの果皮の場合は、0.1mg／kg)

10．留意事項

1)　試験法の概要

メトコナゾール(シス体)及びメトコナゾール(トランス体)を試料からアセトンで抽出し、酢酸エチル及びn―ヘキサン混液に転溶する。果実はそのまま、穀類はアセトニトリル／ヘキサン分配で脱脂した後、グラファイトカーボンミニカラム及びアミノプロピルシリル化シリカゲルミニカラムで精製した後、GC(FTD又はNPD)で測定し、GC／MSで確認する方法である。

2)　注意点

(1)　液々分配においてエマルジョン等により分配が不良となる場合は、多孔性ケイソウ土カラム(試料20mL用)を利用する方法に変更するとよい。操作概要：試料抽出液を約20mLまで濃縮し、カラムに負荷した後、n―ヘキサン120mLで溶出する。

(2)　精製が不十分な場合は、フロリジルミニカラム(910mg)による精製を追加するとよい。操作概要：残留物をアセトン及びn―ヘキサン(1：9)混液5mLに溶解し、カラムに負荷した後、アセトン及びn―ヘキサン(1：9)混液10mLで洗浄、アセトン及びn―ヘキサン(3：7)混液15mLで溶出する。

11．参考文献

なし

12．類型

C

メトプレン試験法(農産物)

1．分析対象化合物

メトプレン

2．装置

紫外分光光度型検出器付き高速液体クロマトグラフ(HPLC―UV)

液体クロマトグラフ・質量分析計(LC／MS)

ガスクロマトグラフ・質量分析計(GC／MS)

3．試薬、試液

次に示すもの以外は、総則の3に示すものを用いる。

メトプレン標準品　本品はメトプレン98％以上を含む

4．試験溶液の調製

1)　抽出

穀類及び豆類の場合は、試料10.0gを量り採り、水20mLを加え、2時間放置する。

野菜の場合は、試料20.0gを量り採る。

これにアセトニトリル100mLを加え、ホモジナイズした後、吸引ろ過する。ろ紙上の残留物に、アセトニトリル50mLを加え、ホモジナイズした後、上記と同様にろ過する。得られたろ液を合わせ、塩化ナトリウム7gを加え、振とうした後、静置し、分離した水層を捨てる。

アセトニトリル層をアセトニトリル飽和n―ヘキサン20mLで洗浄した後、40℃以下で濃縮し、溶媒を除去する。残留物を酢酸エチル30mLに溶かし、無水硫酸ナトリウムを加えて脱水し、無水硫酸ナトリウムをろ別した後、ろ液を40℃以下で濃縮し、溶媒を除去する。この残留物をn―ヘキサン5mLに溶かす。

2)　精製

クロマトグラフ管(内径15mm)に、カラムクロマトグラフィー用合成ケイ酸マグネシウム5gをエーテル及びn―ヘキサン(1：19)混液に懸濁させて充てんし、無水硫酸ナトリウム約5gを積層する。このカラムに1)で得られた溶液を注入した後、流出液は捨てる。さらに、エーテル及びn―ヘキサン(1：19)混液40mLを注入し、流出液は捨てる。次いで、エーテル及びn―ヘキサン(3：17)混液80mLを注入する。溶出液を40℃以下で濃縮し、溶媒を除去する。この残留物をメタノールに溶解し、正確に2mLとしたものを試験溶液とする。

5．検量線の作成

メトプレン標準品の0.05～1.0mg／Lメタノール溶液を数点調製し、それぞれ20μLをHPLCに注入し、ピーク高法又はピーク面積法で検量線を作成する。

6．定量

試験溶液20μLをHPLCに注入し、5の検量線でメトプレンの含量を求める。

7．確認試験

LC／MS又はGC／MSにより確認する。

8．測定条件

1)　HPLC

検出器：UV(265nm)

カラム：オクタデシルシリル化シリカゲル(粒径5μm)、内径4.6mm、長さ150mm

カラム温度：40℃

移動相：水及びメタノール(1：9)混液

移動相流速：0.8mL／分

保持時間の目安：7分

2)　LC／MS

カラム：オクタデシルシリル化シリカゲル(粒径5μm)、内径2mm、長さ150mm

カラム温度：40℃

移動相：アセトニトリル及び水(9：1)混液

移動相流速：0.2mL／分

イオン化モード：ESI(＋)

主なイオン(m／z)：311、279

注入量：1μL

保持時間の目安：8分

3)　GC／MS

カラム：5％フェニル―メチルシリコン、内径0.25mm、長さ30m、膜厚0.25μm

カラム温度：80℃(2分)―20℃／分―200℃(2分)―10℃／分―260℃(8分)

注入口温度：250℃

キャリヤーガス：ヘリウム

キャリヤーガス流速：1mL／分

イオン化モード(電圧)：EI(70eV)

主なイオン(m／z)：175、153、111

注入量：1μL

保持時間の目安：11分

9．定量限界

0.01mg／kg

10．留意事項

1)　試験法の概要

メトプレンを試料からアセトニトリルで抽出し、塩析で水層を除いた後、アセトニトリル飽和n―ヘキサンで洗浄する。合成ケイ酸マグネシウムカラムで精製した後、HPLC―UVで測定し、LC／MS又はGC／MSで確認する方法である。

2)　注意点

(1)　HPLCでは、メトプレンが溶出した後に、成分由来のピークが出現する。

(2)　GC／MSで確認する場合は、試験溶液をn―ヘキサンに置換する。精製が不十分な場合は、試験溶液を中性アルミナミニカラムに負荷し、エーテル及びn―ヘキサン(3：17)混液20mLで溶出する精製法を追加するとよい。

11．参考文献

斎藤　勲ら、HPLCによる食品中メトプレンの分析法、食衛誌、47，173(2006)

12．類型

C

メトリブジン試験法(農産物)

1．分析対象化合物

メトリブジン、メトリブジン脱アミノ体(DA)〔6―(1，1―ジメチルエチル)―3―(メチルチオ)―1，2，4―トリアジン―5(4H)―オン〕、メトリブジンメチルチオ基脱離酸化体(DK)〔4―アミノ―6―(1，1―ジメチルエチル)―1，2，4―トリアジン―3，5(2H，4H)―ジオン〕、メトリブジンメチルチオ基脱離酸化物脱アミノ体(DADK)〔6―(1，1―ジメチルエチル)―1，2，4―トリアジン―3，5(2H，4H)―ジオン〕

2．装置

アルカリ熱イオン化検出器，高感度窒素・リン検出器又は電子捕獲型検出器付きガスクロマトグラフ及びガスクロマトグラフ・質量分析計を用いる。

3．試薬、試液

総則の3に示すものを用いる。

4．標準品

メトリブジン　本品はメトリブジン99％以上を含む。

融点　本品の融点は125°である。

4―アミノ―6―(1，1―ジメチルエチル)―1，2，4―トリアジン―3，5(2H，4H)―ジオン(以下「DK」という。)　本品はDK99％以上を含む。

融点　本品の融点は164～166°である。

6―(1，1―ジメチルエチル)―1，2，4―トリアジン―3，5(2H，4H)―ジオン(以下「DADK」という。)　本品はDADK99％以上を含む。

融点　本品の融点は279～283°である。

6―(1，1―ジメチルエチル)―3―(メチルチオ)―1，2，4―トリアジン―5(4H)―オン(以下「DA」という。)　本品はDA99％以上を含む。

融点　本品の融点は192～194°である。

5．試験溶液の調製

a　抽出法

穀類、豆類及び種実類の場合は、検体を420μmの標準網ふるいを通るように粉砕した後、その20.0gを量り採り、水40mlを加え、2時間放置する。

野菜の場合は、検体約1kgを精密に量り、必要に応じ適量の水を量つて加え、細切均一化した後、検体20.0gに相当する量を量り採る。

茶及びホップの場合は、検体を粉砕した後、5.00gを量り採り、水20mlを加え、2時間放置する。

これにメタノール100mlを加え，振とう機を用いて30分間激しく振り混ぜた後，静置し，ケイソウ土を1cmの厚さに敷いたろ紙を用いてすり合わせ減圧濃縮器中に吸引ろ過する。ろ紙上の残留物を採り，メタノール50mlを加え，振とう機を用いて30分間激しく振り混ぜた後，静置し，上記と同様に操作して，ろ液をその減圧濃縮器中に合わせ，40°以下でメタノールを除去する。

これに20％塩化ナトリウム溶液200ml及びジクロロメタン100mlを加え，500mlの分液漏斗に移し，振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後，静置し，ジクロロメタン層を500mlの三角フラスコに移す。水層にジクロロメタン100mlを加え，上記と同様に操作して，ジクロロメタン層を上記の三角フラスコに合わせる。これに適量の無水硫酸ナトリウムを加え，時々振り混ぜながら15分間放置した後，すり合わせ減圧濃縮器中にろ過する。次いでジクロロメタン20mlを用いて三角フラスコを洗い，その洗液でろ紙上の残留物を洗う。洗液をその減圧濃縮器中に合わせ，40°以下でジクロロメタンを除去する。

この残留物にアセトニトリル飽和n―ヘキサン30ml及びn―ヘキサン飽和アセトニトリル30mlを加えて溶かす。これを100mlの分液漏斗に移し，振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後，静置し，アセトニトリル層を200mlの分液漏斗に移す。n―ヘキサン層にn―ヘキサン飽和アセトニトリル30mlを加え，上記と同様に操作して，アセトニトリル層を上記の分液漏斗に合わせる。これにアセトニトリル飽和n―ヘキサン50mlを加え，振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後，静置し，アセトニトリル層をすり合わせ減圧濃縮器中に採り，40°以下でアセトニトリルを除去する。この残留物にジクロロメタン10mlを加えて溶かす。

b　精製法

内径15mm，長さ300mmのクロマトグラフ管に，カラムクロマトグラフィー用シリカゲル(63～200μm)10gをジクロロメタンに懸濁したもの，次いでその上に無水硫酸ナトリウム約5gを入れ，カラムの上端に少量のジクロロメタンが残る程度までジクロロメタンを流出させる。このカラムにa　抽出法で得られた溶液を注入した後，ジクロロメタン200mlを注入し，最初の流出液100mlは捨てる。次の流出液100mlを200mlの三角フラスコ(Ⅰ)に採る。次いでジクロロメタン及びメタノールの混液(97：3)150mlを注入し，流出液を200mlの三角フラスコ(Ⅱ)に採り，これに2％ジエチレングリコールメタノール溶液0.1mlを加える。各流出液をそれぞれすり合わせ減圧濃縮器中に移し，40°以下でジクロロメタン及びメタノールを除去する。三角フラスコ(Ⅰ)に採つた流出液の残留物にメタノールを加えて溶かし，正確に4mlとして，これをメトリブジンの試験の試験溶液とする。三角フラスコ(Ⅱ)に採つた流出液の残留物にメタノールを加えて溶かし，正確に2mlとして，これをDK，DADK及びDAの試験の試験溶液とする。

6．操作法

a　定性試験

次の操作条件で試験を行う。試験結果は標準品と一致しなければならない。

操作条件

カラム　内径0.53mm，長さ30mのケイ酸ガラス製の細管に，ガスクロマトグラフィー用50％トリフルオロプロピル―メチルシリコン又はガスクロマトグラフィー用ポリエチレングリコールを1.5μmの厚さでコーティングしたもの。

カラム温度　180～220°

試験溶液注入口温度　270～280°

注入方式　電子捕獲型検出器の場合はスプリットレス

検出器　270°で操作する。

ガス流量　キャリヤーガスとしてヘリウムを用いる。メトリブジンの試験を行う場合は，メトリブジンが約6分で流出する流速に調整する。DK，DADK及びDAの試験を行う場合は，DAが約8分で流出する流速に調整する。アルカリ熱イオン化検出器又は高感度窒素・リン検出器を用いる場合は，空気及び水素の流量を至適条件に調整する。

b　定量試験

a　定性試験と同様の操作条件で得られた試験結果に基づき，メトリブジン，DK，DADK及びDAのそれぞれについてピーク高法又はピーク面積法により定量を行い，メトリブジン，DK，DADK及びDAの含量を求め，次式により，DK，DADK及びDAを含むメトリブジンの含量を求める。

メトリブジン(DK，DADK及びDAを含む。)の含量(ppm)＝A＋B×1.17＋C×1.27＋D×1.08

A：メトリブジンの含量(ppm)

B：DKの含量(ppm)

C：DADKの含量(ppm)

D：DAの含量(ppm)

c　確認試験

a　定性試験と同様の操作条件でガスクロマトグラフィー・質量分析を行う。試験結果は標準品と一致しなければならない。また，必要に応じ，ピーク高法又はピーク面積法により定量を行う。

7．定量限界

0.01mg／kg

8．留意事項

メトリブジンは、メトリブジン、メトリブジン脱アミノ体(DA)、メトリブジンメチルチオ基脱離酸化体(DK)及びメトリブジンメチルチオ基脱離酸化物脱アミノ体(DADK)のそれぞれについて定量を行い、メトリブジン脱アミノ体(DA)、メトリブジンメチルチオ基脱離酸化体(DK)及びメトリブジンメチルチオ基脱離酸化物脱アミノ体(DADK)についてはそれぞれの含量に係数を乗じてメトリブジンの含量に換算し、これらの和を分析値とすること。

9．参考文献

なし

10．類型

A

メパニピリム試験法(農産物)

1．分析対象化合物

メパニピリム、メパニピリムプロパノール体〔1―(2―アニリノ―6―メチルピリミジン―4―イル)―2―プロパノール〕

2．装置

紫外分光光度型検出器付き高速液体クロマトグラフを用いる。

3．試薬、試液

次に示すもの以外は，総則の3に示すものを用いる。

カラムクロマトグラフィー用シリカゲル　カラムクロマトグラフィー用に製造したシリカゲル(粒径150～425μm)を130°で12時間以上加熱した後，デシケーター中で放冷する。これに対して水10％を加える。

酢酸緩衝液　0.2mol酢酸ナトリウム溶液に0.2mol／l酢酸を加えてpH5に調整する。

4．標準品

メパニピリム　本品はメパニピリム99％以上を含む。

融点　本品の融点は133°である。

1―(2―アニリノ―6―メチルピリミジン―4―イル)―2―プロパノール(以下「プロパノール体」という。)　本品はプロパノール体98％以上を含む。

融点　本品の融点は115～116°である。

5．試験溶液の調製

a　抽出法

豆類の場合は，検体を420μmの標準網ふるいを通るように粉砕した後，その10.0gを量り採り，水20mlを加え，2時間放置する。

果実及び野菜の場合は，検体約1kgを精密に量り，必要に応じ適量の水を量つて加え，細切均一化した後，検体20.0gに相当する量を量り採る。

これにアセトン100mlを加え，3分間細砕した後，ケイソウ土を1cmの厚さに敷いたろ紙を用いてすり合わせ減圧濃縮器中に吸引ろ過する。ろ紙上の残留物を採り，アセトン50mlを加え，3分間細砕した後，上記と同様に操作して，ろ液をその減圧濃縮器中に合わせ，40°以下で約30mlに濃縮する。

これを100mlの遠心分離管に移す。酢酸緩衝液25mlを用いて上記の減圧濃縮器のナス型フラスコを洗い，洗液を上記の遠心分離管に合わせる。1mol／l水酸化ナトリウム溶液を加えてpH5に調整する。これに37°，pH5.0で1分間にサリシンからグルコースを約50μmol遊離させる量のβ―グルコシダーゼ及び37°，pH5.0で1分間にセルロースからグルコースを約300μmol遊離させる量のセルラーゼを加え，栓をして，37°で振とう機を用いて軽く振り混ぜながら18時間放置する。これに1mol／l水酸化ナトリウム溶液を加えてpH8～9に調整する。

これを300mlの分液漏斗に移す。酢酸エチル50mlを用いて上記の遠心分離管を洗い，洗液を上記の分液漏斗に合わせる。振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後，静置し，酢酸エチル層を200mlの三角フラスコに移す。水層に酢酸エチル50mlを加え，上記と同様に操作して，酢酸エチル層を上記の三角フラスコに合わせる。これに適量の無水硫酸ナトリウムを加え，時々振り混ぜながら15分間放置した後，すり合わせ減圧濃縮器中にろ過する。次いで酢酸エチル20mlを用いて三角フラスコを洗い，その洗液でろ紙上の残留物を洗う操作を2回繰り返す。両洗液をその減圧濃縮器中に合わせ，40°以下で酢酸エチルを除去する。この残留物に酢酸エチル及びn―ヘキサンの混液(1：9)5mlを加えて溶かす。

b　精製法

内径15mm，長さ300mmのクロマトグラフ管に，カラムクロマトグラフィー用シリカゲル10gを酢酸エチル及びn―ヘキサンの混液(1：9)に懸濁したもの，次いでその上に無水硫酸ナトリウム約5gを入れ，カラムの上端に少量の酢酸エチル及びn―ヘキサンの混液(1：9)が残る程度まで酢酸エチル及びn―ヘキサンの混液(1：9)を流出させる。このカラムにa　抽出法で得られた溶液を注入した後，酢酸エチル及びn―ヘキサンの混液(1：9)25mlを注入し，流出液は捨てる。次いで酢酸エチル及びn―ヘキサンの混液(1：9)70mlを注入し，流出液をすり合わせ減圧濃縮器(Ⅰ)中に採る。さらに，酢酸エチル及びn―ヘキサンの混液(1：3)40mlを注入し，流出液は捨てる。次いで酢酸エチル及びn―ヘキサンの混液(1：3)100mlを注入し，流出液をすり合わせ減圧濃縮器(Ⅱ)中に採り，それぞれ40°以下で酢酸エチル及びn―ヘキサンを除去する。すり合わせ減圧濃縮器(Ι)中に採つた流出液の残留物にエーテル及びn―ヘキサンの混液(1：19)5mlを加えて溶かし，すり合わせ減圧濃縮器(Ⅱ)中に採つた流出液の残留物に酢酸エチル及びn―ヘキサンの混液(1：19)5mlを加えて溶かす。

(1)　合成ケイ酸マグネシウムミニカラムクロマトグラフィー

合成ケイ酸マグネシウムミニカラム(900mg)に，エーテル5mlを注入し，流出液は捨てる。n―ヘキサン10mlを注入し，流出液は捨てる。このカラムにすり合わせ減圧濃縮器(Ι)中の溶液を注入し，流出液は捨てる。次いでエーテル及びn―ヘキサンの混液(1：19)15mlを注入し，流出液は捨てる。次いでエーテル及びn―ヘキサンの混液(3：7)20mlを注入し，流出液をすり合わせ減圧濃縮器中に採り，40°以下でエーテル及びn―ヘキサンを除去する。この残留物にアセトニトリル及び水の混液(1：1)を加えて溶かし，正確に4ml(豆類の場合は2ml)として，これをメパニピリムの試験溶液とする。

(2)　アミノプロピルシリル化シリカゲルミニカラムクロマトグラフィー

アミノプロピルシリル化シリカゲルミニカラム(360mg)に，酢酸エチル5mlを注入し，流出液は捨てる。n―ヘキサン10mlを注入し，流出液は捨てる。このカラムにすり合わせ減圧濃縮器(Ⅱ)中の溶液を注入し，流出液は捨てる。次いで酢酸エチル及びn―ヘキサンの混液(1：19)15mlを注入し，流出液は捨てる。次いで酢酸エチル及びn―ヘキサンの混液(3：17)30mlを注入し，流出液をすり合わせ減圧濃縮器中に採り，40°以下で酢酸エチル及びn―ヘキサンを除去する。この残留物にアセトニトリル及び水の混液(1：1)を加えて溶かし，正確に4ml(豆類の場合は2ml)として，これをプロパノール体の試験溶液とする。

6．操作法

a　定性試験

次の操作条件で試験を行う。試験結果は標準品と一致しなければならない。

操作条件

カラム充てん剤　オクタデシルシリル化シリカゲル(粒径5μm)を用いる。

クロマトグラフ管　内径4～4.6mm，長さ250mmのステンレス管を用いる。

カラム温度　40°

検出器　波長270nmで操作する。

移動相　アセトニトリル及び水の混液(1：1)を用いる。メパニピリムの試験を行う場合は，メパニピリムが約18分で流出する流速に調整する。プロパノール体の試験を行う場合は，プロパノール体が約7分で流出する流速に調整する。

b　定量試験

a　定性試験と同様の操作条件で得られた試験結果に基づき，メパニピリム及びプロパノール体のそれぞれについてピーク高法又はピーク面積法により定量を行い，メパニピリム及びプロパノール体の含量を求め，次式によりプロパノール体を含むメパニピリムの含量を求める。

メパニピリム(プロパノール体を含む。)の含量(ppm)＝A＋B×0.92

A：メパニピリムの含量(ppm)

B：プロパノール体の含量(ppm)

7．定量限界

0.01mg／kg

8．留意事項

メパニピリムは、メパニピリム及びメパニピリムプロパノール体のそれぞれについて定量を行い、メパニピリムプロパノール体についてはその含量に係数を乗じてメパニピリムの含量に換算し、これらの和を分析値とすること。

9．参考文献

なし

10．類型

A

モリネート試験法(農産物)

1．分析対象化合物

モリネート

2．装置

アルカリ熱イオン化検出器又は高感度窒素・リン検出器付きガスクロマトグラフ及びガスクロマトグラフ・質量分析計並びに水蒸気蒸留装置を用いる。水蒸気蒸留装置はガラス製で，その概略は，次の図による。

A：1,000mlの丸底フラスコ(水蒸気発生用)

B：1,000mlの丸底フラスコ(蒸留用)

C：蒸留トラップ

D：冷却管

E：500mlの三角フラスコ

3．試薬、試液

総則の3に示すものを用いる。

4．標準品

モリネート　本品はモリネート99％以上を含む。

沸点　本品の沸点は137°(減圧・1.33kPa)である。

5．試験溶液の調製

検体を420μmの標準網ふるいを通るように粉砕した後，その50.0gを1,000mlの丸底フラスコ(蒸留用)に量り採り，水400ml及び消泡用シリコン数滴を加える。別に1,000ml丸底フラスコ(水蒸気発生用)に水1,000mlを入れる。1,000mlの丸底フラスコ(蒸留用)を加熱しながら，1,000ml丸底フラスコ(水蒸気発生用)を加熱して，500mlの三角フラスコ中の留出液が200mlになるまで水蒸気蒸留する。蒸留が40分間で終了するよう加熱強度を調節する。留出液を500mlの分液漏斗に移す。これに1mol／l塩酸1ml，塩化ナトリウム20g及びn―ヘキサン50mlを加え，振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後，静置し，n―ヘキサン層を300mlの三角フラスコに移す。水層にn―ヘキサン50mlを加え，上記と同様に操作して，n―ヘキサン層を300mlの三角フラスコに合わせる。これに適量の無水硫酸ナトリウムを加え，時々振り混ぜながら15分間放置した後，すり合わせ減圧濃縮器中にろ過する。n―ヘキサン10mlを用いて300mlの三角フラスコを洗い，その洗液でろ紙上の残留物を洗う操作を2回繰り返す。両洗液をその減圧濃縮器中に合わせ，アセトン及びジエチレングリコールの混液(49：1)0.5mlを加え，40°以下で大部分のn―ヘキサンを除去する。この残留物にアセトンを加えて溶かし，正確に4mlとして，これを試験溶液とする。

6．操作法

a　定性試験

次の操作条件で試験を行う。試験結果は標準品と一致しなければならない。

操作条件

カラム　内径0.53mm，長さ30mのケイ酸ガラス製の細管に，ガスクロマトグラフィー用5％フェニル―メチルシリコンを1.5μmの厚さでコーティングしたもの。

カラム温度　180°で8分間保持し，その後毎分12°で昇温する。220°に到達後，7分間保持する。

試験溶液注入口温度　220°

検出器　230°で操作する。

ガス流量　キャリヤーガスとしてヘリウムを用いる。モリネートが4～7分で流出する流速に調整する。空気及び水素の流量を至適条件に調整する。

b　定量試験

a　定性試験と同様の操作条件で得られた試験結果に基づき，ピーク高法又はピーク面積法により定量を行う。

c　確認試験

a　定性試験と同様の操作条件でガスクロマトグラフィー・質量分析を行う。試験結果は標準品と一致しなければならない。また，必要に応じ，ピーク高法又はピーク面積法により定量を行う。

7．定量限界

0.02mg／kg

8．留意事項

なし

9．参考文献

なし

10．類型

A

ヨウ化メチル試験法(農産物)

1．分析対象化合物

ヨウ化メチル

2．装置

電子捕獲型検出器付きガスクロマトグラフ(GC―ECD)

蒸留装置　図に示すものを用いる。

3．試薬、試液

次に示すもの以外は、総則の3に示すものを用いる。

ヨウ化メチル標準品　本品はヨウ化メチル99％以上を含む。

4．試験溶液の調製

①穀類、豆類、種実類、果実及び野菜の場合

試料を冷凍し、約5mm角以下に細切した後、その40.0gを蒸留フラスコに量り採り、水200mL及びn―ヘキサン5mLを加える。これに消泡用シリコンを数滴加えた後、蒸留装置に取り付ける。蒸留フラスコ及び受器を低温循環装置を用いて2℃以下に冷却した冷却管でつなぎ、冷却管の先端を受器の液中に浸し、受器を氷水で冷却する。受器はあらかじめn―ヘキサン4mLを入れ、氷水で冷却しておく。蒸留フラスコをマントルヒーターを用いて約20分間加熱し、受器にn―ヘキサン及び約1mLの水を捕集する。捕集したn―ヘキサン層を20mLメスフラスコへ移し、n―ヘキサンを加えて正確に20mLとしたものを試験溶液とする。