今般、「食品中の食品添加物分析法」の改正について(平成16年5月13日付食安基発0513003号)が通知されたことに伴い、「栄養表示基準における栄養成分等の分析方法等について」(平成11年4月26日付衛新第13号新開発食品保健対策室長通知)の一部を下記のように改正することとしたので、貴管下関係者に対する周知徹底を始め、その運用に遺憾のないようにされたい。

記

栄養成分等の分析方法等の「29　ビタミンC」に、L―アスコルビン酸2―グルコシドの試験方法(定量法)を別添1のとおり追加する。

【別添1】

(5)　逆相高速液体クロマトグラフ法

本法は、L―アスコルビン酸2―グルコシドを含む食品に適用される。

①　機器

・高速液体クロマトグラフ：紫外部吸収検出器付き

・遠心分離機

②　試薬

・アセトニトリル：高速液体クロマトグラフ用

・リン酸二水素カリウム：特級

・テトラブチルアンモニウムヒドロキシド：特級、10％水溶液

・リン酸溶液：20％水溶液

・水：水道水を超純水製造装置で処理した水

③　試料液の調製

1)　液状食品(不溶物をほとんど含まないもの)

試料約5.0gを精密に量り、移動相^注1)を加えて正確に50mlとする。不溶物がある場合は遠心分離し、メンブランフィルター(0.45μm)でろ過したものを試料液とする。

2)　粉体及び固体食品(半液状食品を含む)

試料を粉砕してその約5.0gを精密に量り、移動相30mlを加えて10分間攪拌又は振とうする。不溶物がある場合はろ過又は遠心分離し、ろ液又は上澄液は50ml容メスフラスコなどの受器に捕集する。ろ過残さ又は沈殿を少量の移動相で数回洗浄し、洗液も先の受器に合わせて捕集し、さらに移動相を加えて正確に50mlとする。この液をメンブランフィルター(0.45μm)でろ過したものを試料液とする。

④　検量線用標準液の調製

L―アスコルビン酸2―グルコシド約0.10gを精密に量り、移動相^注1)を加えて溶かして正確に100mlとする。その20mlを正確に量り、移動相を加えて正確に200mlとしたものを標準液とする(この液1mlは、L―アスコルビン酸2―グルコシド約100μgを含む)。標準液1～50mlを正確に量り、移動相を加えて正確に100mlとし、検量線用標準液とする(この液1mlは、L―アスコルビン酸2―グルコシド約1～50μgを含む)。

⑤　測定，計算

1)　測定条件

紫外部吸収検出器付高速液体クロマトグラフを用い、次の条件により測定する^注2)。

カラム充てん剤^注3)：オクタデシルシリル化シリカゲル

カラム管：内径4.6mm、長さ250mm

カラム温度：40℃

移動相：水800mlにリン酸二水素カリウム1.4gとテトラブチルアンモニウムヒドロキシド26mlを加え、リン酸水溶液でpH5.2に調整した後、水で1000mlとする。この液900mlとアセトニトリル100mlを混和したもの。

流速：0.8ml／分

測定波長：260nm

2)　検量線

検量線用標準液それぞれ10μlずつを正確に量り、液体クロマトグラフに注入し、ピーク面積からL―アスコルビン酸2―グルコシドの検量線を作成する^注4)。

3)　定量^注5―7)及び計算

試料液10μlを正確に量り、液体クロマトグラフに注入し、得られたピーク面積と検量線から試料液中のL―アスコルビン酸2―グルコシド濃度A(μg／ml)を求め、次式によって試料中のL―アスコルビン酸2―グルコシド含量(mg／100g)を計算する。

L―アスコルビン酸2―グルコシド(mg／100g)＝(A×50×100)／(W×1000)

A：試料液中のL―アスコルビン酸2―グルコシド濃度(μg／ml)

W：試料の採取量(g)

［注］

1)　L―アスコルビン酸2―グルコシドは、水、5％メタリン酸溶液に比べ、移動相に溶かしたときに最も安定である。

2)　本法のほかに、次の条件でも測定できる。カラム充てん剤：アミノプロピル基を化学結合したシリカゲル、カラム管：内径4.6mm長さ250mm、移動相：アセトニトリル／リン酸二水素カリウム・0.5vol％リン酸溶液(5.44→1000)の混液(60：40)、流速：0.7ml／分、そのほかの条件は本法と同じ。この条件で測定したときの検出下限は0.25mg／100gである。

3)　液体クロマトグラフィーのカラムとしては、TSKgel ODS―80Ts QAなどが使用出来る。

4)　試料液の濃度が検量線の濃度範囲を超える場合、試料液を移動相で適宜希釈するか、試料採取量を減らして試験する。

5)　本法の検出下限は0.10mg／100gである。なお、清涼飲料水、飴及び錠菓における添加回収率は98.2～99.1％である。