ニトロフラゾン試験法

1.装置

液体クロマトグラフ・質量分析計を用いる。

2.試薬・試液

次に示すもの以外は、第2 添加物の部C 試薬・試液等の項に示すものを用いる。

アセトニトリル 液体クロマトグラフ用に製造したものを用いる。

水 液体クロマトグラフ用に製造したものを用いる。

3.標準品

ニトロフラゾン 本品はニトロフラゾン99%以上を含む。

 融点 本品の融点は238〜240℃である。

4.試験溶液の調製

a はちみつの場合

検体を均一化した後、その5.00gを量り採る。

これに0.1 mol/l塩酸10 mlを加え、溶解する。次いでアセトニトリル20 ml及び塩化ナトリウム5gを加え、振とう機を用いて10分間激しく振り混ぜた後、静置し、アセトニトリル層をすり合わせ減圧濃縮器中に移す。残留物及び水層にアセトニトリル20 mlを加え、上記と同様に操作して、アセトニトリル層を上記のすり合わせ減圧濃縮器中に合わせる。これにn−プロパノール10 mlを加えて、40℃以下でアセトニトリル及びn−プロパノールを除去する。この残留物に0.1vol%ギ酸含有メタノール1.0 mlを加えて溶かし、これを試験溶液とする。

b aに掲げる食品以外の食品の場合

検体を細切均一化した後、その5.00gを量り採る。なお筋肉の場合は、可能な限り脂肪層を除いた上で細切均一化を行う。

これにアセトニトリル30 ml、アセトニトリル飽和n−ヘキサン20 ml及び無水硫酸ナトリウム10gを加えて細砕した後、毎分3,000回転で5分間遠心分離し、アセトニトリル層をすり合わせ減圧濃縮器中に移す。アセトニトリル飽和n−ヘキサン層及び残留物にアセトニトリル20 mlを加え、振とう機を用いて10分間激しく振り混ぜた後、毎分3,000回転で5分間遠心分離し、アセトニトリル層を上記のすり合わせ減圧濃縮器中に合わせる。これにn−プロパノール10 mlを加えて、40℃以下でアセトニトリル及びn−プロパノールを除去する。この残留物に0.1vol%ギ酸含有メタノール溶液1.0 mlを加えて溶かし、これを試験溶液とする。

5.操作法

a 定性試験

 次の操作条件で試験を行う。試験結果は標準品と一致しなければならない。

操作条件

カラム充てん剤 オクタデシルシリル化シリカゲル(粒径2〜5μm)を用いる。

カラム管 内径 2.0〜6.0 mm、長さ100〜250 mmのステンレス管を用いる。

カラム温度 40℃

移動相 アセトニトリル及び10 mmol/l酢酸アンモニウムの混液(1:99)から(1:0)までの濃度勾配を35分間で行う。ニトロフラゾンが約20分で流出する流速に調整する。

b 定量試験

a 定性試験と同様の操作条件で得られた試験結果に基づき、ピーク高法又はピーク面積法により定量を行う。


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