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フェンヘキサミド試験法(畜水産物)


1. 分析対象化合物
 フェンヘキサミド

2. 装置
 液体クロマトグラフ・タンデム型質量分析計(LC-MS/MS)

3. 試薬、試液
 次に示すもの以外は、総則の3に示すものを用いる。
 フェンヘキサミド標準品 本品はフェンヘキサミド98%以上を含む。

4. 試験溶液の調製
1)抽出 (1)筋肉、肝臓、腎臓、乳、卵、魚介類及びはちみつの場合
 試料10.0gに1.5mol/Lリン酸30mLを加え、混合する。これにアセトン100mLを加え、ホモジナイズした後、吸引ろ過する。ろ紙上の残留物にアセトン50mLを加えてホモジナイズした後、上記と同様にろ過する。得られたろ液を合わせて、アセトンで正確に200mLとする。この4mLを採り、1vol%ギ酸16mLを加える。

(2)脂肪の場合
 試料5.00gに1.5mol/Lリン酸30mLを加え、混合する。これにアセトン100mLを加え、ホモジナイズした後、吸引ろ過する。ろ紙上の残留物にアセトン50mLを加えてホモジナイズした後、上記と同様にろ過する。得られたろ液を合わせて、アセトンで正確に200mLとする。この8mLを採り、1vol%ギ酸20mLを加える。

2)精製
 オクタデシルシリル化シリカゲルミニカラム(1,000mg)に、アセトニトリル及び水各5mLを順次注入し、流出液は捨てる。グラファイトカーボンミニカラム(500mg)に、アセトニトリル及び水各5mLを順次注入し、流出液は捨てる。オクタデシルシリル化シリカゲルミニカラムに1)で得られた溶液を注入した後、1vol%ギ酸・アセトニトリル及び水(3:7)溶液10mLを注入し、流出液は捨てる。次いで、このカラムの下部にグラファイトカーボンミニカラムを接続し、1vol%ギ酸・アセトニトリル及び水(7:3)溶液10mLを注入し、流出液は捨てる。オクタデシルシリル化シリカゲルミニカラムを除去した後、グラファイトカーボンミニカラムに1vol%ギ酸・アセトニトリル溶液30mLを注入し、溶出液を40℃以下で濃縮し、溶媒を除去する。この残留物をアセトニトリル及び水(1:1)混液に溶解し、正確に2mLとしたものを試験溶液とする。

5. 検量線の作成
 フェンヘキサミド標準品のアセトニトリル及び水(1:1)混液の溶液を数点調製し、それぞれLC-MS/MSに注入し、ピーク高法又はピーク面積法で検量線を作成する。なお、本法に従って試験溶液を調製した場合、試料中0.01mg/kgに相当する試験溶液中濃度は0.001mg/Lである。

6. 定量
 試験溶液をLC-MS/MSに注入し、5の検量線でフェンヘキサミドの含量を求める。

7. 確認試験
 LC-MS/MSにより確認する。

8. 測定条件
(例)
 カラム:オクタデシルシリル化シリカゲル内径2.0mm、長さ150mm、粒子径5μm
 カラム温度:40℃
 移動相:アセトニトリル及び2mmol/L酢酸アンモニウム溶液(3:7)から(9:1)までの濃度勾配を10分間で行い、(9:1)で5分間保持する。
 イオン化モード:ESI(−)又はESI(+)
 主なイオン(m/z):ESI(−);プリカーサーイオン300、プロダクトイオン264
 ESI(+);プリカーサーイオン302、プロダクトイオン97
 注入量:5μL
 保持時間の目安:8分

9. 定量限界
 0.01mg/kg

10. 留意事項
1)試験法の概要
 フェンヘキサミドを試料から酸性下アセトンで抽出し、オクタデシルシリル化シリカゲルミニカラム及びグラファイトカーボンミニカラムで精製した後、LC-MS/MSで定量及び確認する方法である。

2)注意点
(1)pH3未満の条件下で抽出を行う必要があること。
(2)フェンヘキサミドのLC-MS/MS測定で、試験法開発時に使用したイオンを以下に示す。
  定量用イオン(m/z):ESI(−);プリカーサーイオン300、プロダクトイオン264
  定性用イオン(m/z):ESI(+);プリカーサーイオン302、プロダクトイオン97
 また、そのほかのイオンの例を以下に示す。
ESI(−);プリカーサーイオン300、プロダクトイオン249

11. 参考文献
 なし

12. 類型
 C


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