プラジクアンテル試験法(畜水産物)

1.分析対象化合物

プラジクアンテル

2.装置

紫外分光光度型検出器付き高速液体クロマトグラフ(HPLC-UV)又は多波長検出器付き高速液体クロマトグラフ(HPLC-DAD)及び液体クロマトグラフ・質量分析計(LC/MS)

3.試薬、試液

次に示すもの以外は、総則の3に示すものを用いる。
アセトニトリル 液体クロマトグラフ用に製造したものを用いる。
水 液体クロマトグラフ用に製造したものを用いる。
メタノール 液体クロマトグラフ用に製造したものを用いる。

プラジクアンテル標準品 本品はプラジクアンテル98%以上を含み、融点は136〜140℃である。

4.試験溶液調製

1)抽出

試料5.00gを量り採り、アセトニトリル30 mLを加えて細砕した後、毎分2,800回転で5分間遠心分離し、アセトニトリル層を採る。残留物にアセトニトリル30 mLを加えて、振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後、毎分2,800回転で5分間遠心分離し、アセトニトリル層を先のアセトニトリル層に合わせる。これにアセトニトリル飽和n-ヘキサン30 mLを加えて、振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後、アセトニトリル層をすり合わせ減圧濃縮器中に採り、45℃以下でアセトニトリルを除去する。この残留物に水及びメタノール(3:2)混液10 mLを加えて溶かす。

2)オクタデシルシリル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー

オクタデシルシリル化シリカゲルミニカラム(1,000 mg)に、メタノール10 mL及び水15 mLを順次注入し、流出液は捨てる。このカラムに1)で得られた溶液を注入した後、水及びメタノール(3:2)混液25 mLを注入し、流出液は捨てる。このカラムにメタノール10 mLを注入し、溶出液をすり合わせ減圧濃縮器中に採り、45℃以下でメタノールを除去する。この残留物に酢酸エチル及びn-ヘキサン(1:4)混液2 mLを加えて溶かす。

3)シリカゲルカラムクロマトグラフィー

シリカゲルミニカラム(690 mg)に、酢酸エチル及びn-ヘキサン(1:4)混液5mL注入し、流出液は捨てる。このカラムに2)で得られた溶液を注入した後、酢酸エチル及びn-ヘキサン(1:4)混液8mLを注入し、流出液は捨てる。このカラムに酢酸エチル及びn-ヘキサン(3:2)混液10 mLを注入し、溶出液をすり合わせ減圧濃縮器中に採り、45℃以下で酢酸エチル及びn-ヘキサンを除去する。この残留物にアセトニトリル及び水(1:2)混液1.0 mLを加えて溶かし、これを試験溶液とする。

5.検量線の作成

プラジクアンテル標準品の10 mg/100 mLアセトニトリル溶液を調製し、アセトニトリル及び水(1:2)混液で希釈して0.05〜2.0 mg/Lの標準溶液を数点調製する。それぞれHPLC-UV又はHPLC-DADに注入し、ピーク高法又はピーク面積法で検量線を作成する。

6.定量

試験溶液をHPLC-UV又はHPLC-DADに注入し、5の検量線でプラジクアンテルの含量を求める。

7.確認試験

LC/MS又はLC/MS/MSにより確認する。

8.測定条件

HPLC
検出器:UV又はDAD(210 nm付近の極大波長)
カラム:オクタデシルシリル化シリカゲル 内径 2.0〜6.0 mm、長さ 100〜250 mm

粒子径2〜5μm

カラム温度:40℃

移動相:アセトニトリル及び水(1:2)混液

保持時間の目安:18分

9.定量限界

0.01 mg/kg

10.留意事項

1)試験法の概要

プラジクアンテルを試料からアセトニトリルで抽出し、アセトニトリル飽和n−ヘキサンで洗浄する。オクタデシルシリル化シリカゲルミニカラム次いでシリカゲルミニカラムで精製した後、HPLC-UV又はHPLC-DADで測定し、LC/MS又はLC/MS/MSで確認する方法である。

2)注意点

(1) HPLC-UV、HPLC-DAD、LC/MS及びLC/MS/MSにおける標準溶液及び試験溶液の標準的な注入量は、内径3.0 mmのカラムにおいて10μLであるが、カラム及び装置により最適な注入量が異なる場合があるので、必要に応じて最適注入量を検討すること。

(2) LC/MSにおける測定条件は用いる装置により、最適なイオン化方法、生成するイオンが異なる場合があるので、装置ごとに最適条件を検討すること。

(3) HPLC-UV又はHPLC-DADによる定量が困難な場合は、LC/MS又はLC/MS/MSにより定量すること。

11.参考文献

なし

12.類型

C


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