ツラスロマイシン試験法(畜水産物)

1.分析対象化合物
 ツラスロマイシン

2.装置
 液体クロマトグラフ・質量分析計(LC/MS又はLC/MS/MS)

3.試薬、試液
 次に示すもの以外は、総則の3に示すものを用いる。
 水 液体クロマトグラフ用に製造したものを用いる。
 メタノール 液体クロマトグラフ用に製造したものを用いる。
 ジビニルベンゼン-N-ビニルピロリドン共重合体ミニカラム(60 mg) 内径12〜13 mmのポリエチレン製のカラム管にジビニルベンゼン-N-ビニルピロリドン共重合体60 mgを充てんしたもの又はこれと同等の分離特性を有するものを用いる。
 ツラスロマイシン標準品 本品はツラスロマイシン97%以上を含み、融点は190〜192℃である。

4.試験溶液調製法
1)抽出
(1) 筋肉、肝臓、腎臓及びその他の食用部分の場合
 試料5.00gを量り採り、メタノール及び0.2%メタリン酸溶液(3:7)混液100 mLを加えて細砕した後、吸引ろ過する。ろ紙上の残留物にメタノール及び0.2%メタリン酸溶液(3:7)20 mLを加えてかき混ぜた後、上記と同様に操作して、ろ液を合わせ、40℃以下で約30 mLに濃縮する。

(2) 脂肪の場合
 試料5.00gを量り採り、-ヘキサン30 mL及び0.2%メタリン酸溶液70 mLを加えて細砕した後、毎分3,000回転で 5分間遠心分離する。-ヘキサン層を捨て、残りの層を吸引ろ過する。ろ紙上の残留物にメタノール及び0.2%メタリン酸溶液(3:7)混液20 mLを加えてかき混ぜた後、上記と同様に操作して、ろ液を合わせ、40℃以下で30 mLに濃縮する。

2)精製
 ジビニルベンゼン-N-ビニルピロリドン共重合体ミニカラム(60 mg)に、メタノール5mL及び水5mLを順次注入し、流出液は捨てる。このカラムに1)で得られた溶液を注入した後、水5mLを注入し、流出液は捨てる。このカラムにメタノール5mLを注入し、溶出液をすり合わせ減圧濃縮器中に採り、40℃以下でメタノールを除去する。この残留物にアセトニトリル及び0.05%トリフルオロ酢酸溶液(1:3)混液1.0 mLを加えて溶かし、これを試験溶液とする。

5.検量線の作成
 ツラスロマイシン標準品の10 mg/100 mLメタノール溶液を調製し、アセトニトリル及び0.05%トリフルオロ酢酸溶液(1:3)混液で希釈して0.5〜50 mg/Lの標準溶液を数点調製する。それぞれLC/MSに注入し、ピーク高法又はピーク面積法で検量線を作成する。

6.定量
 試験溶液をLC/MSに注入し、5の検量線でツラスロマイシンの含量を求める。

7.確認試験
 LC/MS又はLC/MS/MSにより確認する。

8.測定条件
 LC/MS
 カラム:オクタデシルシリル化シリカゲル 内径 2.0〜6.0 mm、長さ 100〜250 mm、粒子径2〜5μm
 カラム温度:40℃
 移動相:アセトニトリル及び0.05%トリフルオロ酢酸溶液(1:3)混液
 イオン化モード:ESI(+)
 主なイオン(m/z):577、807
 保持時間の目安:4〜6分

9.定量限界
 0.01 mg/kg

10.留意事項
1)試験法の概要
 ツラスロマイシンを試料からメタノール及び0.2%メタリン酸溶液の混液で抽出し、ジビニルベンゼン-N-ビニルピロリドン共重合体ミニカラムで精製した後、LC/MSで測定及び確認する方法である。

2)注意点
(1) LC/MSにおける標準溶液及び試験溶液の標準的な注入量は、内径3.0 mmのカラムにおいて10μLであるが、カラム及び装置により最適な注入量が異なる場合があるので、必要に応じて最適注入量を検討すること。
(2) LC/MSにおける測定条件は用いる装置により、最適なイオン化方法、生成するイオンが異なる場合があるので、装置ごとに最適条件を検討すること。主なモニターイオン577(m/z)は、ツラスロマイシンの代謝物からも生成する場合があるので、他のイオンでも確認すること。

11.参考文献
 なし

12.類型
 C

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