オリサストロビン試験法(農産物)

1. 分析対象化合物
 オリサストロビン
 (2)−2−(メトキシイミノ)−2−{2−[(3, 5, 6)−5−(メトキシイミノ)−4,6−ジメチル−2,8−ジオキサ−3,7−ジアザノナ−3,6−ジエン−1−イル]フェニル}−−メチルアセトアミド(以下「5異性体」という。)

2. 装置
 アルカリ熱イオン化検出器付きガスクロマトグラフ(GC-FTD)又は高感度窒素・リン検出器付きガスクロマトグラフ(GC-NPD)
 ガスクロマトグラフ・質量分析計(GC/MS)

3. 試薬、試液
 次に示すもの以外は、総則の3に示すものを用いる。
 オリサストロビン標準品 本品はオリサストロビン99%以上を含み、融点は98〜99℃である。
 5異性体標準品 本品は5異性体99%以上を含み、融点は95℃である。

4. 試験溶液の調製
1) 抽出
 試料10.0gを量り採り、水20mLを加え、2時間放置する。
 これにメタノール100mLを加え、ホモジナイズした後、吸引ろ過する。ろ紙上の残留物に、メタノール50mLを加えてホモジナイズし、上記と同様にろ過する。得られたろ液を合わせて、40℃以下で約30mLまで濃縮する。これに10%塩化ナトリウム溶液100mLを加え、-ヘキサン100mL及び50mLで2回振とう抽出する。抽出液を液相分離ろ紙でろ過した後、40℃以下で濃縮し、溶媒を除去する。この残留物に酢酸エチル及び-ヘキサン(1:1)混液5mLを加えて溶かす。

2) 精製
(1) グラファイトカーボンカラムクロマトグラフィー
 グラファイトカーボンミニカラム(500mg)に酢酸エチル及び-ヘキサン(1:1)混液10mLを注入し、流出液は捨てる。このカラムに、1)で得られた溶液を注入した後、さらに酢酸エチル及び-ヘキサン(1:1)混液10mLを注入する。全溶出液を40℃以下で濃縮し、溶媒を除去する。この残留物に-ヘキサン5mLを加えて溶かす。

(2) アミノプロピルシリル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー
 アミノプロピルシリル化シリカゲルミニカラム(360mg)に-ヘキサン10mLを注入し、流出液は捨てる。このカラムに(1)で得られた溶液を注入し、流出液は捨てる。さらに、酢酸エチル及び-ヘキサン(1:9)混液5mLを注入し、流出液は捨てる。次いで、酢酸エチル及び-ヘキサン(1:4)混液10mLを注入し、溶出液を40℃以下で濃縮し、溶媒を除去する。この残留物をアセトンに溶解し、正確に2mLとしたものを試験溶液とする。

5. 検量線の作成
 オリサストロビン及び5異性体の各標準品の0.025〜0.5mg/Lアセトン混合溶液を数点調製し、それぞれ2μLをGCに注入し、ピーク高法又はピーク面積法で検量線を作成する。

6. 定量
 試験溶液2μLをGCに注入し、5の検量線でオリサストロビン及び5異性体の含量を求め、オリサストロビン及び5異性体の和としてオリサストロビンの含量を求める。

7. 確認試験
 GC/MSにより確認する。

8. 測定条件
1) GC
検出器: FTD又はNPD
カラム: 50%フェニル−メチルシリコン、内径0.53mm、長さ15m、膜厚1μm
カラム温度: 240℃
注入口温度: 250℃
検出器温度: 280℃
キャリヤーガス: ヘリウム
保持時間の目安: オリサストロビン 約7.9分、5異性体 約8.5分

2) GC/MS
カラム: 5%フェニル−メチルシリコン 内径0.25mm、長さ30m、膜厚0.25μm
カラム温度: 100℃(1分)−10℃/分−280℃(5分)
注入口温度: 250℃
キャリヤーガス: ヘリウム
イオン化モード(電圧): EI(70eV)
主なイオン(m/z): 205、132、116(オリサストロビン及び5異性体とも共通)
注入量: 1μL
保持時間の目安: オリサストロビン 約18.5分、5異性体 約18.7分

9. 定量限界
 オリサストロビン及び5異性体の和として0.01mg/kg(それぞれ0.005mg/kg)

10. 留意事項
1) 試験法の概要
 オリサストロビン及び5異性体を試料からメタノールで抽出し、n-ヘキサンに転溶する。グラファイトカーボンミニカラム及びアミノプロピルシリル化シリカゲルミニカラムで精製した後、GC(FTD又はNPD)で測定し、GC/MSで確認する方法である。

2) 注意点
(1)  転溶溶媒(-ヘキサン)を脱水するために、液相分離ろ紙の代わりに無水硫酸ナトリウムを使用した場合は、回収率の大幅な低下を招く。
(2)  液々分配においてエマルジョンが生成する場合は、代替法として多孔性ケイソウ土カラム(20mL保持用)を利用する方法がある。操作概要を以下に示す。試料抽出液を約20mLまで濃縮し、カラムに負荷した後、酢酸エチル及びn-ヘキサン(1:4)混液100mLで溶出する。
(3)  精製が不十分な場合は、シリカゲルミニカラム(690mg)による精製を追加するとよい。操作概要を以下に示す。残留物を-ヘキサン5mLに溶解し、カラムに負荷した後、酢酸エチル及び-ヘキサン(1:9)混液5mLで洗浄し、酢酸エチル及び-ヘキサン(3:7)混液10mLで溶出する。
(4)  GC/MS測定では、オリサストロビン及び5異性体の感度が試料マトリックスの影響により大幅に高まることがあるので注意を要する。

11. 参考文献
 なし

12. 類型
 C

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