ジチアノン試験法(農産物)

1.分析対象化合物
 ジチアノン

2.装置
 紫外分光光度型検出付き高速液体クロマトグラフ(HPLC-UV)
 液体クロマトグラフ・質量分析計(LC/MS)

3.試薬、試液
 次に示すもの以外は、総則の3に示すものを用いる。
 凝固液 塩化アンモウム2gを水400 mLに溶解した後、リン酸4mLを加えたもの。
 ジチアノン標準品 本品はジチアノン99%以上を含み、融点は216℃である。

4.試験溶液の調製
1)抽出
 果実、野菜及びハーブの場合は、検体約1kgを精密に量り、4mol/L塩酸100 mLを加えて細切均一化した後、検体20.0gに相当する量を量り採る。ホップの場合は、試料5.00gに0.5 mol/L塩酸20 mLを加え、2時間放置する。
 これにアセトン100 mLを加え、30分間振とうする。吸引ろ過後、ろ紙上の残留物にアセトン50 mLを加え、上記と同様に操作する。ろ液を合わせ、アセトンを加えて200 mLとする。
 上記の溶液50 mLを採り、凝固液50 mL及びケイソウ土2gを加え、5分間放置した後、吸引ろ過する。ろ紙上の残留物をアセトン及び凝固液(1:1)混液50 mLで洗い、全ろ液を合わせる。これに5%塩化ナトリウム溶液100 mLを加え、-ヘキサン100 mLずつで2回振とう抽出する。抽出液に無水硫酸ナトリウムを加えて脱水し、無水硫酸ナトリウムをろ別した後、ろ液に酢酸0.5 mLを加え40℃以下で濃縮し、溶媒を除去する。この残留物に-ヘキサン5mLを加えて溶かす。

2)精製
 シリカゲルミニカラム(690 mg)に-ヘキサン5mLを注入し、流出液は捨てる。このカラムに1)で得られた溶液を注入し、流出液は捨てる。-ヘキサン15 mLをカラムに注入し、流出液は捨てる。さらに、アセトン及び-ヘキサン(1:49)混液10 mLをカラムに注入し、流出液は捨てる。 次いで、アセトン及び-ヘキサン(1:9)混液 10 mLを注入する。溶出液に酢酸0.5 mLを加え、40℃以下で濃縮し、溶媒を除去する。この残留物を酢酸及びメタノール(1:19)混液に溶解し、正確に2mLとしたものを試験溶液とする。

5.検量線の作成
 ジチアノン標準品をジクロロメタンに溶解し、200 mg/L溶液を調製する。これを酢酸及びメタノール(1:19)混液で希釈して、0.05〜1mg/Lの溶液を調製する。その20μLをHPLCに注入し、ピーク高法又はピーク面積法で検量線を作成する。

6.定量
 試験溶液20μLをHPLCに注入し、5の検量線でジチアノンの含量を求める。

7.確認試験
 LC/MSにより確認する。

8.測定条件
 HPLC
 検出器:UV(波長255 nm)
 カラム:オクタデシルシリル化シリカゲル(粒径5μm) 内径2〜6mm、長さ150〜300 mm
 カラム温度:40℃
 移動相:酢酸、水及びメタノール(1:35:65)混液
 保持時間の目安:7〜12分

9.定量限界
 0.02 mg/kg(ホップの場合は0.08 mg/kg)

10.留意事項
1)試験法の概要
 ジチアノンを、塩酸を加えて均一化した試料からアセトンで抽出し、凝固液処理した後、-ヘキサンに転溶する。シリカゲルミニカラムで精製した後、HPLC-UVで測定し、LC/MSで確認する方法である。

2)注意点
(1) 本法は環境省告示ジチアノン試験法の「大根の葉の場合」の方法を準用した方法である。

11.参考文献
 なし

12.類型
 A(環境省告示第60号 ジチアノン試験法 平成15年4月10日改訂)

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