アルベンダゾール、オキシベンダゾール、チアベンダゾール、フルベンダゾール及びメベンダゾール試験法(畜水産物)

1.分析対象化合物
農薬等の成分である物質分析対象化合物
アルベンダゾール 5-プロピルスルホニル-1H-ベンズイ
ミダゾール-2-アミン
オキシベンダゾール オキシベンダゾール
チアベンダゾール チアベンダゾール
5-ヒドロキシチアベンダゾール
フルベンダゾール フルベンダゾール
メベンダゾール メベンダゾール

2.装置
 紫外分光光度型検出器付き高速液体クロマトグラフ(HPLC-UV)又は多波長検出器付き高速液体クロマトグラフ(HPLC-DAD)

3.試薬、試液
 次に示すもの以外は、総則の3に示すものを用いる。
 アセトニトリル 液体クロマトグラフ用に製造したものを用いる。
 テトラヒドロフラン 液体クロマトグラフ用に製造したものを用いる。
 水 液体クロマトグラフ用に製造したものを用いる。
 メタノール 液体クロマトグラフ用に製造したものを用いる。
 炭酸塩緩衝液 0.1 mol/L炭酸水素ナトリウム溶液900 mLに0.1 mol/L炭酸ナトリウ溶液100 mLを混合する(pH9.1)。
 オキシベンダゾール標準品 本品はオキシベンダゾール98.0%以上を含み、融点は230〜231℃である。
 チアベンダゾール標準品 本品はチアベンダゾール99.0%以上を含み、融点は304〜305 ℃である。
 5-ヒドロキシチアベンダゾール標準品 本品は5-ヒドロキシチアベンダゾール98.0%以上を含み、融点は283〜286℃である。
 メベンダゾール標準品 本品はメベンダゾール98.0%以上を含み、融点は289℃である。
 フルベンダゾール標準品 本品はフルベンダゾール99.0%以上を含み、融点は260℃である。
 5-プロピルスルホニル-1H-ベンズイミダゾール-2-アミン標準品 本品は5-プロピルスルホニル-1H-ベンズイミダゾール-2-アミン99.0%以上を含み、融点は222〜224℃である。
 フルベンダゾール標準品 本品はフルベンダゾール99.9%以上を含み、融点は260 ℃である。

4.試験溶液の調製
1)抽出
 試料5.0gを量り採り、アセトニトリル20 mL及び-ヘキサン20 mLを加えてホモジナイズした後、毎分3,000回転で10分間遠心分離する。アセトニトリル層及び-ヘキサン層を分液ロートに移し、アセトニトリル層を採る。これに-プロパノール10 mLを加えて、40℃以下で濃縮し、溶媒を除去する。この残留物に炭酸塩緩衝液3mLを加えて溶かす。

2)精製
 オクタデシルシリル化シリカゲルミニカラム(500 mg)にメタノール5mL、水5mL及び炭酸緩衝液2mLを順次注入し、流出液は捨てる。このカラムに1)で得られた溶液を注入した後、水5mLを注入し、流出液は捨てる。3分間吸引乾燥した後、このカラムにメタノール2mLを注入し、溶出液を試験溶液とする。

5.検量線の作成
 オキシベンダゾール、チアベンダゾール、5-ヒドロキシチアベンダゾール、5-プロピルスルホニル-1H-ベンズイミダゾール-2アミン及びメベンダゾール各標準品について、0.05〜10 mg/Lのアセトニトリル溶液を数点調製する。
 フルベンダゾール標準品について、0.025〜10 mg/Lのアセトニトリル溶液を数点調製する。
 それぞれHPLCに注入し、ピーク高法又はピーク面積法で検量線を作成する。

6. 定量
 試験溶液をHPLCに注入し、5の検量線でオキシベンダゾール、チアベンダゾール、5-ヒドロキシチアベンダゾール、フルベンダゾール、5-プロピルスルホニル-1H-ベンズイミダゾール-2-アミン及びメベンダゾールの含量を求める。

7.確認試験
 LC/MS又はLC/MS/MSにより確認する。

8.測定条件
1)チアベンダゾール、5-ヒドロキシチアベンダゾール及び5-プロピルスルホニル-1H-ベンズイミダゾール-2-アミンの試験を行う場合
 HPLC
 検出器:UV又はDAD(波長 チアベンダゾール及び5-プロピルスルホニル-1H-ベンズイミダゾール-2-アミン295 nm、5-ヒドロキシチアベンダゾール313 nm付近の極大波長)
 カラム:オクタデシルシリル化シリカゲル 内径 2.0〜6.0 mm、長さ 100〜250 mm、粒子径2〜5μm
 カラム温度:40℃
 移動相:アセトニトリル及び0.05 mol/L酢酸アンモニウム(1:4)混液
 保持時間の目安:3〜8分

2)オキシベンダゾール、フルベンダゾール及びメベンダゾールの試験を行う場合
 HPLC
 検出器:UV又はDAD(波長 オキシベンダゾール295 nm、フルベンダゾール及びメベンダゾール313 nm付近の極大波長)
 カラム:オクタデシルシリル化シリカゲル 内径 2.0〜6.0 mm、長さ 100〜250 mm、粒子径2〜5μm
 カラム温度:40℃
 移動相:アセトニトリル及び0.05 mol/L酢酸アンモニウム(2:3)混液
 保持時間の目安:4〜7分

9.定量限界
 オキシベンダゾール 0.03 mg/kg
 チアベンダゾール 0.02 mg/kg
 5-ヒドロキシチアベンダゾール 0.02 mg/kg
 フルベンダゾール 0.01 mg/kg
 5-プロピルスルホニル-1H-ベンズイミダゾール-2-アミン 0.03 mg/kg
 メベンダゾール 0.02 mg/kg

10.留意事項
1)試験法の概要
 ベンズイミダゾール化合物を試料からアセトニトリルで抽出し、アセトニトリル/ヘキサン分配により脱脂した後、オクタデシルシリル化シリカゲルミニカラムで精製しHPLC-UV又はHPLC-DADにより測定する方法である。

11.参考文献
 竹葉、他:食品衛生学雑誌、第44巻、第5号、246〜252頁、2003年(「HPLCによる畜産食品中のベンズイミダゾール系寄生虫駆除剤の分析」)。

12.類型
 D

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