アニラジン試験法(農産物)

1.分析対象化合物
 アニラジン

2.装置
 電子捕獲型検出器付きガスクロマトグラフ(GC-ECD)
 ガスクロマトグラフ・質量分析計(GC/MS)

3.試薬、試液
 次に示すもの以外は、総則の3に示すものを用いる。
 アニラジン標準品 本品はアニラジン99%以上を含み、融点は159〜160℃である。

4.試験溶液の調製
1)抽出
(1) 種実類の場合
 試料10.0gを量り採り、10%リン酸溶液20 mLを加え、2時間放置する。
 これにアセトン100 mLを加え、ホモジナイズした後、吸引ろ過する。ろ紙上の残留物を採り、アセトン50 mLを加えてホモジナイズし、上記と同様にろ過する。得られたろ液を合わせ、40℃以下で約30 mLに濃縮する。
 これに10%塩化ナトリウム溶液100 mLを加え、-ヘキサン100 mL及び50 mLで2回振とう抽出する。抽出液に無水硫酸ナトリウムを加えて脱水し、無水硫酸ナトリウムをろ別した後、ろ液を40℃以下で濃縮し、溶媒を除去する。
 この残留物に-ヘキサン30 mLを加え、-ヘキサン飽和アセトニトリル30 mLずつで3回振とう抽出する。抽出液を40℃以下で濃縮し、溶媒を除去する。この残留物に-ヘキサン2mLを加えて溶かす。

(2) 果実、野菜及びハーブの場合
 検体約1kgを精密に量り、10〜20%リン酸溶500 mLを加え、細切均一化する。検体20.0gに相当する試料にアセトン100 mLを加え、ホモジナイズした後、吸引ろ過する。ろ紙上の残留物を採り、アセトン50 mLを加えてホモジナイズし、上記と同様にろ過する。得られたろ液を合わせ、40℃以下で約30 mLに濃縮する。
 これに10%塩化ナトリウム溶液100 mLを加え、-ヘキサン100 mL及び50 mLで2回振とう抽出する。抽出液に無水硫酸ナトリウムを加えて脱水し、無水硫酸ナトリウムをろ別した後、ろ液を40℃以下で濃縮し、溶媒を除去する。この残留物に-ヘキサン2mLを加えて溶かす。

2)精製
 クロマトグラフ管(内径15 mm)に、カラムクロマトグラフィー用合成ケイ酸マグネシウム5gを-ヘキサンに懸濁させて充てんし、無水硫酸ナトリウム約5gを積層する。このカラムに1)で得られた溶液を注入した後、流出液は捨てる。さらに、-ヘキサン100 mLを注入し、流出液は捨てる。次いで、アセトン及び-ヘキサン(1:99)混液70 mLを注入する。溶出液を40℃以下で濃縮し、溶媒を除去する。この残留物を-ヘキサンに溶解し、正確に5mL(種実類の場合は2mL)としたものを試験溶液とする。

5.検量線の作成
 アニラジン標準品の0.1〜2mg/L-ヘキサン溶液を数点調製し、それぞれ2μLをGCに注入し、ピーク高法又はピーク面積法で検量線を作成する。

6.定量
 試験溶液2μLをGCに注入し、5の検量線でアニラジンの含量を求める。

7.確認試験
 GC/MSで確認する。

8.測定条件
1)GC
 検出器:ECD
 カラム:5%フェニル−メチルシリコン、内径0.32 mm、長さ30m、膜厚0.25μm
 カラム温度:60℃(2分)−10℃/分−180℃(5分)−6℃/分−250℃(1分)−10℃/分−300℃(10分)
 注入口温度:250℃
 検出器温度:310℃
 キャリヤーガス:窒素ガス
 保持時間の目安:24分

2)GC/MS
 カラム:5%フェニル−メチルシリコン、内径 0.25 mm、長さ 30m、膜厚 0.25μm
 カラム温度:60℃(2分)−10℃/分−180℃(5分)−6℃/分−250℃(1分)−10℃/分−300℃(10分)
 注入口温度:250℃
 キャリヤーガス:ヘリウム
 イオン化モード(電圧):EI(70 eV)
 主なイオン(m/z):241、239

9.定量限界
 0.01 mg/kg

10.留意事項
1)試験法の概要
 リン酸溶液を加えて細切均一化した試料から、アニラジンをアセトンで抽出し、-ヘキサンに転溶する。次いで、果実、野菜及びハーブについてはそのまま、種実類についてはアセトニトリル/ヘキサン分配で脱脂する。合成ケイ酸マグネシウムカラムで精製した後、GC-ECDで測定し、GC/MSで確認する方法である。

2)注意点
(1) アニラジンはキャベツ、大根などの作物中で分解されやすいため、リン酸溶液を加えて速やかに細切均一化する。

11.参考文献
1)辻 正彦 他 兵庫県衛生研究所年報、32,140,1997
2)月岡 忠 他 長野県衛生公害研究所、26,23,2003

12.類型
 C

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