メトプレン試験法(農産物)


1.分析対象化合物
  メトプレン

2.装置
  紫外分光光度型検出器付き高速液体クロマトグラフ(HPLC-UV)
  液体クロマトグラフ・質量分析計(LC/MS)
  ガスクロマトグラフ・質量分析計(GC/MS)

3.試薬、試液
  次に示すもの以外は、総則の3に示すものを用いる。
  メトプレン標準品 本品はメトプレン98%以上を含む

4.試験溶液の調製
1)抽出
  穀類及び豆類の場合は、試料10.0gを量り採り、水20 mLを加え、2時間放置する。
  野菜の場合は、試料20.0gを量り採る。
  これにアセトニトリル100 mLを加え、ホモジナイズした後、吸引ろ過する。ろ紙上の残留物に、アセトニトリル50 mLを加え、ホモジナイズした後、上記と同様にろ過する。得られたろ液を合わせ、塩化ナトリウム7gを加え、振とうした後、静置し、分離した水層を捨てる。
  アセトニトリル層をアセトニトリル飽和n−ヘキサン20 mLで洗浄した後、40℃以下で濃縮し、溶媒を除去する。残留物を酢酸エチル30 mLに溶かし、無水硫酸ナトリウムを加えて脱水し、無水硫酸ナトリウムをろ別した後、ろ液を40℃以下で濃縮し、溶媒を除去する。この残留物をn−ヘキサン5mLに溶かす。

2)精製
  クロマトグラフ管(内径15 mm)に、カラムクロマトグラフィー用合成ケイ酸マグネシウム5gをエーテル及びn−ヘキサン(1:19)混液に懸濁させて充てんし、無水硫酸ナトリウム約5gを積層する。このカラムに1)で得られた溶液を注入した後、流出液は捨てる。さらに、エーテル及びn−ヘキサン(1:19)混液40 mLを注入し、流出液は捨てる。次いで、エーテル及びn−ヘキサン(3:17)混液80 mLを注入する。溶出液を40℃以下で濃縮し、溶媒を除去する。この残留物をメタノールに溶解し、正確に2mLとしたものを試験溶液とする。

5.検量線の作成
  メトプレン標準品の0.05〜1.0 mg/Lメタノール溶液を数点調製し、それぞれ20μLをHPLCに注入し、ピーク高法又はピーク面積法で検量線を作成する。

6.定量
試験溶液20μLをHPLCに注入し、5の検量線でメトプレンの含量を求める。

7.確認試験
LC/MS又はGC/MSにより確認する。

8.測定条件
1)HPLC
    検出器:UV(265 nm)
    カラム:オクタデシルシリル化シリカゲル(粒径5μm)、内径4.6 mm、長さ150 mm
    カラム温度:40℃
    移動相:水及びメタノール(1:9)混液
    移動相流速:0.8 mL/分
    保持時間の目安:7分

2)LC/MS
    カラム:オクタデシルシリル化シリカゲル(粒径5μm)、内径2mm、長さ150 mm
    カラム温度:40℃
    移動相:アセトニトリル及び水(9:1)混液
    移動相流速: 0.2 mL/分
    イオン化モード:ESI(+)
    主なイオン(m/z):311、279
    注入量:1μL
    保持時間の目安:8分

3)GC/MS
    カラム:5%フェニル−メチルシリコン、内径0.25 mm、長さ30m、膜厚0.25μm
    カラム温度:80℃(2分)−20℃/分−200℃(2分)−10℃/分−260℃(8分)
    注入口温度:250℃
    キャリヤーガス:ヘリウム
    キャリヤーガス流速:1mL/分
    イオン化モード(電圧):EI(70 eV)
    主なイオン(m/z):175、153、111
    注入量:1μL
    保持時間の目安:11分

9.定量限界
    0.01 mg/kg

10.留意事項
1)試験法の概要
    メトプレンを試料からアセトニトリルで抽出し、塩析で水層を除いた後、アセトニトリル飽和n−ヘキサンで洗浄する。合成ケイ酸マグネシウムカラムで精製した後、HPLC-UVで測定し、LC/MS又はGC/MSで確認する方法である。

2)注意点
(1) HPLCでは、メトプレンが溶出した後に、成分由来のピークが出現する。
(2) GC/MSで確認する場合は、試験溶液をn−ヘキサンに置換する。精製が不十分な場合は、試験溶液を中性アルミナミニカラムに負荷し、エーテル及びn−ヘキサン(3:17)混液20 mLで溶出する精製法を追加するとよい。

11.参考文献
    斎藤 勲ら、HPLCによる食品中メトプレンの分析法、食衛誌、47, 173(2006)

12.類型
    C

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