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セトキシジム試験法


1. 分析対象化合物
 セトキシジム、MSO [セトキシジムスルホキシド] 、MSO2 [セトキシジムスルホン] 、M2S、M2SO、M2SO2、5-OH-MSO2

2. 装置
紫外分光光度型検出器付き高速液体クロマトグラフを用いる。

3. 試薬、試液
総則の3に示すものを用いる。

4. 標準品
セトキシジム 本品はセトキシジム99%以上を含む。
(RS)2−(エトキシイミノブチル)−5−[2−(エチルスルホニル)プロピル]−3,5−ジヒドロキシシクロヘキサ−2−エノン(以下「5−OH−MSO2」という。) 本品は5−OH−MSO298%以上を含む。

5. 試験溶液の調製
a 抽出法
穀類,豆類及び種実類の場合は,検体を420μmの標準網ふるいを通るように粉砕した後,その20.0gを量り採る。
果実及び野菜の場合は,検体約1kgを精密に量り,必要に応じ適量の水を量つて加え,細切均一化した後,検体20.0gに相当する量を量り採る。
これにメタノール100mlを加え,振とう機を用いて30分間激しく振り混ぜた後,静置し,ケイソウ土を1cmの厚さに敷いたろ紙を用いて吸引ろ過する。ろ紙上の残留物に,メタノール50mlを加え,上記と同様に操作して,ろ液を500mlの三角フラスコ(I)に合わせる。これに水150mlを加えた後,水酸化カルシウム4gを加え,1分間振り混ぜた後,静置し,ケイソウ土を1cmの厚さに敷いたろ紙を用いて500mlの三角フラスコ(II)に吸引ろ過する。次いで水及びメタノールの混液(1:1)30mlを用いて三角フラスコ(I)を洗い,その洗液でろ紙上の残留物を洗う。洗液を500mlの三角フラスコ(II)に合わせる。これに1mol/l塩酸を加えてpH3〜4に調整し,過酸化水素水0.5mlを加え,50°で16時間加熱し,冷後これを500mlの分液漏斗に移す。
これに塩化ナトリウム5g及びn−ヘキサン50mlを加え,振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後,静置し,n−ヘキサン層を捨てる。水層にジクロロメタン(特級)80mlを加え,振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後,静置し,ジクロロメタン層を1,000mlの分液漏斗に移す。水層にジクロロメタン(特級)80mlを加え,上記と同様の操作を2回繰り返し,ジクロロメタン層を上記の分液漏斗に合わせる。これに塩化ナトリウム5g及び0.01mol/l水酸化ナトリウム溶液(特級)50mlを加え,振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後,静置し,ジクロロメタン層を500mlの三角フラスコに移す。水層にジクロロメタン50mlを加え,上記と同様に操作して,ジクロロメタン層を上記の三角フラスコに合わせる。これを液相分離ろ紙を用いてすり合わせ減圧濃縮器中にろ過し,40°以下で30mlに濃縮する。
b スルホン化
a 抽出法で得られた溶液にm−クロロ過安息香酸約20mgを加え,密栓し,時々振り混ぜながら30°で10分間放置する。これに5%チオ硫酸ナトリウム溶液30mlを加え,振とう機を用いて10分間激しく振り混ぜた後,静置し,ジクロロメタン層を300mlの三角フラスコに移す。水層にジクロロメタン(特級)20mlを加え,上記と同様に操作して,ジクロロメタン層を上記の三角フラスコに合わせる。これを液相分離ろ紙を用いてすり合わせ減圧濃縮器中にろ過し,40°以下でジクロロメタンを除去する。この残留物に酢酸エチル及びn−ヘキサンの混液(2:3)10mlを加えて溶かす。
c 精製法
内径15mm,長さ300mmのクロマトグラフ管に,カラムクロマトグラフィー用シリカゲル(粒径150〜425μm)10gを酢酸エチル及びn−ヘキサンの混液(2:3)に懸濁したもの,次いでその上に無水硫酸ナトリウム約5gを入れ,カラムの上端に少量の酢酸エチル及びn−ヘキサンの混液(2:3)が残る程度まで酢酸エチル及びn−ヘキサンの混液(2:3)を流出させる。このカラムにb スルホン化で得られた溶液を注入した後,酢酸エチル及びn−ヘキサンの混液(2:3)150mlを注入し,流出液は捨てる。次にアセトン及びn−ヘキサンの混液(3:7)200mlを注入し,流出液をすり合わせ減圧濃縮器中に採り,40°以下でアセトン及びn−ヘキサンを除去する。この残留物にジクロロメタン(特級)を加えて溶かし,正確に5mlとして,これを試験溶液とする。

6. 操作法
a 定性試験
次の操作条件で試験を行う。試験結果は標準品それぞれについて,5.試験溶液の調製のa 抽出法,b スルホン化及びc 精製法と同様に操作して得られたものと一致しなければならない。
操作条件
カラム充てん剤 カラムクロマトグラフィー用シリカゲルを用いる。
クロマトグラフ管 内径2〜3mm,長さ200〜500mmのステンレス管を用いる。
検出器 波長254nmで操作する。
移動相 ジクロロメタン及びメタノールの混液(49:1)を用いる。(RS)6−〔2−(エチルスルホニル)プロピル〕−4−オキソ−2−プロピル−4,5,6,7−テトラヒドロベンゾオキサゾールが約6〜8分で流出する流速に調整する。
b 定量試験
a 定性試験と同様の操作条件で得られた試験結果に基づき,セトキシジム及び5−OH−MSO2のそれぞれについてピーク高法又はピーク面積法により定量を行い,セトキシジム及び5−OH−MSO2の含量を求め,次式により,5−OH−MSO2を含むセトキシジムの含量を求める。
セトキシジム(5−OH−MSO2を含む。)の含量(ppm)=A+B×0.87
A:セトキシジムの含量(ppm)
B:5−OH−MSO2の含量(ppm)

7. 定量限界
0.01 mg/kg

8. 留意事項
 セトキシジムは、セトキシジム及び5-OH-MSO2のそれぞれについて定量を行い、5-OH-MSO2についてはその含量に係数を乗じてセトキシジムの含量に換算し、これらの和を分析値とすること。セトキシジムの分析値には、セトキシジム、MSO、MSO2、M2S、M2SO、M2SO2、5−OH−MSO2が含まれる。

9. 参考文献
なし

10. 類型
A


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