戻る

シプロジニル試験法


1. 分析対象化合物
シプロジニル

2. 装置
紫外分光光度型検出器付き高速液体クロマトグラフ及び液体クロマトグラフ・質量分析計を用いる。

3. 試薬、試液
総則の3に示すものを用いる。

4. 標準品
シプロジニル 本品はシプロジニル99%以上を含む。
融点 本品の融点は76°である。

5. 試験溶液の調製
a 抽出法
穀類、豆類及び種実類の場合は、検体を420μmの標準網ふるいを通るように粉砕した後、その10.0gを量り採り、水20mlを加え、2時間放置する。
果実及び野菜の場合は、検体約1kgを精密に量り、必要に応じ適量の水を量つて加え、細切均一化した後、検体20.0gに相当する量を量り採る。
これにアセトン100mlを加え、3分間細砕した後、ケイソウ土を1cmの厚さに敷いたろ紙を用いてすり合わせ減圧濃縮器中に吸引ろ過する。ろ紙上の残留物を採り、アセトン50mlを加え、3分間細砕した後、上記と同様に操作して、ろ液をその減圧濃縮器中に合わせ、40°以下で約30mlに濃縮する。
これをあらかじめ10%塩化ナトリウム溶液100mlを入れた300mlの分液漏斗に移す。n−ヘキサン100mlを用いて上記の減圧濃縮器のナス型フラスコを洗い、洗液を上記の分液漏斗に合わせる。振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後、静置し、n−ヘキサン層を300mlの三角フラスコに移す。水層にn−ヘキサン50mlを加え、上記と同様に操作して、n−ヘキサン層を上記の三角フラスコに合わせる。これに適量の無水硫酸ナトリウムを加え、時々振り混ぜながら15分間放置した後、すり合わせ減圧濃縮器中にろ過する。次いでn−ヘキサン20mlを用いて三角フラスコを洗い、その洗液でろ紙上の残留物を洗う操作を2回繰り返す。両洗液をその減圧濃縮器中に合わせ、40°以下でn−ヘキサンを除去する。この残留物にn−ヘキサン5mlを加えて溶かす。
b 精製法
(1) シリカゲルカラムクロマトグラフィー
内径15mm、長さ300mmのクロマトグラフ管に、カラムクロマトグラフィー用シリカゲル(粒径63〜200μm)5gをn−ヘキサンに懸濁したもの、次いでその上に無水硫酸ナトリウム約5gを入れ、カラムの上端に少量のn−ヘキサンが残る程度までn−ヘキサンを流出させる。このカラムにa 抽出法で得られた溶液を注入した後、n−ヘキサン50mlを注入し、流出液は捨てる。次いでアセトン及びn−ヘキサンの混液(1:9)50mlを注入し、流出液をすり合わせ減圧濃縮器中に採り、40°以下でアセトン及びn−ヘキサンを除去する。この残留物にメタノール3mlを加えて溶かし、これに水3mlを加える。
(2) プロピルスルホニルシリル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー
プロピルスルホニルシリル化シリカゲルミニカラム(1,000mg)にメタノール5mlを注入し、流出液は捨てる。次いで0.1mol/l塩酸溶液5mlを注入し、流出液は捨てる。このカラムに(1) シリスゲルカラムクロマトグラフィーで得られた溶液を注入した後、水及びメタノールの混液(1:1)10mlを注入し、流出液は捨てる。次いでアンモニア水及びメタノールの混液(1:19)10mlを注入し、流出液をすり合わせ減圧濃縮器中に採り、40°以下でアンモニア水及びメタノールを除去する。この残留物にメタノールを加えて溶かし、正確に10ml(穀類、豆類及び種実類の場合は、5ml)として、これを試験溶液とする。

6. 操作法
a 定性試験
次の操作条件で試験を行う。試験結果は標準品と一致しなければならない。
操作条件
カラム充てん剤 オクタデシルシリル化シリカゲル(粒径5μm)を用いる。
クロマトグラフ管 内径4.6mm、長さ150mmのステンレス管を用いる。
カラム温度 40°
検出器 波長270nmで操作する。
移動相 水及びメタノールの混液(3:7)を用いる。シプロジニルが10〜15分で流出する流速に調整する。
b 定量試験
a 定性試験と同様の操作条件で得られた試験結果に基づき、ピーク高法又はピーク面積法により定量を行う。
c 確認試験
a 定性試験と同様の操作条件で液体クロマトグラフィー・質量分析を行う。試験結果は標準品と一致しなければならない。また、必要に応じ、ピーク高法又はピーク面積法により定量を行う。

7. 定量限界
0.003 mg/kg(果実にあっては0.002 mg/kg)

8. 留意事項
なし

9. 参考文献
なし

10. 類型
A


トップへ
戻る