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イマザリル試験法


1. 分析対象化合物
イマザリル

2. 装置
紫外分光光度型検出器付き高速液体クロマトグラフを用いる。

3. 試薬、試液
総則の3に示すものを用いる。

4. 標準品
イマザリル 本品はイマザリル97.5%以上を含む。
融点 本品の融点は49〜54°である。

5. 試験溶液の調製
a 穀類及び種実類の場合
検体を420μmの標準網ふるいを通るように粉砕した後,その20.0gを量り採る。
これにアセトン100mlを加え,振とう機を用いて30分間激しく振り混ぜた後,静置し,ケイソウ土を1cmの厚さに敷いたろ紙を用いてすり合わせ減圧濃縮器中に吸引ろ過する。ろ紙上の残留物を採り,アセトン50mlを加え,振とう機を用いて30分間激しく振り混ぜた後,上記と同様に操作して,ろ液をその減圧濃縮器中に合わせ,40°以下で約50mlに濃縮する。
これをあらかじめ酢酸エチル100ml及び飽和塩化ナトリウム溶液100mlを入れた500mlの分液漏斗に移し,振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後,静置し,酢酸エチル層を300mlの三角フラスコに移す。水層に酢酸エチル100mlを加え,上記と同様に操作して,酢酸エチル層を上記の三角フラスコに合わせる。これに適量の無水硫酸ナトリウムを加え,時々振り混ぜながら15分放置した後,すり合わせ減圧濃縮器中にろ過する。次いで酢酸エチル20mlを用いて三角フラスコを洗い,その洗液でろ紙上の残留物を洗う操作を2回繰り返す。両洗液をその減圧濃縮器中に合わせ,40°以下で酢酸エチルを除去する。
この残留物にn−ヘキサン30mlを加え,100mlの分液漏斗に移す。これにn−ヘキサン飽和アセトニトリル30mlを加え,振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後,静置し,アセトニトリル層を200mlの分液漏斗に移す。n−ヘキサン層にn−ヘキサン飽和アセトニトリル30mlを加え,上記と同様に操作して,アセトニトリル層を上記の分液漏斗に合わせる。これにn−ヘキサン50mlを加え,振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後,静置し,アセトニトリル層をすり合わせ減圧濃縮器中に移し,40°以下でアセトニトリルを除去する。この残留物にアセトニトリルを加えて溶かし,正確に1mlとして,これを試験溶液とする。
b 果実及び野菜の場合
検体約1kgを精密に量り,必要に応じ適量の水を量つて加え,細切均一化した後,検体20.0gに相当する量を量り採る。
これにアセトン100ml及び5mol/l水酸化ナトリウム溶液5mlを加え,3分間細砕した後,ケイソウ土を1cmの厚さに敷いたろ紙を用いてすり合わせ減圧濃縮器中に吸引ろ過する。ろ紙上の残留物を採り,アセトン100mlを加え,上記と同様に操作して,ろ液をその減圧濃縮器中に合わせ,40°以下で約50mlに濃縮する。
これをあらかじめ酢酸エチル100ml及び飽和塩化ナトリウム溶液100mlを入れた500mlの分液漏斗(I)に移し,5mol/l水酸化ナトリウム溶液を用いてpH11〜12に調整する。これを振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後,静置し,酢酸エチル層を500mlの分液漏斗(II)に移す。水層に酢酸エチル100mlを加え,上記と同様に操作して,酢酸エチル層を分液漏斗(II)に合わせる。
これに0.25mol/l硫酸50mlを加え,振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後,静置し,水層を300mlの分液漏斗に移す。酢酸エチル層に0.25mol/l硫酸50mlを加え,上記と同様に操作して,水層を上記の分液漏斗に合わせる。酢酸エチル50ml及び5mol/l水酸化ナトリウム溶液10mlを加え,振とう機を用いて30分間激しく振り混ぜた後,静置し,酢酸エチル層を300mlの分液漏斗に移す。水層に酢酸エチル50mlを加え,上記と同様に操作して,酢酸エチル層を上記の分液漏斗に合わせる。
これに飽和塩化ナトリウム溶液100mlを加え,激しく振り混ぜた後,静置し,酢酸エチル層を300mlの三角フラスコに移す。これに適量の無水硫酸ナトリウムを加え,時々振り混ぜながら15分放置した後,すり合わせ減圧濃縮器中にろ過する。次いで酢酸エチル20mlを用いて三角フラスコを洗い,その洗液でろ紙上の残留物を洗う操作を2回繰り返す。両洗液をその減圧濃縮器中に合わせ,40°以下で酢酸エチルを除去する。この残留物にアセトニトリルを加えて溶かし,正確に5mlとして,これを試験溶液とする。

6. 操作法
a 定性試験
次の操作条件で試験を行う。試験結果は標準品と一致しなければならない。
操作条件
カラム充てん剤 オクタデシルシリル化シリカゲル(粒径5μm)を用いる。
クロマトグラフ管 内径4.6mm,長さ250mmのステンレス管を用いる。
検出器 波長230nmで操作する。
移動相 アセトニトリル及び0.01mol/lリン酸一カリウムの混液(7:3)を用いる。イマザリルが約9分30秒で流出する流速に調整する。
b 定量試験
a 定性試験と同様の操作条件で得られた試験結果に基づき,ピーク高法又はピーク面積法により定量を行う。

7. 定量限界
0.01 mg/kg

8. 留意事項
なし

9. 参考文献
なし

10. 類型
A


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