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イプロジオン試験法


1. 分析対象化合物
 イプロジオン、N−(3,5−ジクロロフェニル)−3−イソプロピル−2,4−ジオキソイミダゾリジン−1−カルボキサミド

2. 装置
紫外分光光度型検出器付き高速液体クロマトグラフを用いる。

3. 試薬、試液
総則の3に示すものを用いる。

4. 標準品
イプロジオン 本品はイプロジオン99%以上を含む。
融点 本品の融点は135°である。
N−(3,5−ジクロロフェニル)−3−イソプロピル−2,4−ジオキソイミダゾリジン−1−カルボキサミド 本品はN−(3,5−ジクロロフェニル)−3−イソプロピル−2,4−ジオキソイミダゾリジン−1−カルボキサミド99%以上を含む。
融点 本品の融点は200°である。

5. 試験溶液の調製
a 抽出法
(1) 穀類,豆類及び種実類
検体を420μmの標準網ふるいを通るように粉砕した後,その20.0gを量り採る。
これにアセトニトリル100mlを加え,1時間放置した後,3分間細砕し,ケイソウ土を1cmの厚さに敷いたろ紙を用いて吸引ろ過し,ろ液を500mlの分液漏斗(I)に移す。次いでろ紙上の残留物を採り,アセトニトリル100mlを加え,3分間細砕し,ケイソウ土を1cmの厚さに敷いたろ紙を用いて吸引ろ過し,ろ液を分液漏斗(I)に合わせる。これにアセトニトリル飽和n−ヘキサン50mlを加え,振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後,静置し,アセトニトリル層をすり合わせ減圧濃縮器中に移し,40°以下で約30mlに濃縮する。
これをあらかじめ10%塩化ナトリウム溶液100ml及び酢酸エチル100mlを入れた500mlの分液漏斗(II)に移し,振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後,静置し,酢酸エチル層を500mlの分液漏斗(III)に移す。水層に酢酸エチル100mlを加え,上記と同様に操作して,酢酸エチル層を分液漏斗(III)に合わせる。これに10%塩化ナトリウム溶液50mlを加え,振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後,静置し,酢酸エチル層を500mlの三角フラスコに移す。
これに適量の無水硫酸ナトリウムを加え,時々振り混ぜながら15分間放置した後,すり合わせ減圧濃縮器中にろ過する。次いで酢酸エチル50mlを用いて上記の三角フラスコを洗い,その洗液でろ紙上の残留物を洗う操作を2回繰り返す。両洗液をその減圧濃縮器中に合わせ,40°以下で酢酸エチルを除去する。この残留物にn−ヘキサン5mlを加えて溶かす。
(2) 果実,野菜及び抹茶の場合
果実及び野菜の場合は,検体約1kgを精密に量り,必要に応じ適量の水を量つて加え,細切均一化した後,検体20.0gに相当する量を量り採る。
抹茶の場合は,検体10.0gを量り採る。
これにアセトン100mlを加え,3分間細砕した後,ケイソウ土を1cmの厚さに敷いたろ紙を用いてすり合わせ減圧濃縮器中に吸引ろ過する。ろ紙上の残留物を採り,アセトン100mlを加え,3分間細砕した後,上記と同様に操作して,ろ液をその減圧濃縮器中に合わせ,40°以下で約50mlに濃縮する。
これに5mol/l水酸化ナトリウム溶液を加えてpH6〜7に調整し,あらかじめ10%塩化ナトリウム溶液100ml及び酢酸エチル100mlを入れた500mlの分液漏斗(I)に移す。振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後,静置し,酢酸エチル層を500mlの分液漏斗(II)に移す。水層に酢酸エチル100mlを加え,上記と同様に操作して,酢酸エチル層を分液漏斗(II)に合わせる。
これに10%塩化ナトリウム溶液50mlを加え,振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後,静置し,酢酸エチル層を500mlの三角フラスコに移す。これに適量の無水硫酸ナトリウムを加え,時々振り混ぜながら15分間放置した後,すり合わせ減圧濃縮器中にろ過する。次いで酢酸エチル50mlを用いて三角フラスコを洗い,その洗液でろ紙上の残留物を洗う操作を2回繰り返す。両洗液をその減圧濃縮器中に合わせ,40°以下で酢酸エチルを除去する。この残留物にn−ヘキサン5mlを加えて溶かす。
(3) 抹茶以外の茶の場合
検体10.0gを100°の水600mlに浸し,室温で5分間放置した後,ろ過し,冷後ろ液300mlを500mlの三角フラスコ(I)に移す。これにアセトン100ml及び飽和酢酸鉛溶液2mlを加え,15分間緩やかに振り混ぜた後,ケイソウ土を1cmの厚さに敷いたろ紙を用いて吸引ろ過し,ろ液を1,000mlの分液漏斗に移す。次いでアセトン及び水の混液(1:1)50mlを用いて三角フラスコ(I)を洗い,その洗液でろ紙上の残留物を洗う。洗液を上記の分液漏斗に合わせる。
これに塩化ナトリウム20g及びn−ヘキサン100mlを加え,振とう機を用いて5分間激しく振り混ぜた後,静置し,n−ヘキサン層を500mlの分液漏斗に移す。水層にn−ヘキサン100mlを加え,上記と同様に操作して,n−ヘキサン層を上記の分液漏斗に合わせる。
これに10%塩化ナトリウム溶液50mlを加え,振とう機を用いて5分間振り混ぜた後,静置し,n−ヘキサン層を500mlの三角フラスコ(II)に移す。これに適量の無水硫酸ナトリウムを加え,時々振り混ぜながら15分間放置した後,すり合わせ減圧濃縮器中にろ過する。次いでn−ヘキサン50mlを用いて三角フラスコ(II)を洗い,その洗液でろ紙上の残留物を洗う操作を2回繰り返す。両洗液をその減圧濃縮器中に合わせ,40°以下でn−ヘキサンを除去する。この残留物にn−ヘキサン5mlを加えて溶かす。
b 精製法
内径20mm,長さ300mmのクロマトグラフ管に,カラムクロマトグラフィー用合成ケイ酸マグネシウム10gをn−ヘキサンに懸濁したもの,次いでその上に無水硫酸ナトリウム約8gを入れ,カラムの上端に少量のn−ヘキサンが残る程度までn−ヘキサンを流出させる。このカラムにa 抽出法で得られた溶液を注入した後,エーテル及びn−ヘキサンの混液(1:1)100mlを注入し,流出液は捨てる。次いでアセトン及びn−ヘキサンの混液(3:17)100mlを注入し,流出液をすり合わせ減圧濃縮器中に採り,40°以下でアセトン及びn−ヘキサンを除去する。この残留物にアセトニトリルを加えて溶かし,正確に5mlとして,これを試験溶液とする。

6. 操作法
a 定性試験
次の操作条件で試験を行う。試験結果は標準品と一致しなければならない。
操作条件
カラム充てん剤 オクタデシルシリル化シリカゲル(粒径5μm)を用いる。
クロマトグラフ管 内径4.5mm,長さ150mmのステンレス管を用いる。
カラム温度 25°
検出器 波長230nmで操作する。
移動相 アセトニトリル及び水の混液(3:2)を用いる。イプロジオンが約9分で流出する流速に調整する。
b 定量試験
a 定性試験と同様の操作条件で得られた試験結果に基づき,イプロジオン及びN−(3,5−ジクロロフェニル)−3−イソプロピル−2,4−ジオキソイミダゾリジン−1−カルボキサミドのそれぞれについてピーク高法又はピーク面積法により定量を行い,イプロジオン及びN−(3,5−ジクロロフェニル)−3−イソプロピル−2,4−ジオキソイミダゾリジン−1−カルボキサミドの和としてイプロジオンの含量を求める。

7. 定量限界
0.05 mg/kg

8. 留意事項
 イプロジオンは、イプロジオン及びその代謝物であるN−(3,5−ジクロロフェニル)−3−イソプロピル−2,4−ジオキソイミダゾリジン−1−カルボキサミドのそれぞれについて定量を行い、これらの和を分析値とすること。

9. 参考文献
なし

10. 類型
A


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