GC/MSによる農薬等の一斉試験法（農産物）

１．分析対象化合物
別表 参照

２．装置
　ガスクロマトグラフ・質量分析計（GC/MS）

３．試薬、試液
　次に示すもの以外は、総則の３に示すものを用いる。

0.5mol/Lリン酸緩衝液（pＨ7.0）　リン酸水素二カリウム（K₂HPO₄ ）52.7ｇ及びリン酸二水素カリウム（KH₂PO₄ ）30.2ｇを量り採り、水約500 mLに溶解し、１mol/L水酸化ナトリウム又は１mol/L塩酸を用いてpＨを7.0に調整した後、水を加えて１Lとする。

　各農薬等標準品　各農薬等の純度が明らかなもの。

 

４．試験溶液調製法
１）抽出
(1)穀類、豆類及び種実類の場合
　試料10.0ｇに水20 mLを加え、15分間放置する。
　これにアセトニトリル50 mLを加え、ホモジナイズした後、吸引ろ過する。ろ紙上の残留物にアセトニトリル20 mLを加え、ホモジナイズした後、吸引ろ過する。得られたろ液を合わせ、アセトニトリルを加えて正確に100 mLとする。
　抽出液20 mLを採り、塩化ナトリウム10ｇ及び0.5 mol/Lリン酸緩衝液（pＨ7.0）20 mLを加え、10分間振とうする。静置した後、分離した水層を捨てる。
　オクタデシルシリル化シリカゲルミニカラム（1,000 mg）にアセトニトリル10 mLを注入し、流出液は捨てる。このカラムに上記のアセトニトリル層を注入し、さらに、アセトニトリル２mLを注入して、全溶出液を採り、無水硫酸ナトリウムを加えて脱水し、無水硫酸ナトリウムをろ別した後、ろ液を40℃以下で濃縮し、溶媒を除去する。残留物にアセトニトリル及びトルエン（３：１）混液２mLを加えて溶かす。

(2)果実、野菜、ハーブ、茶及びホップの場合
　果実、野菜及びハーブの場合は、試料20.0ｇを量り採る。茶及びホップの場合は、試料5.00ｇに水20 mLを加え、15分間放置する。
　これにアセトニトリル50 mLを加え、ホモジナイズした後、吸引ろ過する。ろ紙上の残留物にアセトニトリル20 mL加え、ホモジナイズした後、吸引ろ過する。得られたろ液を合わせ、アセトニトリルを加えて正確に100 mLとする。
　抽出液20 mLを採り、塩化ナトリウム10ｇ及び0.5 mol/Lリン酸緩衝液（pＨ7.0）20 mLを加え、振とうする。静置した後、分離した水層を捨てる。アセトニトリル層に無水硫酸ナトリウムを加えて脱水し、無水硫酸ナトリウムをろ別した後、ろ液を40℃以下で濃縮し、溶媒を除去する。残留物にアセトニトリル及びトルエン（３：１）混液２mLを加えて溶かす。

２）精製
　グラファイトカーボン/アミノプロピルシリル化シリカゲル積層ミニカラム（500 mg/500 mg）に、アセトニトリル及びトルエン（３：１）混液10 mLを注入し、流出液は捨てる。このカラムに１）で得られた溶液を注入した後、アセトニトリル及びトルエン（３：１）混液20 mLを注入し、全溶出液を40℃以下で１mL以下に濃縮する。これにアセトン10 mLを加えて40℃以下で１mL以下に濃縮し、再度アセトン５mLを加えて濃縮し、溶媒を除去する。残留物をアセトン及び n - ヘキサン（１：１）混液に溶かして、正確に１mLとしたものを試験溶液とする。

５．検量線の作成
　各農薬等の標準品について、それぞれのアセトン溶液を調製し、それらを混合した後、適切な濃度範囲の各農薬等を含むアセトン及び n - ヘキサン（１：１）混液溶液を数点調製する。それぞれ２μLをGC/MSに注入し、ピーク高法又はピーク面積法で検量線を作成する。

６．定量
　試験溶液２μLをGC/MSに注入し、５の検量線で各農薬等の含量を求める。

７．確認試験
GC/MSにより確認する。

８．測定条件
GC/MS

  カラム：５％フェニル-メチルシリコン　内径 0.25 mm、長さ 30ｍ、膜厚 0.25μm

カラム温度：50℃（１分）－25℃/分－125℃（０分）－10℃/分－300℃（10分）

 

　注入口温度：250℃
　キャリヤーガス：ヘリウム
　イオン化モード（電圧）：EI（70 eV）
　主なイオン（ m/z ）： 別表 参照
　保持時間の目安： 別表 参照

９．定量限界
別表 参照
　ただし、別表は測定限界（ng）の例を示したものである。

10．留意事項
１）試験法の概要
　各農薬等を試料からアセトニトリルで抽出し、塩析で水を除いた後、果実、野菜等についてはそのまま、穀類、豆類及び種実類についてはオクタデシルシリル化シリカゲルミニカラムで精製後、いずれもグラファイトカーボン/アミノプロピルシリル化シリカゲル積層ミニカラムで精製し、GC/MSで測定及び確認する方法である。

２）注意点

(1) 別表は本法を適用できる化合物を五十音順に示したものであるが、規制対象となる品目には本法を適用できない代謝物等の化合物が含まれる場合があるので留意すること。また、保持時間の異なる異性体は、化合物名欄に個別に示した。また、分析中に生成する分解物を測定している場合は、「分解物」と表記した。

(2) 本試験法は別表に示した全ての化合物の同時分析を保証したものではない。化合物同士の相互作用による分解等及び測定への干渉等のおそれがあるため、分析対象とする化合物の組み合わせにおいてあらかじめこれらの点を検証する必要がある。

(3) 装置にはガスクロマトグラフ・タンデム型質量分析計（GC/MS/MS）の使用も可能である。

(4) リン酸緩衝液の調製には、ナトリウム塩を使用してもよい。

(5) アセトニトリル抽出液に添加する塩化ナトリウム（10ｇ）が多すぎる場合は、減らしてもよいが、十分に飽和する量を加える。

(6) 濃縮し、溶媒を完全に除去する操作は、窒素気流を用いて穏やかに行う。

(7) 正確な測定値を得るためには、マトリックス添加標準溶液又は標準添加法を用いることが必要な場合がある。

(8) 定量限界は、使用する装置、試験溶液の濃縮倍率及び試験溶液注入量により異なるので、必要に応じて最適条件を検討する。

(9) 抹茶以外の茶について、次の表の第１欄に掲げる農薬を試験する場合は、同表第２欄に掲げる個別試験法により分析すること。

第１欄	第２欄
BHC	BHC 等試験法
DDT	BHC 等試験法
XMC	アルジカルブ等試験法
アクリナトリン	アクリナトリン等試験法
アセタミプリド	アセタミプリド試験法
アルドリン及びディルドリン	BHC 等試験法
イソキサチオン	EPN 等試験法（注）
イミベンコナゾール	イミベンコナゾール試験法
エチオン	EPN 等試験法
エトフェンプロックス	エトフェンプロックス試験法
エンドリン	BHC 等試験法
クロルピリホス	EPN 等試験法
クロルフェナピル	クロルフェナピル等試験法
ジコホール	BHC 等試験法
シハロトリン	アクリナトリン等試験法
ジフェノコナゾール	カフェンストロール等試験法
シフルトリン	アクリナトリン等試験法
シペルメトリン	アクリナトリン等試験法
ジメトエート	EPN 等試験法
ダイアジノン	EPN 等試験法
テトラコナゾール	カフェンストロール等試験法
テトラジホン	BHC 等試験法
テブフェンピラド	アラクロール等試験法
デルタメトリン及びトラロメトリン	アクリナトリン等試験法
トリフルラリン	BHC 等試験法
パラチオン	EPN 等試験法
パラチオンメチル	EPN 等試験法
ハルフェンプロックス	BHC 等試験法
ビフェントリン	アクリナトリン等試験法
ピラクロホス	EPN 等試験法
ピリダベン	ピリダベン試験法
ピリフェノックス	ピリフェノックス試験法
ピリミホスメチル	EPN 等試験法
ピレトリン	アクリナトリン等試験法
フェニトロチオン	EPN 等試験法
フェントエート	EPN 等試験法
フェンバレレート	アクリナトリン等試験法
フェンプロパトリン	BHC 等試験法
フルシトリネート	アクリナトリン等試験法
フルバリネート	アクリナトリン等試験法
プロチオホス	EPN 等試験法
プロピコナゾール	カフェンストロール等試験法
プロフェノホス	EPN 等試験法
ペルメトリン	アクリナトリン等試験法
ホサロン	EPN 等試験法
ミクロブタニル	ミクロブタニル試験法
メチダチオン	EPN 等試験法

（注）イソキサチオンについてはEPN等試験法の分析対象化合物には含まれないが、抹茶以外の茶については、当該試験法中ａ法により分析すること。

11 ．参考文献
１）Fillion, J.ら，J.AOAC Int，83，698～713（2000）

12．類型
　Ｃ