文献番号：305
タイトル：Control of Listeria monocytogenes in raw-milk cheeses
邦訳タイトル：未殺菌乳チーズ中のL.monocytogenesの制御
著者：Millet L, Saubusse M, Didienne R, Tessier L, Montel M C
誌名､発行年、巻号頁：International Journal of Food Microbiology (2006), 108, 105-114

※このＣＤ-ＲＯＭでは、べき乗を右記の例のように表します。（例）10の9乗 → 10E9

<ITEM1> \n調査の目的\n　
　
未殺菌乳を用いて製造したサンネクタールチーズ中での L.monocytogenesの増殖の様相を調べる。
　
<ITEM2> \n検体名\n　
　
L.monocytogenesを接種した非殺菌乳から製造したサンネクタールチーズ、及び非接種乳からのチーズに熟成１日後に L.monocytogenesを表面接種したチーズ。
　
<ITEM3> \nサンプルサイズ\n及び採集方法\n　
　
-
 
　
<ITEM4> \n検査項目\n　
　
L.monocytogenes、好熱性菌、ヘテロ発酵性乳酸桿菌、デキストラン産生ロイコノストック、腸球菌、酵母、腸内細菌科の菌培地、コ陽ブ菌、シュードモナス、ラクトコッカス、乳酸、酢酸、ガラクトース、ラクトース、体細胞数、脂肪、たん白質、pH
　
<ITEM5> \n検査法\n(増殖の有無､培地､培地の温度)\n　
　
使用 L.monocytogenes株
・2株の L.monocytogenesを使用。 S1株はrep-グループ(15a)に属しリボタイプはDUP1038。S2株はrep-グループ(5a)に属しリボタイプはDUP1039。　脱脂乳で37℃24時間培養後、乳に接種するまで-80℃の10%グリセリン入り脱脂乳で保存。
 
チーズの製造
・使用した乳は6つの酪農場(F1、F2、F3、F4、F5、F6)から入手。搾乳後、各工場で用いているスターターが接種された後に実験室に搬入。各乳サンプル（F1、F2、F3、F4、F5、F6）から図1に示すように8つのサンネクタールチーズを製造。その内4つのチーズは L.monocytogenesを5-10cfu/mlになるよう接種した乳から、残りの4つは接種しない乳から製造。熟成1日後に、L.monocytogenesを接種していない乳で造った4つのチーズの表面に、同じ L.monocytogenes株を5-10cfu/25ｃ㎡になるよう表面接種。チーズは10℃、湿度95%の条件で28日間熟成。
 
微生物分析
・チーズサンプルは熟成1、8、18、28日に採取。100ｇチーズを25mlのpH7.5リン酸緩衝液と混合し、ストマッカーで2分間ブレンド。この懸濁液を全ての微生物分析に使用。
L.monocytogenes菌数はISO112090規定に従って測定。好熱性菌はM17寒天、ヘテロ発酵性乳酸桿菌はFH寒天培地、デキストラン産生ロイコノストックは10%サッカロース加MSE寒天、腸球菌はSB培地、酵母はOGA培地、腸内細菌科の菌はVRBG培地、コ陽ブ菌はウサギ血清加BP寒天、シュードモナスはCFC寒天、ラクトコッカスはnalidixic酸100ppm加Turner培地をそれぞれ使用して測定。
 
化学分析
・体細胞数はIDF基準148Aに従って蛍光光学カウンターで測定。乳脂とたん白質含量は赤外線法、乾物含量は文献NFV046282に従って測定。D-及びL-乳酸、酢酸、ガラクトース、乳糖含量は分光光学法で測定。結果はmg/g湿重で表示。
 
データ解析
・各測定変数に対し2つの因子の効果を比較するため標準分散分析を実施。第1因子は乳サンプルの起源（6水準：F1～F6)、第2因子は接種した菌株（2水準：S1とS2株)。繰り返し3回。差が有意なときにはNewman Keulsテストを実施。 また、要因間の増殖曲線の違いを分析するために、特定の微生物データには混合モデルも用いた。結果は分散分析として示した。
 
以下のモデルが用いられた。　Y=FarmMilk+Time+Time2+FarmMilk:Time+FarmMilk:Time2+ε　  Yは予想されるべき変数。FarmMilkは乳の起源を区別するために用いられた要因の効果をあらわす。TimeとTime2はf degree 2の多項式であらわした曲線の形の全体的評価に関連する。FarmMilk:TimeとFarmMilk:Time2は増殖曲線の形に対する乳の起源の効果に相当する。8日目に得た L.monocytogenes数、酸、糖含量についてのデータを用いて主成分分析を実施した。
　
<ITEM6> \n結果\n(汚染実態、汚染菌の性状、防除対策等)\n　
　
・L.monocytogenesは3つの酪農場(F4、F5、F6)起源の乳で造ったチーズの芯部では増殖しなかった。
 
・その増殖阻害は部分的にはpH値とL-乳酸含量のためである可能性があった。pH5.2以下で乳酸含量が14mg/g付近のチーズでは増殖は見られなかった。
 
・全てのチーズにおいて L.monocytogenesは熟成8日後にチーズ芯部での増殖を停止した。何か他の要因が増殖阻害関係するのかも知れない。
 
・L.monocytogenes菌数と他の微生物の菌数との間に関連は見られなかった。
 
・チーズ表面においてはpHが有意に上がった熟成8日-18日の間に増殖が起こった。
 
・最も低いpHのチーズの表面ではL.monocytogenesの増殖は最も低く、芯部では増殖は一切見られなかった。
　
<ITEM7> \nPubMed\n
　
International Journal of Food Microbiology, 108, 105
 
<PUBMED>

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=search&term=International+Journal+of+Food+Microbiology,+108,+105

