文献番号：142
タイトル：Inhibition of Listeria monocytogenes and other bacteria in Spanish soft cheese made with Lactococcus lactis subsp. diacetylactis.
邦訳タイトル：L.lactis subsp. diacetylactisを用いて造ったスペイン・ソフトチーズ中における L.monocytogenes及び他の菌に対する阻害効果
著者：Mendoza Yepes M J,  Abellan Lopez O,  Carrion Ortega J,  Marin Iniesta F
誌名､発行年、巻号頁：Journal of Food Safety (1999), 19, 161-170

※このＣＤ-ＲＯＭでは、べき乗を右記の例のように表します。（例）10の9乗 → 10E9

<ITEM1> \n調査の目的\n　
　
乳糖非資化性の単一株スターター（Lactococcus lactis subsp. diacetylactis ：商品名Fargo 763)が、スペイン・ソフトチーズ(Queso fesco）中の L.monocytogenesを始めとする数種の有害菌に及ぼす阻害効果を評価する。
　
<ITEM2> \n検体名\n　
　
Queso Fresco チーズ
　
<ITEM3> \nサンプルサイズ\n及び採集方法\n　
　
-
 
　
<ITEM4> \n検査項目\n　
　
菌数、pH、バクテリオシン
　
<ITEM5> \n検査法\n(増殖の有無､培地､培地の温度)\n　
　
スターターカルチャー：Lactococcus lactis subsp. diacetylactis ：商品名Fargo 763を使用。チーズ製造に使用前に、1LのUHT滅菌全乳で30℃20-24時間、約E+7cfu/ml(pH6.6)まで培養した。
 
接種菌：L.monocytogenes　3株（Sctt A, LM82, NCTC 11994)、P.aeruginosa、　P.fluorescens、　E.coli O157:H7、　E.cloacae。　カルチャーはTSAスラントで5℃で保存。実験用接種菌液はTB培地で35℃24時間増殖させて調製。但しP.fluorescensのみは30℃で培養。段階希釈は1/4リンゲル液で行った。
 
Queso Fresco チーズの調製：牛と山羊の殺菌乳を25Lバットで35℃に温める。これに滅菌乳で培養したスターターカルチャー（Fargo 763)を10%添加する。次にCaCl2(0.03%)とレンネットを加え、35℃で45-50分保持してカードを生成させる。カードを4cm立方にカッティングし、次いでカードを円筒モールドに入れ加圧なしでドレンを排除。4℃で保存する。
 
菌の接種：5gの上記チーズ試料を滅菌プラスティック袋に入れ、0.1ｍｌの希釈した試験菌培養物(E+5cfu/ml)を加えて封入後、外側から手で3分間マッサージし、接種菌液を分布させ、7℃と3℃で保存する。
 
サンプリング：時間「0」及び所定の間隔で20-25日にわたって、チーズ試料を45mlの1/4リンゲル液中でストマッカーで均質化する。段階希釈後、0.05mlをスパイラルプレーターを用いて表面塗沫する（2連）。プレートは35℃で24時間培養する。但し、P.fluorescens　は30℃48時間、E.coli　は42℃24時間。コロニーをコロニーカウンターで計数する。
接種しない対照サンプルは、接種サンプルと同じ条件で培養した。
全ての微生物測定は2連で行い、結果は平均値で示した。
 
統計解析：データはGomperts式を用いて解析し、そのパラメーターを指数増殖速度と遅滞期の計算に用いた。有意差の検定にはDuncanテストを用いた。
　
<ITEM6> \n結果\n(汚染実態、汚染菌の性状、防除対策等)\n　
　
L.monocytogenes：スターター無しのチーズ中では、7℃3日後に増殖し10日後にはE+7cfu/gに達した。3℃では10日後に7℃よりかなり低い速度で増殖を開始した。スターター使用チーズでは両温度とも22日後でも増殖は見られなかった。
E.coli O157:H17：スターター無しのチーズでは、3℃では増殖せず、7℃では遅滞期は2日以下で8日後にE+7cfu/gに達した。スターター使用チーズでは17日間では増殖しなかった。
 
E.cloacae：スターター無しのチーズでは、7℃、3℃とも増殖したが、遅滞期に両温度間で有意な差が見られた。そして、7℃と3℃で各々7日と20日後にE+8cfu/gを超えた。スターターを含むチーズでは、7℃では10日後にE+6cfu/gに達したが、3℃では増殖が起こらなかった。
 
P.aeruginosa：3℃では増殖が見られなかったが、7℃では20日後にE+6cfu/gに達した。一方スターターを含むチーズでは7℃でも増殖しなかった。
 
P.fluorescens：7℃、3℃とも遅滞期も増殖速度も両者に差は無く増殖した。スターターを含むチーズでも同様であった。
この間のチーズ中のスターターカルチャー(Fargo 763)の菌数は変わらず、約E+7cfu/gの一定値にとどまった。また、スターターを含むチーズ中には上記5種の菌を阻害するバクテリオシンを検出しなかったし、pHは6.5-6.6にとどまっていた。
今後、Fargo 763の阻害メカニズムを知る研究が必要であり、その応用を図ることも必要。
　
<ITEM7> \nPubMed\n
　
Journal of Food Safety, 19, 161
 
<PUBMED>

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=search&term=Journal+of+Food+Safety,+19,+161

