文献番号：249
タイトル：Antimicrobial Activity of Lysozyme Against Listeria Monocytogenes in Milk.
邦訳タイトル：乳中 L.monocytogenesに対するリゾチームの抗菌活性
著者：Carminati D, Carini S
誌名､発行年、巻号頁：Microbiologie-Alimeｎts-Nutrition (1989), 7, (1), 49-56

※このＣＤ-ＲＯＭでは、べき乗を右記の例のように表します。（例）10の9乗 → 10E9

<ITEM1> \n調査の目的\n　
　
乳中の L.monocytogenesに対するリゾチームの抗菌効果を、保存剤としての応用の可能性の観点から検証する。
　
<ITEM2> \n検体名\n　
　
-
　
<ITEM3> \nサンプルサイズ\n及び採集方法\n　
　
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<ITEM4> \n検査項目\n　
　
L.monocytogenes菌数
　
<ITEM5> \n検査法\n(増殖の有無､培地､培地の温度)\n　
　
卵白塩酸リゾチーム、ハンセン液体レンネット、乳酸、クエン酸などの溶液は、0.2μフィルターで滅菌ろ過してから使用。
使用リステリア菌株：L.monocytogenes 1225, 2115, 2154, 2881の4株を使用。これら菌株は、0.6%酵母エキス加トリプトンSoya寒天(TSYA)で35℃24時間培養し、毎月移植しながら4℃で保存。試験用カルチャーは保存カルチャーから調整、すなはち0.6%酵母エキス加トリプトンSoyaブロス(TSYB)で35℃24時間培養した。他の培地は10-20%滅菌還元脱脂乳(SSM)
 
L.monocytogenesに対するリゾチーム活性
L.monocytogenesの生残はTSYBで35℃48時間培養後平板計数で測定
試験1 (SSM中でリゾチームを添加）
a）増殖後のリゾチーム添加：L.monocytogenesのSSM中24時間培養物（約E+8菌/ml）にリゾチームを0、25、100、500、1000ppm加え24時間培養。  
b）リゾチームとともに増殖：SSMにリゾチームを上記と同濃度に加える。これに L.monocytogenesを約E+5-E+6になるよう接種し、35℃で24時間培養。
 
試験2 (リゾチームと一緒に加熱処理)
a）加熱処理とリゾチームの添加：各2ｍｌのSSM中24時間培養物、1：100SSM希釈物、1：10000SSM希釈物をガラス管(10×100mm)にいれ、72℃の熱水に浸し達温後15秒及び60秒間保持後直ちに氷水で冷却。リゾチームを最終濃度で0、100、500ppm加え、引き続き35℃で24時間培養。
b）リゾチームと共に増殖しその後加熱処理：リゾチームを0及び500ppm加えたSSMに1225株及び2154株を接種。35℃で24時間培養後、各々2ｍｌの培養物をガラス管に入れ上記と同様に、72℃で加熱処理。氷水で冷却後再度35℃で24時間培養。各処理の前後で平板計数を実施。
 
試験3 (酸性化培地中でリゾチームと一緒に増殖）
10%SSMを乳酸あるいはクエン酸でpH5.3に酸性化し、0、100、500ppmのリゾチームを添加。 L.monocytogenesの24時間培養物をE+2-E+3個/mlになるように接種。35℃培養0時間と24時間後、さらに4℃保存15、30、60日後に菌数を測定。
 
試験4 (酸性化培地中でリゾチーム及びレンネットと一緒に増殖）
乳酸で酸性化した20%SSMに0、100、500ppmのリゾチームと滅菌液状レンネット（0.3ml/L）を加え、それに L.monocytogenes4菌株を各々約E+3個/mlになるよう接種。25℃で36時間培養し、さらに4℃で保存。保存0、1、2、3、4、5、6週間後に平板計数を実施。
　
<ITEM6> \n結果\n(汚染実態、汚染菌の性状、防除対策等)\n　
　
・ L.monocytogenes増殖後にリゾチームを加えた場合も L.monocytogenesをリゾチーム存在下で増殖させた場合も、菌数を減少させたが、その程度はわずかであった。
 
・熱処理に対する感受性は4つの株で異なっていた。1225株はE+4個/ｍｌの場合にのみ加熱両条件で完全に破壊され、2881株は72℃60秒でのみ破壊された。2154株と2115株はこの条件でも若干の細胞は熱抵抗性を示した。菌数がE+6-E+8個/mlと多い場合は完全に破壊されることは無かった。これに100及び500ppmのリゾチームを加えて35℃24時間の培養を行ったが、増殖の阻害効果は見られなかったし、生残した菌はリゾチーム存在下でも増殖可能であった。
 
・500ppmのリゾチーム存在下での増殖は、わずかな阻害効果(数十%の菌数減少)が認められ、それを加熱処理するとわずかな感受性増大が見られたが、全ての菌を破壊するには至らなかった。
 
・乳酸及びクエン酸で酸性化した乳へのリゾチームの添加は菌株による違いはあるが、かなりの阻害効果を示した。1225株の場合、乳酸とリゾチーム500ppmの場合は、増殖が見られなかったし、同量のリゾチームとクエン酸では溶菌された。4℃の保存中後者では増殖は生じなかったが、前者では増殖が回復した　2881株では始めの24時間で両濃度のリゾチーム添加において、乳酸が増殖の阻害、クエン酸ではかなりの溶菌が観察された。しかし、その後の4℃保存中に増殖が回復した。
2115株及び2154株は、有機酸の影響度、およびリゾチームへの感受性は上記菌株の中間の位置にあった。
 
・酸、リゾチーム及びレンネットの組み合わせ試験では、4つの株はpHや温度に影響されて各々異なったリゾチーム感受性を示したが、レンネットの添加はどのパラメーターにも影響しなかったように見える。
 
・全体として、 L.monocytogenes株はリゾチームに対して各々異なった感受性を持つこと、ある培養条件下では菌含量や加熱処理に応じて増殖阻害が起きること、そして4℃では多かれ少なかれ増殖が減少することがわかった。
　
<ITEM7> \nPubMed\n
　
Microbiologie-Aliments-Nutrition, 7, 49
 
<PUBMED>

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=search&term=Microbiologie-Aliments-Nutrition,+7,+49

