文献番号：130
タイトル：Detection of Listeria monocytogenes in Italian-style soft cheeses
邦訳タイトル：イタリアンソフトチーズ内のリステリア菌の検出について
著者：Longhi,C., Maffeo, A., Penta, M., Petrone, G., Seganti, G.P., Conte, M.P.
誌名､発行年、巻号頁：Journal of Applied Microbiology (2003), 94, 879-885

※このＣＤ-ＲＯＭでは、べき乗を右記の例のように表します。（例）10の9乗 → 10E9

<ITEM1> \n調査の目的\n　
　
PCR法を用いたリステリア菌の高速検出法の検討
　
<ITEM2> \n検体名\n　
　
モッツァレラ、クレツェンツァ、リコッタ
　
<ITEM3> \nサンプルサイズ\n及び採集方法\n　
　
製造後48時間経過したチーズを店舗で購入し、各チーズから25gを採取した。
 
　
<ITEM4> \n検査検体数\n　
　
-
　
<ITEM5> \n検査法\n(増殖の有無､培地､培地の温度)\n　
　
①25gのチーズに225mlのBHI（brain heat infusion broth）を添加し、2分間ホモジナイズする。その後、液を2つに分け一方に対して121℃20分の滅菌を行う。　10mlを遠心分離し、固形分を除く。（150×gで10分間）　Listeria monocytogenesATCC7644を1,E+2,E+3,E+4,E+5CFUml-1になるよう添加する。DNAを抽出し、PCR法を実施する。
②25gのチーズに予めListeria monocytogenesATCC7644を接種する。4℃で7日間インキュベーションする。インキュベーション後のチーズに225mlのbroth baseを添加し、2分間ホモジナイズする。その後、150×gで10分間遠心分離し、固形分を除く。SR141E（Oxoid）を加え、30℃で18時間インキュベーションする。
③PCR法：プライマーは、actA遺伝子内の300~400bpsのフラグメントを選択した。　
　
<ITEM6> \n結果\n(汚染実態、汚染菌の性状、防除対策等)\n　
　
①PCR法を用いることで、Listeria monocytogenesに特有な遺伝子(actA)を増幅することができた。②ソフトチーズにListeria monocytogenesを人工的に植付け、そのチーズ破砕物の抽出物からPCR法を用いることで、Listeria monocytogenesの遺伝子を検出することができた。ホモジナイズ後の滅菌の有無による差は認められなかった。また、リステリア菌をチーズに接種後、過酷な条件で培養(4℃7日間)した後の影響を見た結果、モッツァレラ及びリコッタの場合は、PCR法で検出できたが、クレツェンツァの場合は検出できなかった。
　
<ITEM7> \nPubMed\n
　
Journal of Applied Microbiology, 94, 879
 
<PUBMED>

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=search&term=Journal+of+Applied+Microbiology,+94,+879

