文献番号：248
タイトル：Inhibition of Listeria Monocytogenes by Strains of Lactic Acid Bacteria Used as Ferments.
邦訳タイトル：発酵菌として用いられる乳酸菌による L.monocytogenesの阻害
著者：Romero N C, Nader de Macias M E, Apella M C
誌名､発行年、巻号頁：Microbiologie Aliments Nutrition (1990), 8, (4), 335-340

※このＣＤ-ＲＯＭでは、べき乗を右記の例のように表します。（例）10の9乗 → 10E9

<ITEM1> \n調査の目的\n　
　
乳酸桿菌の L.monocytogenesの増殖に対する阻害効果を調べる
　
<ITEM2> \n検体名\n　
　
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<ITEM3> \nサンプルサイズ\n及び採集方法\n　
　
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<ITEM4> \n検査項目\n　
　
L.monocytogenes菌数、抗菌活性
　
<ITEM5> \n検査法\n(増殖の有無､培地､培地の温度)\n　
　
菌の維持と培養条件
乳酸桿菌(L.casei及びL.asidophilus)の凍結乾燥品をMRSブロスとLAPTg培地に各々移植し37℃で培養。活性培養物が得られるまで同培地で継代培養する。　菌株の維持には同一培地か1%酵母エキス添加乳に毎週移植。
L.monocytogenesはブレインハートインフージョン(BHI)で増殖と維持。
 
抗菌活性の測定
乳酸桿菌の増殖にはLAPTg、MRS、乳酸桿菌選択培地(LBS)及び10%脱脂粉乳(NFM)を使用。培地に1%の培養株を接種し37℃で48時間培養後、遠心分離(10,000g、15分)して細胞を回収。上清と0.5ｍｌの蒸留水に再懸濁した沈殿の抗菌活性は以下の方法で測定。
a)円板紙法： 0.1mlのL.monocytogenes活性培養液(約9×E+9CFU)を12cmペトリ皿のLAPTg寒天と血液寒天表面に塗沫。1/4インチの円板紙を上清中あるいは菌体懸濁液に浸漬。室温で2-3分間平板上で拡散させた後、37℃24時間培養して阻害リングの直径を測定。 
b)(a)と同じ培地を45℃に保持、0.1mlの L.monocytogenes培養物を接種し緩やかに攪拌してペトリ皿に注ぐ。寒天に直径8mmの穴をあけ被験液を満たす。液が吸収されるまで室温に保ちその後培養し、阻害リングを測る。　
c)遅延阻害の測定：45℃で安定化したLAPTg寒天培地に1×E+2及び1×E+3CFUの 乳酸桿菌活性培養液を接種しペトリ皿に注ぐ。1つのグループは37℃24時間培養後、0.75%の半固形寒天を8mmの厚さに積層し、次いで1×E+5CFUの L.monocytogenesを接種した寒天をさらに積層。別グループの平板では、第2、第3の層を添加する前の培養は行わなかった。
d)液体培地での混合培養：L.casei、L.acidophilusあるいは両菌の混合物をフラスコ中のLAPTgブロスに接種（約E+7UFC/ml)して37℃12時間培養後、L.monocytogenesをE+3CFU/ml接種し、同温で12時間培養。別グループのフラスコには乳酸桿菌と L.monocytogenesを同時に接種。生残菌数測定には、培養物を1%ペプトン液で希釈し、乳酸桿菌用LBS培地とリステリア用血液寒天に塗沫して37℃24-48時間培養。
　
<ITEM6> \n結果\n(汚染実態、汚染菌の性状、防除対策等)\n　
　
・円板紙法とパンチ穴法での試験結果は、全サンプルで L.monocytogenesの阻害を示した。また、阻害効果は培地に依存しており、NFM>MRS>LAPTg>LBSの順であった。そして、この効果は、塩酸、乳酸、酢酸を培養液に加えても阻害しなかったことから、pH低下によるものではなく、また、阻害物質は細胞外性で拡散可能なものであることを示している。
 
・遅延阻害測定の結果は、L.caseiあるいはL.acidophilusの単独による阻害は、L.monocytogenes接種の前に一定の培養時間があった場合のみに起ることを示した。しかし、両菌の混合物を用いた場合は全培養は必要ではなかった。このように乳酸桿菌単一株による阻害効果が起こるために予備培養が必要なことは、臨界的な阻害物質の濃度があることを意味する。
 
・液体培養結果からは、L.caseiとL.acidophilusは単独でも混合でも L.monocytogenesの増殖を阻害したが、混合培養した方が阻害が大きかった。
 
・両菌を混合培養した方が阻害効果が強かったことは、阻害物質の産生速度が単一株のそれより速く、また、数種の阻害物質の相乗効果によるものと考えられる。
　
<ITEM7> \nPubMed\n
　
Microbiologie Aliments Nutrition, 8, 335
 
<PUBMED>

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=search&term=Microbiologie+Aliments+Nutrition,+8,+335

