文献番号：202
タイトル：Acid Adaptation of Listeria monocytogenes Can Enhance Survival in Acidic Foods and during Milk Fermentation.
邦訳タイトル：Listeria monocytogenesの酸性適応は酸性食品および牛乳発酵中においての生存率を高める
著者：Gahan, C.G.M.,O'Driscoll,B.,Hill,C.
誌名､発行年、巻号頁：Applied and Environment Microbiology:(1996), 62, (9), 3128-3132

※このＣＤ-ＲＯＭでは、べき乗を右記の例のように表します。（例）10の9乗 → 10E9

<ITEM1> \n調査の目的\n　
　
Listeria monocytogenesの酸耐性反応(acid tolerance response；ATR)及び酸耐性変異株(acid-tolerance mutant)についての知見を得るため
　
<ITEM2> \n検体名\n　
　
カッテージチーズ、チェダーチーズ、モッツァレラチーズ、オレンジジュース、サラダドレッシング、ナチュラルヨーグルトおよび発酵中の牛乳
　
<ITEM3> \nサンプルサイズ\n及び採集方法\n　
　
下記条件にて接種、培養後、Listeria selective ager (LSA)プレートにて検出
 
　
<ITEM4> \n検査検体数\n　
　
-
　
<ITEM5> \n検査法\n(増殖の有無､培地､培地の温度)\n　
　
1.L. monocytogenes の酸性適応及びATRの測定　　
Tryptone soya broth (Sigma Chemical Co., St Louis, Mo.)に0.6%のyeast extractを添加した培地(TSB-YE)で一晩培養した菌を新しい培地に継代し吸光度(A660)が0.15になるまで培養した。培養した菌を遠心分離にて集めた後、1 Mの乳酸でpHを5.5あるいは7.0に調整したTSB-YEに再懸濁し、37℃で60分培養した。その後、遠心分離にて集菌し、3 Mの乳酸でpH 3.5に調整したTSB-YEに再懸濁した。この培養液を37℃で120分まで培養し、0.6%のyeast extractを含むtryptone soy ager (TSA)上で生菌数を測定した。また、酸耐性変異株(acid-tolerant mutant)はpH3.5の培養液中で存在しえた個体を採取し用いた。
 
2.カッテージチーズ中でのL. monocytogenesの生存について　　
カッテージチーズ(pH 4.71)中における経時的な酸性適応(acid adapted)及び不適応(acid non adapted)リステリア菌(LO28)あるいは、酸耐性変異リステリア菌(ATM56)の生存数を確認すべく、チーズ中に植菌した。植菌後4℃の条件下で15日までの生菌数についてLSAプレートを用いて検討した。
 
3.固形チーズ中でのL. monocytogenesの生存について　　
チェダーチーズ(Whole-fat; pH 5.16)、チェダーチーズ(low-fat;pH 5.25)および モッツァレラチーズ(pH 5.6)中における経時的な酸性適応及び不適応リステリア菌(LO28)あるいは、酸耐性変異リステリア菌(ATM56)の生存数を確認すべく50gのブロックチーズをスライスし、チーズ1gあたりE+3からE+4個植菌した。その後、チェダーチーズ群は8℃、モッツァレラチーズは4℃で培養し、LSAプレートを用いて、生菌数を確認した。
 
4.他の酸性食品中でのL. monocytogenesの生存について　　
市販のサラダドレッシング(pH 3.0)およびオレンジジュース(pH 3.76)中における経時的な酸性適応及び不適応リステリア菌(LO28)あるいは、酸耐性変異リステリア菌(ATM56)の生存数を確認すべく、これらの菌を植菌(1 mlあたりE+6個)し、4℃で培養後、LSAプレートで生菌数を確認した。

　
<ITEM6> \n結果\n(汚染実態、汚染菌の性状、防除対策等)\n　
　
pH 3.5の培養液中、ナチュラルヨーグルト(pH 3.9)およびカッテージチーズ(pH 4.17)における酸性適応リステリア菌(LO28)あるいは、酸耐性変異リステリア菌(ATM56)の生存率は、酸性不適応リステリア菌(LO28)と比して非常に高いものであった。カッテージチーズにおいて､15日で､ATM56が3%､LO28ではほとんど0%であった｡一方、チェダーチーズ群(whole fatおよびlow fat)においては、酸性適応及び不適応リステリア菌(LO28)は培養後70日まで生存することはできなかったが、酸耐性変異リステリア菌(ATM56)は1%程度ではあるが、生存することができた。モッツァレラチーズ(pH 5.6)は各菌ともに4週間の間の生存率に相違はなかった。オレンジジュース(pH 3.76)中においては、酸性不適応リステリア菌(LO28)は７時間後の生存率が2%程度であったが、酸性適応リステリア菌(LO28)あるいは、酸耐性変異リステリア菌(ATM56)は30から40%の生存率であった。サラダドレッシング(pH 3.0)中においては、酸性不適応リステリア菌(LO28)は15分後にはすべて死滅したが、酸性適応リステリア菌(LO28)あるいは酸耐性変異リステリア菌(ATM56)LO28 はさらに長い時間(およそ90分間)生存することができた。乳発酵中(pH 4.8)において、各菌株を植菌すると、4時間後(pH 4.15)まではいずれの菌も生育したが、その後、酸性不適応リステリア菌(LO28)は極端に減少し、酸耐性変異リステリア菌(ATM56)LO28も酸性適応リステリア菌(LO28)と比して生存率は減少した。発酵中(pH 5.5)において、各菌株をすると、酸性不適応リステリア菌(LO28)はpH 4.8の時の結果と比してさらに生存率は減少し、ほぼ死滅した。また、酸耐性変異リステリア菌(ATM56)LO28及び酸性適応リステリア菌(LO28)の生存率もpH 4.8の時と比して減少していた。この結果から、酸耐性は対数増殖期のリステリア菌においては、十分に誘導されないことが示唆された。
　
<ITEM7> \nPubMed\n
　
Applied and Environment Microbiology, 62, 3128
 
<PUBMED>

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=search&term=Applied+and+Environment+Microbiology,+62,+3128

