文献番号：45
タイトル：Frequency of occurrence of <I>Campylobacter</I> spp. In red meats and poultry in Northern Ireland and their subsequent subtyping using polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphisum and the random amplified polymorphic DNA method
著者：R.H.madden
論文-年：Journal of Applied Microbiology 84,703-708(1988)
個票分類：と畜場
調査国：北ｱｲﾙﾗﾝﾄﾞ


<ITEM1> \n調査目的\n　
　
北ｱｲﾙﾗﾝﾄﾞ産の赤肉（羊肉、牛肉、豚肉）と鶏肉のｷｬﾝﾋﾟﾛﾊﾞｸﾀｰ汚染ﾚﾍﾞﾙを調査することと、PCR-RFLP法及びRAPD法により分離ｷｬﾝﾋﾟﾛﾊﾞｸﾀｰの型別を決定し、由来が散発的なものか特定汚染源によるものか調査すること。
 
<ITEM2> \n検体名\nサンプルサイズ\n及び採集方法\n　
　
北ｱｲﾙﾗﾝﾄﾞ10と畜場で採材、ﾗﾑ肉と体(n=100)は胸肉の、綿棒を用い100ｃ㎡のｽﾜﾌﾞを材料とした。牛と体(n=100)は、頚部肉を削り取り10cm×10cm×3mmの肉片を材料とした。小売ﾊﾟｯｸは、牛肉(n=50)、豚肉(n=50)、鶏肉(n=120）を対象とし複数のｽｰﾊﾟｰﾏｰｹｯﾄで200－500g単位で毎月10ﾊﾟｯｸ購入した。
 
<ITEM3> \n調査対象微生物\n　
　
<I>Caｍpylobactor</I>
 
<ITEM4> \n検査方法\n増菌の有無\n培地\n　
　
と体（ﾗﾑ及び牛肉）材料は、冷蔵状態で研究室に搬入、3時間（小売ﾊﾟｯｸ肉は2時間）以内に調査した。ﾗﾑ肉と体は綿棒ｽﾜﾌﾞを、牛と体および小売ﾊﾟｯｸ肉は10gを、90mlのFBP加preston選択ﾌﾞﾛｽで（85％N2、10％CO２、５％O2）42℃48時間培養後、preston選択培地で42℃、24－48時間培養、通常のﾊﾞｲｵﾀｲﾋﾟﾝｸﾞにより特徴的ｺﾛﾆーを選択、ｷｬﾝﾋﾟﾛﾊﾞｸﾀｰの存在を確定した。PCR－RFLPは、Nachamkinの方法に従い、flaA遺伝子をPCRで増幅、1.7kbの増幅部分をDde1制限酵素で切断、ｴｲｼﾞｳﾑﾌﾞﾛﾏｲﾄﾞで染色2%ｱｶﾞﾛｰｽｹﾞﾙで泳動（70V6時間）した。RAPDは、Maddenの方法で実施、ｹﾞﾉﾑ全長を標的とした5´-CCTGTTAGCC-3´のﾌﾟﾗｲﾏ-を用いた。
 
<ITEM5> \n結果\n汚染実態\n汚染菌の性状\n防除対策等\n　
　
と体からのﾗﾑ肉、牛肉(n=100)からは分離されなかった。小売ﾊﾟｯｸの牛肉(ｎ=50)豚肉(n=50)からも分離されなかった。これは、と畜場での衛生対策の徹底によるものと考えられ、北ｱｲﾙﾗﾝﾄﾞでは、こららの肉はｷｬﾝﾋﾟﾛﾊﾞｸﾀｰ食中毒の原因として重要でないと考察される。鶏肉の小売ﾊﾟｯｸからは分離されたため、1年間調査を継続、全てのｻﾝﾌﾟﾙは、結果分析を簡略化するため一生産者からにした。鶏肉の120小売ﾊﾟｯｸを分析したところ、45ﾊﾟｯｸ（38％）で見つかり、<I>Campylobactor coli</I>,jejuniがほぼ同率であった。遺伝子型決定のために1ﾊﾟｯｸに付き1ｺﾛﾆｰを1年間－20℃で保存したが、45個のうち12個失われた。血清型別では、（32個中16個）多くが型別不能であったが、5血清型に分類された。遺伝子型別では32全てが分類された。PCR-RFLP法では9つの型、RAPD法では18の型に分類された。遺伝子ﾀｲﾌﾟでは、繰り返して同じ型が取れることがあった。例として、PCR-RFLP法では8月と10月に同じ型が得られた。　繰り返し分離されたのはRAPD法で2つの型、PCR-RFLPで3つの型であった。同一農場で生産された鶏からの生産物を採材したが、ﾌﾞﾛｲﾗｰの飼育期間は6週間、鶏肉の貯蔵は7日以下、<I>Campylobactor</I>は30度以下では増殖しないこと、農場ではｵｰﾙｲﾝｵｰﾙｱｳﾄされており、古い鶏と新しい鶏の水平感染は起こり難いことなどにより、途中でｺﾝﾀﾐしたとは考えにくい。つまり繰り返し感染はﾌﾞﾛｲﾗｰ農家で起こり、発生源の特定には<I>Caｍpylobactor</I>ﾌﾘ-家禽が生産されているか否か調査することが必要であるとの結論に至った。遺伝子型別は生産、商用ﾊﾟｯｸそして消費までのﾄﾚｰｽに効果的な方法であり、特にRAPDは、最も高く識別可能であった。　
 
<ITEM6> \nPubMed\n
　
J Appl  Microbiol, 84, 703
 
<PUBMED>

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?orig_db=PubMed&db=PubMed&cmd=Search&term=J+Appl+Microbiol%5BJour%5D+AND+84%5Bvolume%5D+AND+703%5Bpage%5D
