文献番号：55
タイトル：Application of the Limulus amoebocyte lysate test as an indicator of microbial contamination in pork carcasses
著者： Naoaki Misawa
論文-年：J Vet Med Sci. 57(2):351-353，1995
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調査国：日本


<ITEM1> \n調査目的\n　
　
食肉の微生物コントロールは食品の安全において最も重要な物のひとつである。　と殺、解体により重大な汚染が起こることが知られている。と体の衛生の指標菌として総細菌、大腸菌群、腸内連鎖球菌の検出が常に行われているが、依然として準備と判定に長時間を要するのは問題である。そこで、簡単、迅速な方法を検討した。
 
<ITEM2> \n検体名\nサンプルサイズ\n及び採集方法\n　
　
宮崎県のと畜場で２５頭の豚と体について細菌汚染の試験を行った。内臓摘出、剥皮、洗浄後、肘関節の周囲１００c㎡を滅菌液で拭き取り、１０ｍｌの生理食塩水に溶かし、氷で貯蔵し試験室に搬入した。検体はボルテックスで３０秒攪拌し、生理食塩水による希釈を検体採取後２時間以内に行う。
 
<ITEM3> \n調査対象微生物\n　
　
大腸菌
 
<ITEM4> \n検査方法\n増菌の有無\n培地\n　
　
総菌数はplate count agar、大腸菌はdesoxycholate agar、低温細菌はcrystal violet triphenyltetrazolium chioride agarを用い、総菌数は３５℃、４８時間、大腸菌は２４時間、低温細菌は２５℃、７２時間培養する。黄色ブドウ球菌は卵黄加マンニット食塩培地を用い、３５℃、４８時間培養し、コロニーのマンニット代謝の兆候とレシチン反応を考慮し判定する。
Limulis Amoebocyte Lysate（以下ＬＡＬ）テストは簡単な内毒素キットであるLimutesterを用いて行う。ＬＡＬ試薬は毛細管内で凍結乾燥されており、細菌検査用に準備し希釈したサンプルを毛細管内試薬と混合し、水平に３７℃、６０分培養する。その後、毛細管を垂直にし毛細管内の混合物が、そのまま落ちなければ陽性とする。このキットには陽性コントロールとしてE,coli内毒素が、陰性コントロールとして滅菌生理食塩水が添付されている。
 
<ITEM5> \n結果\n汚染実態\n汚染菌の性状\n防除対策等\n　
　
豚と体１００ｃ㎡から、総菌数10E3.6～10E6.4、黄色ブドウ球菌10E2.0～10E3.5、大腸菌10E1.5～10E4.3がそれぞれ検出されたが、ＬＡＬテストは大腸菌の結果に高い相関が見られ、他の細菌には見られなかった。ＬＡＬテストは汚染の指標細菌となる大腸菌に反映され、食品衛生分野での活用が有効と思われる。（同定することは出来ない。）
ＬＡＬテストは生存菌のみでなく死亡した菌も検出する。それはグラム陰性菌の内毒素を検出するからである。これにより、大腸菌数より総グラム陰性菌数の方がＬＡＬ法とより良い相関が得られる。しかし、ＬＡＬ法と大腸菌数の高い相関はと体の総グラム陰性菌における生存している大腸菌の割合は変わらないことによる。ＬＡＬテストはと畜場におけると体の糞便汚染調査に有用と思われる。厳密な定量法より簡単、迅速であり、検体採取後２時間以内に判定でき、と体の細菌汚染の指標として有用なものである。
 
<ITEM6> \nPubMed\n
　
J Vet Med Sci, 57, 351
 
<PUBMED>

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?orig_db=PubMed&db=PubMed&cmd=Search&term=J+Vet+Med+Sci%5BJour%5D+AND+57%5Bvolume%5D+AND+351%5Bpage%5D
