文献番号：83
タイトル：Molecular characterization of <I>Escherichia coli</I> O157 contamination routes in a cattle slaughterhouse
著者：Tutenel A. V.
論文-年：J. Food Prot. 66:1564-1569 (2003)
個票分類：処理場
調査国：ベルギー


<ITEM1> \n調査目的\n　
　
牛の処理場における枝肉および環境中のO157汚染状況の解明、およびPFGE、stx遺伝子のタイピングによる汚染経路の解明。
 
<ITEM2> \n検体名\nサンプルサイズ\n及び採集方法\n　
　
調査期間：2002年5月の1週間
採取法
3日間の休み明けの火曜日、その週の金曜日、次週の木曜日の3回サンプリング。糞便（100g）および扁桃（全組織）以外のサンプルはスワブで拭き取り（約400ｃ㎡）。面積の大きい場所は4ヶ所を拭き取りまとめて1サンプルとした。

サンプル（サンプリング1回当りの採取数）
処理開始前：繋留舎（5）、スタンニング部屋への通路（3）、スタンニング部屋（内部（1）、外部（1））、エプロン（（5）処理ラインの異なる5ヶ所から）、足かせ（2）、フック（3）、床（1）、昇降機（3）、腸管用のトレイ（1）
処理開始後：ナイフ（3回の合計：17）、最初の切開時のバー（3回の合計：4）
各回20頭の連続的に処理された牛からサンプリング（肛門周囲の皮膚、肩部の皮膚、扁桃、糞便、枝肉の肩部）
 
<ITEM3> \n調査対象微生物\n　
　
<I>E. coli</I> O157
 
<ITEM4> \n検査方法\n増菌の有無\n培地\n　
　
糞便：25g＋2%novobiocin加modified tryptone soya broth（mTSBn）225ml
扁桃：サンプル＋9倍量のmTSBn（wt/vol）
スワブ：1スワブ＋mTSBn100ml、または4スワブ＋mTSBn225ml
ストマッカーで1分ホモジナイズ　→42℃、6hインキュベーション　→免疫磁気ビーズ分離法（Dynabeads anti-E.coli O157）　→100μlを　cefixime 0.05mg/L　およびtellurite 2.5mg/L　添加sorbitol MacConkey agar に接種、42℃、20-22h　→最大4コロニーを釣菌、plate count agarで純培養　→血清で凝集反応　→API20Eで生化学性状確認、chromogenic diagnostic tabketでβ-グルクロニダーゼ確認
PCR：stx１、stx2、eaeA（intimin）、E-Hly（プラスミドにコードされた溶血毒）を標的遺伝子とした既知のプライマーを使用。
PFGE：制限酵素はXbaI、電気泳動はCHEF-mapperを使用。
 
<ITEM5> \n結果\n汚染実態\n汚染菌の性状\n防除対策等\n　
　
供試した検体の21%（84/394）からO157が分離された。O157は処理開始前の処理場環境（繋留舎、通路、スタンニング部屋、エプロン）からも検出され、用いている消毒方法がO157 の汚染の除去に効果がないことが示唆された。最初の二日は、全ての糞便および枝肉は陰性であったが、3日目には、5つの糞便サンプルおよび糞便は陰性だった動物の枝肉4体が陽性であった。扁桃は全てのサンプリング日で陰性であった。肛門周囲と肩部の皮膚は全てのサンプリング日で陽性であり、肩部の皮膚の汚染率は、肛門周囲の皮膚の2倍であった。
分離株のPFGEでは26種類のPFGEパターンが得られ、うち5種類のPFGEパターンに型別された株は2種類以上のstx遺伝子を保有していた。PFGEとstxのタイプの組み合わせでは32種類に分けられた。一つのサンプルからしばしば異なるタイプのO157が分離された。また、サンプリング1日目と2日目では、環境由来株と枝肉の皮膚由来株で優勢なタイプは異なっていたが、3日目には環境、皮膚、糞便、枝肉で共通した2種類の優勢なタイプがみとめられた。供試した動物は異なる農場由来であったが、各サンプリング日で、これらの動物の皮膚から共通した1種類の優勢なタイプ（3日目には2種類）のO157が検出された。以上より、処理場内における汚染の進行は日に日に進行すること、農場から出荷後の動物同士の接触はO157の皮膚汚染の拡大に大きく関与することが明らかとなった。
 
<ITEM6> \nPubMed\n
　
J Food Prot, 66,1564
 
<PUBMED>

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?orig_db=PubMed&db=PubMed&cmd=Search&term=J+Food+Prot%5BJour%5D+AND+66%5Bvolume%5D+AND+1564%5Bpage%5D
