文献番号：86
タイトル：Microbiological Monitorring of Sheep Carcass Conamination in Three Swiss Abattoirs.
著者：Zweifel.C.
論文-年：J. Food Prot. 66:946-952 (2003)
個票分類：処理場
調査国：スイス


<ITEM1> \n調査目的\n　
　
好気性細菌数（APCs）、腸内細菌数（Ecs）および志賀毒素産生大腸菌（STEC）の存在の有無を指標として、処理場における羊の枝肉の細菌汚染実態を明らかにするとともに、得られたデータを用いてと畜衛生のモニタリング方法を確立する。
 
<ITEM2> \n検体名\nサンプルサイズ\n及び採集方法\n　
　
1年半の間に、EUに認可されたスイス国内のと畜場3ヶ所において,羊の枝肉計580検体（A施設147、B施設318、C施設115検体）を調査。各枝肉につき10ヶ所（頸部、頸部側面、前肢外側、前肢内側、肩、胸部、背部、脇腹、会陰部および後肢）各40c㎡の範囲をwet-dry double-swab法によりスワブし、合計5800サンプルを採取。
 
<ITEM3> \n調査対象微生物\n　
　
好気性細菌数（APCs）、腸内細菌数（Ecs）および志賀毒素産生大腸菌（STEC）
 
<ITEM4> \n検査方法\n増菌の有無\n培地\n　
　
１．APCs&Ecs：スワブは20mlの生理食塩水中で30秒間ホモジナイズ。→spiral platerを用いてplate count agarおよびVRBG agarに接種。→plate count agar：好気、30℃、48h、VRBG：嫌気、30℃、48hr。→菌数カウント　
２．STEC：　① サンプル5ml＋brilliant green bile broth 15ml、37℃、24h増菌培養　② 各枝肉でまとめたサンプルについてPCR（標的遺伝子：stx1, stx2）。③ PCRで陽性だった90サンプルについて、増菌培地から5%羊血加TSAに接種、単一コロニーについて上記と同様のPCRを行い、確認。④ 生化学性状試験（マンニトール分解能、ONPG試験、硫化水素およびインドール産生性、ウレアーゼおよびリシン脱炭酸酵素の証明）。全ての株についてソルビトール発酵性、β-D-グルクロニダーゼ活性、およびPCRによりstx1, stx2遺伝子の存在を確認。PCR-PFLPによりstx2遺伝子の変異のサブタイピング。さらにeae、hlyA、astA遺伝子をPCRにより検出。
 
<ITEM5> \n結果\n汚染実態\n汚染菌の性状\n防除対策等\n　
　
APCｓの中央値（log CFU/ c㎡）は2.5（処理場Aの肩部）から3.8（処理場Cの胸部）の範囲であり、各処理場ともに胸部と頸部が最も高い汚染率を示した。A施設における菌数は会陰部を除き、他の施設に比べて低く、特に前肢の外側、内側、肩部で顕著であった。
腸内細菌は枝肉の68.1%（処理場A：81.0%、B：65.1%、C：60%）、全サンプルの15.2%（処理場A：20.1%、B：14.4%、C：11.2%）から検出された。陽性サンプルの割合は、2.6%（処理場C後肢と脇腹）から、42.2%（処理場A会陰部）の幅であった。菌数（ECｓ）は全体的に少なく、1.0×103CFU/c㎡以上の菌数は、処理場Aで4サンプル（最大9.8×103）から、Bで7サンプル（最大1.9×104）から検出されたが、C施設はそれ以下であった。
PCRによるstx遺伝子の陽性率は36.6%（196/535）（処理場A：59.9%、B：20.9%、C：44.3%）であった。52のPCR（stx）陽性サンプルから56株のSTECが分離されたが、これら全ての株はO157グループではなく、ソルビトール、β-D-グルクロニダーゼ陽性であった。この56株のうち42.9%で<I>stx</I>1、12.5%で<I>stx</I>2、44.6%で両方の遺伝子が検出され、<I>stx</I>2の多くはサブタイプ<I>stx</I>2dであった。他の病原性因子はSTEC分離株の50％で検出され、そのうち8.9%が<I>eae</I>、50％が<I>EHEC-hlyA</I>、3.6%が<I>astA</I>陽性であった。
APCとSTECの検出率との相関性は処理場AとBで（サンプリング部位による）認められたが、腸内細菌とSTECの相関性は処理場Aでのみ、認められた。
以上より、羊の枝肉は処理過程で高率に汚染を受けていることが明らかとなった。枝肉の汚染を明らかにするための日常的な試験として、10体の羊枝肉について頸部、胸部、会陰部のAPCｓおよびECｓを毎月検査することが望ましい。HACCPの方針に基づいた処理場衛生の検証に、この方法は有用である。
 
<ITEM6> \nPubMed\n
　
J Food Prot, 66, 946
 
<PUBMED>

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?orig_db=PubMed&db=PubMed&cmd=Search&term=J+Food+Prot%5BJour%5D+AND+66%5Bvolume%5D+AND+946%5Bpage%5D
