文献番号：17
タイトル：Cattle as a possible source of verocytotoxin-producing <I>Escherichia coli O157</I> infection in man
著者：P.A.Chapman, C.A.Siddos, D.J.Wright, P.Norman, J.Fox and E.Crick
論文-年：Epidemiol. Infect(1993)
個票分類：-
調査国：UK


<ITEM1> \n調査目的\n　
　
と畜場搬入牛がVT陽性E.coliO157のキャリアであるのか、さらにこの病原体はどのようにして人に伝播するのかということを明らかにする目的で調査を実施した。
 
<ITEM2> \n検体名\nサンプルサイズ\n及び採集方法\n　
　
①人検体：血様下痢、ＨＵＳの臨床症状のある患者便
②牛検体（直腸スワブ）：はと殺直後に採取した2013検体（1992年7月8日～8月18日に採取）
③牛検体（枝肉サンプルおよびスワブ）：腸内容にO157 が陽性（23検体）と陰性（25検体）の枝肉を対象とした。③ー１（枝肉サンプル）頸の先端部分の肉を100g採取した。③ー２（枝肉スワブ）吸収ガーゼを用いて0.5㎡表面を拭き取った。
④その他：生産農家の追跡調査も可能な範囲で実施された。
 
<ITEM3> \n調査対象微生物\n　
　
VTEC(STEC)O157、VT、プラスミドパターン、ファージ型別
 
<ITEM4> \n検査方法\n増菌の有無\n培地\n　
　
①人検体（糞便）：検体をSMAC培地（Oxoid-CM813）で（37℃、一晩培養）後、ソルビトール非分解コロニーについて、O157のラテックス凝集反応キット（Oxoid-DR622)を実施し、陽性菌株について性状確認（毒素型別、ファージ型別、プラスミド解析）を行なった。②牛検体（牛直腸スワブ）：検体は4℃で保管し24ｈｒ以内に検査し、CR‐SMAC培地で37℃18～20ｈｒ培養後、ソルビトールとラムノース非発酵コロニーについてラテックス凝集反応を実施し、。③牛枝肉およびスワブは（グラム陽性菌、エロモナス、プロテウスの発育を阻止する目的でvancomycin 8mg/l、cefixime 0.05mg/l、cefsulodin 10mg/lを添加した）ペプトン緩衝水（Oxoid-CM509）250mlに加え軽く振盪混釈後、37℃6hrで前培養を行なった後、CR-SMACで分離培養した。④分離菌株の同定：分離菌株は生化学試験でE.coliの確認を行い、抗O157抗体を用いた凝集反応で血清型O157を確認した。VTはベロ細胞を用いたバイオアッセイで細胞毒性を確認し、VT1・VT2の確認は遺伝子プローブ（VT1：810-830及び1172-1153塩基の２つのプライマー、VT2：800-818及び1169-1149塩基の２つのプライマー）を用いたDNAハイブリダイゼーションで確認した。PCRの条件：DNAテンプレート10ng、各プライマー10pmol、10mMﾄﾘｽHCl pH8.8、2mM MgCl2、50mMKCl、ﾉﾆﾃﾞｯﾄp-40 0.05%、各dNTP200μM、TaqDNAポリメラ-ゼ2.5u）反応温度条件は94℃１分、53℃1分、72℃２分で35サイクル。ｱｶﾞﾛｰｽｹﾞﾙ電気泳動で362bp（VT1）と369bp（VT2）のバンドを確認した。⑤プラスミド分析：アルカリ洗浄法で抽出、浸水ゲル内電気泳動法（ﾄﾘｽｱｾﾃ-ﾄEDTA緩衝液）1%ｱｶﾞﾛｰｽｹﾞﾙ、ｴﾁﾌﾞﾛ染色、紫外線下で観察した。陽性ｺﾝﾄとしてE.coli k-12株を置いた。⑥ファージ型別：Public Health Laboratory(PHL)センターで実施した。
 
<ITEM5> \n結果\n汚染実態\n汚染菌の性状\n防除対策等\n　
　
①人検体：患者31名（17は男性14は女性）からO157が分離され殆どのケースは3-9月に均一に発生していた。②牛検体：直腸スワブ2103検体中303検体（14％）がソルビトールとラムノース非発酵で、この内84検体（4％）がO157であった。この84検体の内78検体がVT陽性であった。糞便からO157が検出された牛の枝肉23検体中7検体（30％）がO157陽性で、直腸スワブと同一のプラスミドが検出されファージ型も一致していた。、糞便からO157が検出されなかった牛の枝肉25検体中2検体（8％）でO157が検出されたが、これは腸内容からO157が検出された牛と近傍したtラインで処理され、それらの糞便から分離されたO157とファージ型およびプラスミド型が一致していた。（詳細：枝肉陽性９検体中６検体が枝肉のみ、２検体が枝肉及び枝肉スワブ、１検体が枝肉スワブのみから分離された）。③　生産農家については34頭を追跡調査した結果17農家は近接した町や市にあるものだった。
（以下考察）今回の調査結果から、牛はVT+O157の保有体として重要であり人におけるO157感染の発症例と牛肉の喫食は関連があるということが示唆された（しかしながら牛肉以外の感染事例もあるので短絡的に考えるべきではない）。ファージタイプやプラスミドの調査は感染源の特定をする上で非常に有効な方法であること、枝肉の汚染状況を調査する上で肉サンプルを調べることは表面を拭うことに比べて更に有効であると考えられた。また、今回分離された牛の由来する地域は様々で汚染が広範に渡っていることが伺われたが、特定の地域において高率に分離された結果から特定の汚染農家があることが示唆された。　また、と畜場内の内部ｺﾝﾀﾐﾈｰｼｮﾝがあることが考えられた。今回の調査は十分な期間ではなかったため牛からの分離と人での感染の季節性について結論づけるまでには至らなかったが今後のO157研究において疫学的知見として大いに役立つものであろう。
 
<ITEM6> \nPubMed\n
　
Epidemiol Infect, 111, 439
 
<PUBMED>

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?orig_db=PubMed&db=PubMed&cmd=Search&term=Epidemiol Infect%5BJour%5D+AND+111%5Bvolume%5D+AND+439%5Bpage%5D
