文献番号：b-59
タイトル：A universal protocol for PCR detection of 13 species of foodborne pathogens in foods
邦訳タイトル：-
著者：Wang R.F.
誌名､発行年、巻号頁：Journal of Applied Microbiology, (1997), <B>83</B>, 727-736
菌種：2.<I>Bacillus cereus</I>
　
<ITEM1> \n調査の目的
 
ポリメラーゼ連鎖反応を利用した食中毒菌の検出に関する論文は数多く存在するが、それぞれ記述内容が大きく異なっている。そこで、13の食中毒菌について精度の良いポリメラーゼ連鎖反応による検出手法を確立する。
　
<ITEM2> \n検体名
 
①シーフード(ザリガニ、ずわい蟹、サーモン、ヒラメ、ホタテ貝、カキ、ナマズ、エビ等)12種類
②チーズ(クリームチーズ、ヌシャテルチーズ)2種類
　
<ITEM3>
 
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<ITEM4> \n検査検体数
 
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<ITEM5>
 
・検査方法：　10gの試料(14種類)を90ml のTSBYE(デキストロース含有Tryptic soy broth培地に6g/l Yast extract を添加)に接種して36±1℃、 16～20h、150回転/分振盪培養した。0.5mlの培養液を0.1%PBSで洗浄し、最終的に50μlの水に還元した。鋳型DNAの抽出は水に還元された試料を1%Triton X-100で10倍希釈して5分間煮沸することにより行った。PCR反応条件は(付図1)による。エチレンブロミド添加、アガロースゲル(2%)で電気泳動を行った。
・ネスティッドPCR：　PCR産物の確認を行うために、PCR反応後の試料1μlを用いて、増幅部位より内側の領域に対するプライマーを用いたPCRを行った。条件は(付図1)に従った。
　
<ITEM6>
 
・今回の検討により、<I>E.coli</I>-O157:H7、<I>Yersinia pseudotuberculosis</I>、<I>Bacillus cereus</I>の3菌種はポリメラーゼ連鎖反応プライマーを新規に確立した。
・他の10菌種については既存のプライマーを修正し確立した。
・唯一<I>E.coli</I>のプライマーだけは、<I>Shigella</I> spp.に反応してしまった。しかしその他のプライマーは目的菌種に特異的に反応した。
・PCRの検出感度は大部分の食中毒菌においてE+1 レベルであった。それ以上の結果となったのは、V. vnlnificus、<I>B. cereus</I>でE+2レベル、赤痢菌は感度が低く5xE+7であった(PCR反応液中の細胞数)。
・食品成分によるPCR反応の阻害はなかった。
・食品を単一の培地で培養し、一定のPCR条件で13種類の食中毒菌を検出できた。
　
<ITEM7>
 
Journal of Applied Microbiology,83,727
　
<PUBMED>

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/htbin-post/Entrez/query?form=4&db=m&Term=Journal of Applied Microbiology,83,727

<LIST1>

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