文献番号：b-63
タイトル：Development of fluorogenic probe-based PCR assay for detection of <I>Bacillus cereus</I>
　　　　　in nonfat dry milk
邦訳タイトル：脱脂粉乳の<I>Bacillus　cereus</I>検出のための蛍光プローブを用いたPCRアッセイ法の開発
著者：Kim Y-R, Czajka J, Batt C A
誌名､発行年、巻号頁：Applied and Environmental Microbiology　(2000), <B>66</B>, (4), 1453-1459 
菌種：2.<I>Bacillus cereus</I>
　
<ITEM1> \n調査の目的
 
蛍光プローブを用いたPCR法を開発し、脱脂粉乳中の <I>B.cereus</I>の検出への利用性を評価する。
　
<ITEM2> \n検体名
 
脱脂粉乳(NFDM)43検体
　
<ITEM3>
 
-
　
 
<ITEM4> \n検査検体数
 
-
　
<ITEM5>
 
1)使用菌株。72株の <I>B.cereus</I>、5株の<I>B.thuringiensis</I>を純カルチャーで使用した。
2)ヘモリシンとセレオリシン配列のPCR。<I>B.cereus</I>ヘモリシン及びセレオリシンAB遺伝子からの780bpと639bp断片の増幅用のプライマーデザインには、GenBankの配列を用いた。
3)PCRフラグメントのクローニングと配列決定。<I>B.thuringiensis</I>713株と833株及び <I>B.cereus</I>17−B株1と17−P株からのPCR増幅産物はTベクタープラスミドを用いてクローン化。挿入断片の配列はDNAシーケンサーを用いて決定した。
4)蛍光プローブによるPCR検出。蛍光ﾌﾟﾛｰﾌﾞ（cerTAQ-1）は <I>B.cereus</I>の866と875位の塩基の相違に特異的であるようにデザインされた。第2のﾌﾟﾛｰﾌﾞ(cerTAQ-2)は cerTAQ-1陰性の <I>B.cereus</I>に見出された多型性配列を証明するようデザイされた。PCRサイクリングの後、レポーター色素FAMとクエンチャー色素TAMRAの蛍光強度を測定した。ΔPQ値は既述の方法で計算した。
　
<ITEM6>
 
1)780bpヘモリシン増幅産物の配列は<I>B.cereus</I>と<I>B.thuringiensis</I>の間に種に特異的な差異の無いことを示したが、639bpセレオリシンの増幅産物の866,875,1287ヌクレオ位置で、種特異的な差異が見られた。
2)72株の<I>B.cereus</I>中51株が cerTAQ-1プローブで陽性、5株の <I>B.thuringiensis</I>中1株のみが cerTAQ-1プローブで陽性、39株の <I>B.cereus</I>中35株が cerTAQ-2で陽性であった。
3)蛍光PCRを用いた43点の脱脂粉乳の<I>B.cereus</I>存在テスト。43サンプル中12サンプルが43CFU/g以上の汚染、全てが蛍光PCR陽性であった。残31サンプル中12がセレウス陰性、19が3〜9CFU/gの汚染であった。全31サンプルとも蛍光PCR陰性であった。
　
<ITEM7>
 
Applied and Environmental Microbiology, 66, 1453
　
<PUBMED>

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/htbin-post/Entrez/query?form=4&db=m&Term=Applied and Environmental Microbiology, 66, 1453
