文献番号：b-67
タイトル：Discrimination between <I>Bacillus cereus</I> and <I>Bacillus</I> thuringiensis using
　　　　　 specific DNA probes based on variable region of 16S rRNA 
邦訳タイトル：16SrRNA 部の特定DNAプローブを用いた<I>B.cereus</I>と<I>B.thuringiensis</I>の識別
著者：te Giffel, M.C.
誌名､発行年、巻号頁：FEMS Microbiology Letters : (1997), <B>146</B>, 47-51
菌種：2.<I>Bacillus cereus</I>
　
<ITEM1> \n調査の目的
 
<I>B.cereus</I>とその同種の同定において誤った識別がなされる場合があった。今回、16SrRNA 部の特定DNAプローブを用いた<I>B.cereus</I>と<I>B.thuringiensis</I>の識別について検討を行った。
　
<ITEM2> \n検体名
 
<I>B.cereus</I>
　
<ITEM3>
 
農場、乳製品工場、牧場、食物から分離。　菌株保存機関(NIZO,ATCC)
　
 
<ITEM4> \n検査検体数
 
65　株
　
<ITEM5>
 
生化学分析　　ISO標準作業による生化学分析(グルコース発酵、窒素源資化能、VP反応)　DNA分離　TSA培地　30℃-18〜24hrにより培養、InstaGene Matrix で分離PCR/RAPD増幅　　無作為のプライマーR1　(GAAGCAGCGTGG)とR2　(GTCGTTATGCGGTA)を用い　Thermocycler 480により実施　16rRNA部配列P1　(GCGGCGTGCCTAATACATGC)と　P2　(ATCTACGCATTTCACCGCTAC)　プライマーにより増幅後ゲル電気泳動、PCR Product Prep Kitにより精製した。　特定DNAプローフﾞのハイブリッド形成　16rRNAのV1部増幅後ハイブリッド形成はプライマーP1　(GCG0GCGTGCCTAATACATGC)　と　P3　(TTCCCCACGCGTTACTCACC)　を用いた。ハイブリッド系背は形成はリン酸ナトリウム緩衝液(pH7.2)を使用した。
　
<ITEM6>
 
分離された20種は、従来からの生化学分析と今回の手法により解析したところ、従来法では、<I>B.cereus</I>と判断されていたものが16S　rRNAのV1部の特定DNAプローブを設計しPCR法による増幅でハイブリッド形成させることにより、<I>B.thuringiensis</I>であることが判明した。<I>B.cereus</I>と<I>B.thuringiensis</I>の16S　rRNAのV1部の特定DNAプローブを設計しPCR法による増幅でハイブリッド形成させることにより、両者を迅速に区別することが可能になった。
　
<ITEM7>
 
FEMS Microbiology Letters, 146, 47
　
<PUBMED>

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/htbin-post/Entrez/query?form=4&db=m&Term=FEMS Microbiology Letters, 146, 47
