文献番号：b-64
タイトル：Evaluation of the ISO 7932 standard for the enumeration of <I>Bacillus cereus</I> in foods
邦訳タイトル：食品中の<I>Bacillus cereus</I>計測のためのISO7932規格評価
著者：SCHULTEN S M, NAGELKERKE N J D, IN’T VELD P H,; SCOTTER S,DE BUYSER M L,
　　　 ROLLIER P, LAHELLEC C
誌名､発行年、巻号頁：International journal of Food Microbiology  (2000), <B>57</B>, (1/2), 53‐61 
菌種：2.<I>Bacillus cereus</I>
　
<ITEM1> \n調査の目的
 
種々の菌接種濃度で3種の食品タイプを用いて、<I>B. cereus</I>計測に対するISO 7932規格の精度を、併行再現性（r）と室間再現性（R）によって評価する。
　
<ITEM2> \n検体名
 
フレッシュチーズ、ミンチ牛肉、ジャガイモ粉末の3形態の食品に各々4レベル(0,E+3,E+4,E+5-E+6cfp/g)の<I>B. cereus</I>を接種したもの。
　
<ITEM3>
 
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<ITEM4> \n検査検体数
 
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<ITEM5>
 
1)試験のデザイン。欧州17カ国の19研究室と米国の1研究室が本共同研究に参加した。測定法は、3タイプの食品、すなわち乳製品群から（フレシュチーズ）、肉群から（牛ひき肉）、乾燥食品群（粉末ポテト）で検証した。各食品タイプごとに4つの接種レベル（高レベル：E+5-E+6cfp/g、中レベル：E+4 cfp/g、低レベル：E+3 cfp/g、ブランク：バックグランド菌そうのみを含む）を調整した。各参加研究室は各食品タイプごとに8つのサンプル（4接種レベルをブラインドで2連）を受け取る。さらに2つの対照試料（RMs、人為的に<I>B.cereus</I>を汚染させた粉乳入りカプセル）もトライアルに含めた。
2)テスト材料の調製。
  (1)チーズサンプル。液状に調製したチーズに低温性<I>B. cereus</I>BC5を接種する。他のバチルス属（B.licheniformis,<I>B.brevis</I>, <I>B.polymyxa</I>,B.circulans）と非バチルス種（<I>L.lactis</I>,<I>E.faecalis</I>,<I>L.plantarum</I>）をバックグランド菌そうとして、目的菌と同レベルに加える。接種したチーズは約100gのチーズを含むようにバイアルに分けた。接種フローラを安定させるため静菌混合物を加える。静菌剤の効果は、試験期間中に試料が希釈されると消失する。
  (2)肉サンプル。テスト材料は、凍結乾燥させた市販新鮮牛ひき肉を用い、10gづつに小分けしてバイアルに入れ、25kGyで照射した。<I>B. cereus</I> NCTC11143とバックグランド菌そう（肉の菌そうに似せる。1xE+4cfp/gの<I>B.subtilis</I>,1xE+6cfp/gのLactobaillus spp., 1xE+6cfp/gの<I>Micrococcus</I> spp., 1xE+4cfp/gの<I>Pseudomonas</I> spp.）を各バイアルに加える。再度凍結乾燥し、使用まで4℃で保存する。
  (3)乾燥ポテトサンプル。市販ポテト粉の自然汚染は一般細菌数4xE+4cfp/gとバチルス菌属数6xE+2cfp/gを有するバックグランドとして扱った。バチルス菌属の一部は<I>B. cereus</I>であったが、検出限界に近いものであったので、このポテトサンプルはコメント付で使用することが認められた。<I>B. cereus</I> NCTC11143をBHIで30℃で20時間培養する。ペプトン食塩液で1：100に希釈し、10 PEMBA平板に画線する。37℃で48時間培養後細胞と胞子を蒸留水に懸濁し12000rpmで遠心分離する。2回洗浄し、ペレット0.85％食塩水に再懸濁する。80℃で10分加熱し栄養細胞を殺す。胞子懸濁液は滅菌脱脂粉乳と乾燥する。この脱脂粉乳は<I>B. cereus</I>を2×107cfp/g含む。ポテト粉と混合して適当な汚染レベルにする。
　
<ITEM6>
 
菌の確認試験は硝酸還元試験、グルコース発酵試験、Voges Proskauer(VP)反応で行ったが、VP反応は多くの擬陽性が出た研究室が数箇所あったため、併行再現性や室間再現性はVPテストの結果を使用せずに計算した。 試験法の精度は、テスト試料中の<I>B. cereus</I>濃度や食品のタイプにより影響されなかった。食品試料の全体的併行再現性は0.29log10であり室間再現性は0.42log10であった。対照材料に対しては、併行再現性は0.11log10であり室間再現性は0.22log10であった。本共同研究結果はCENとISOに、食品に対する併行再現性と室間再現性の値を、<I>B. cereus</I>計測のCENおよびISO新規格に含めるよう推奨するものである。さらにグルコース発酵やVPテストはいくつかの試験室で信頼できないことがあったので、更に検討するよう忠告された。
　
<ITEM7>
 
International journal of Food Microbiology,  57, 53
　
<PUBMED>

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/htbin-post/Entrez/query?form=4&db=m&Term=International journal of Food Microbiology,  57, 53
