文献番号：b-4
タイトル：Isolation and identification of lipolytic, psychrotophic, spore forming bacteria
　　　　　from raw milk
邦訳タイトル：生牛乳からの脂肪分解性及び低温性で胞子形成する細菌の単離及び同定
著者：Matta H, Punj V
誌名､発行年、巻号頁：International Journal of Dairy Technology,　(1999), <B>52</B>, (2), 59-62
菌種：2.<I>Bacillus cereus</I>
　
<ITEM1> \n調査の目的
 
生牛乳に存在する耐熱性、脂肪分解性及び低温性の胞子形成細菌を分離同定し特徴付ける。
　
<ITEM2> \n検体名
 
Himachal Pradesh 農業大学実験工場から採取した100検体の生牛乳
　
<ITEM3>
 
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<ITEM4> \n検査検体数
 
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<ITEM5>
 
1) 菌の分離。全コロニー数(TCC)、低温性胞子数(PSC)及び脂肪分解性胞子数(LPSC)は採取4-5時間以内に推奨法で実施した。PSCとLPSC用の試料は、80℃で10分湯浴加熱後、適正濃度に希釈し、0.5%トリブチリンを加えたTDYAに塗布後、4℃で10日間培養した。トリブチリン寒天上の周囲の透明な不連続ゾーンを示すコロニーを脂肪分解性及び低温性の胞子形成細菌とみなした。純度とリパーゼ産生能を調べるためコロニーを選択した。　　
2) 酵素（リパーゼ）の分析。(1) 平板アッセイ。上記選択菌耳掻き一杯をTYEブロス10mlに接種し28℃で48時間培養する。500mlの同培地を500mlマイヤーフラスコに1%の割合で接種、旋回シェーカーで22℃で48時間培養する。7000rpmで20分遠心分離し、その上清の酵素活性を平板アッセイ（トリブチリン添加TDYA平板の直径4mmウェルに上清を20μl入れ22℃で48時間培養.した。ウェル周囲の透明ゾーン観察により活性を観察）で測定する。(2)滴定法。(1)の上清1mlを(25mlの水、10mlオリーブ油、1.0mlの0.2Mトリス塩酸緩衝液pH9.0の入った)100mlフラスコに入れ、37℃で4時間180rpm旋回シェーカーで培養後に、3.0mlの95%エタノールと4滴のチモールフタレイン指示液を加える。0.5N NaOHで滴定する。リパーゼ1ユニットは0.5N NaOH1.0ml当量として定義した。　
　
<ITEM6>
 
100検体中91%　が低温性、胞子形成性の細菌を含んでいた。100検体中48%が脂肪分解性、低温性、胞子形成性の細菌を含んでいた。 リパーゼ活性から選択した59検体の単離物のリパーゼ活性は8.5〜42unit/mlの範囲にあり、その41% は21〜25unit/mlの範囲であった。形態的、微生物学的特徴から59の脂肪分解性単離物を同定したところ、<I>B.cereus</I>が19、<I>B.polymyxa</I>が12、 <I>B. licheniformis</I>が10、<I>B.circulans</I>が7、<I>B.subtilis</I>が5 、<I>B.laterosporus</I>が4 、<I>B.coagulans</I>が7であり、セレウス菌が優勢な菌(32.2%)であった。 これら微生物が加熱処理を生き残る能力があり、かつ冷蔵保存中に増殖し、分解により脂肪を変化させることは、これら微生物が牛乳及び乳製品のシェルフライフを制限する重要な因子であることを示すものである。
　
<ITEM7>
 
International Journal of Dairy Technology, 52, 59
　
<PUBMED>

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/htbin-post/Entrez/query?form=4&db=m&Term=International Journal of Dairy Technology, 52, 59

<LIST1>

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