文献番号：b-22
タイトル：Bacilli in Milk. I. Spore Germination and Growth
邦訳タイトル：-
著者：Mikolajcik, E. M.
誌名､発行年、巻号頁：Journal of Dairy Science, (1968), <B>51</B>, (10), 1579-1582
菌種：2.<I>Bacillus cereus</I>
　
<ITEM1> \n調査の目的
 
未加熱脱脂乳、殺菌脱脂乳(62.8℃、30分)、高温殺菌脱脂乳(100℃、10分)及び滅菌脱脂乳(121℃、10分)を各々培地として使用し、<I>Bacillus cereus</I>の発芽、生育に及ぼす、芽胞の加熱処理(80℃12分)の影響を確認する。　未加熱脱脂乳、殺菌脱脂乳、高温殺菌脱脂乳及び滅菌脱脂乳を各々培地として用いて、対数増殖期にある<I>Bacillus cereus</I>の世代時間、世代数に及ぼす脱脂乳の熱処理の影響を確認する。
　
<ITEM2> \n検体名
 
<I>Bacillus cereus</I> 7
　
<ITEM3>
 
指標菌株：生乳より分離した<I>Bacillus cereus</I> 7をチオグリコレート培地にて保存　芽胞の調製：1.0%可溶性澱粉、0.01%MnSO4普通寒天培地上に塗抹し、35℃7日間培養して調製したものを未加熱芽胞とする。芽胞は0.01Mリン酸バッファー(pH7.2)で集菌後(2000×g)、同バッファーにて数回洗浄する。栄養細胞と細胞断片をパパイン処理にて除去し、再洗浄、集菌後、0.01Mリン酸バッファー(pH6.8)にて懸濁し、未加熱芽胞とする。未加熱芽胞は使用時まで0〜4℃にて保存。　加熱処理芽胞の調整：未加熱芽胞を80℃12分間熱処理して調製する。　対数増殖期細胞：加熱処理芽胞を変法G培地(酵母エキスを0.2%カザミノ酸で置換)にて3回植え継ぎ35℃で合計8時間培養し、芽胞を5xE+6/ml中30/ml以下とする。対数増殖期細胞は調製後すぐ使用する。　未加熱脱脂乳処理：未加熱脱脂乳は高品質の脱脂乳を滅菌ザイツフィルター(1.0μmで処理後、0.45μm処理)で処理して調製する。フィルター処理した脱脂乳は抗生物質検査を実施して試験培地とする。
　
<ITEM4> \n検査検体数
 
20
　
<ITEM5>
 
発芽率：未加熱芽胞、或いは加熱処理芽胞を各種脱脂乳にてE+4/mlとし、35℃で時間を変えて一定時間培養後、0.1%の可溶性澱粉を添加した標準寒天培地にて35℃20-24時間培養し総菌数を測定する。総菌数と芽胞数の差を増殖期細胞数とする。
　
<ITEM6>
 
未加熱芽胞を各種脱脂乳中で2時間培養後の発芽率は、殺菌脱脂乳で90%、高温殺菌脱脂乳で65%、滅菌脱脂乳で16%、未加熱脱脂乳で27%となる。さらに2時間培養後の発芽率は、滅菌脱脂乳で38%となる。しかしながら滅菌脱脂乳、未加熱脱脂乳では培養時間を増加させても殺菌脱脂乳、高温殺菌脱脂乳の発芽率のレベルへは到達しない。　加熱芽胞を各種脱脂乳中で2時間培養後の発芽率は、殺菌脱脂乳で99.5%、高温殺菌脱脂乳で95%、滅菌脱脂乳で84%、未加熱脱脂乳で68%となる。芽胞を加熱することにより発芽率は増加し、また、脱脂乳の加熱処理は発芽率を高めるように作用する。　未加熱芽胞E+4/mlが栄養細胞E+5/mlになる時間は、殺菌脱脂乳で129分、高温殺菌脱脂乳で192分、滅菌脱脂乳で207分、未加熱脱脂乳で355分となる。　加熱芽胞E+4/mlが栄養細胞E+5/mlになる時間は、殺菌脱脂乳で124分、高温殺菌脱脂乳で148分、滅菌脱脂乳で165分、未加熱脱脂乳で234分となる。加熱芽胞E+4/mlが栄養細胞E+5/mlになる時間は、未加熱芽胞のそれと比較して5分(殺菌脱脂乳)から121分(未加熱脱脂乳)の範囲で減少している。これらの結果は、脱脂乳の加熱処理よりも芽胞の加熱処理の方が発芽率とその後の生育速度に及ぼす影響が大きいことを示している。　世代数と世代時間を決定するために、芽胞を含まない対数増殖期の栄養細胞を各種脱脂乳中、35℃で培養した。殺菌脱脂乳、高温殺菌脱脂乳に比べ、未加熱脱脂乳は培養後30分までは世代数が少なく、世代時間が長い。培養時間が60分を超えると、これらの差は認められない。脱脂乳の熱処理は培養初期の分裂速度に影響を与える。
　
<ITEM7>
 
Journal of Dairy Science, 51, 1579
　
<PUBMED>

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/htbin-post/Entrez/query?form=4&db=m&Term=Journal of Dairy Science, 51, 1579
