文献番号：b-10
タイトル：Membrane filtration method for enumeration and isolation of <I>Bacillus cereus</I> from milk
邦訳タイトル：-
著者：Christiansson A.
誌名､発行年、巻号頁：International Dairy Journal，(1997)，<B>7</B>, 743-748
菌種：2.<I>Bacillus cereus</I>
　
<ITEM1> \n調査の目的
 
生乳中に汚染するセレウス菌の芽胞を定量的に検出するための試験法を検討した。
　
<ITEM2> \n検体名
 
芽胞を接種した生乳を用いた。<I>B.cereus</I>の菌株は、①中温性で芽胞の発芽が遅い菌株2株、②中温性で芽胞の発芽が早い菌株2株、③芽胞の発芽の早い低温性の菌株4株を用いた。
芽胞形成条件：5mg/l　MnSO4・H2O添加　nutrient agarを用いて30℃5日間培養
　
<ITEM3>
 
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<ITEM4> \n検査検体数
 
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<ITEM5>
 
・条件検討した検査法：　試料を熱処理して芽胞のみを生存させた後、Triton X-100とトリプシンを加え55℃15mの条件で加温する。試料を0.8μmフィルターで濾過した後に培地上に置き培養する。コロニー数から芽胞数の測定を行う。本報告では、各処理条件の検討を行った。
・MPN法：　10，1，0.1mlの試料を煮沸スキムミルクで10mlとして72℃5m熱処理後、20℃24時間培養した。培養液1滴をblood agarに接種してその陽性率を判定することにより行った。　　　　　　　　　　　　　　　　　
　
<ITEM6>
 
①試料の濾過条件の検討：　トリプシン、Triton X-100の両者とも芽胞数に悪影響を与えることは無かった。トリプシン濃度は、最終濃度で0.11%、0.22%、0.33%の条件の比較を行った。その結果0.22～0.33%の条件の方が濾過量が上がった。最終的に100～250mlの生乳の濾過が可能となった。　
②培地の検討：　MYP培地、PEMBA培地、ポリミキシン添加blood agarを比較したところ、blood agarが最も判定に適していた。　
③培養温度の検討：　8℃，15℃/4d，20℃/48h，30℃/24hを比較したところ、低温性、中温性細菌の両方の生育が20℃において最も良かった。培養時間は2日で行うとさらに低温性の菌株の生育が良かった。また20℃で培養を行った場合は、溶血反応を示すセレウス菌以外の<I>Bacillus</I>属菌の生育が抑制され、判定が容易となった。試験法には20℃48hの条件を採用した。　
④熱処理の検討：　80℃10分,75℃15分,72℃5分の比較を行った。低温性の菌株の芽胞は熱に弱い結果となったために、熱処理の条件は72℃5分とした。また72℃5分の処理ではフィルターの濾過性も優れていた。　
⑤添加回収試験：　生乳に芽胞を添加したものを当試験法で計測し、回収率を調べた。2回の試験の結果、回収率の平均は85％、55％であった。回収率の菌種による違いは見出されなかった。   
⑥MPN法との比較：　芽胞を添加した生乳を用いて当方法とMPN法の比較を行った。両方法には相関があった（r=0.75)。MPN法のほうが当方法より芽胞数が高くなる傾向があった。しかし、結果のばらつきが少ないことから、定量性は当方法が高いと考えられる。　　　　
　
<ITEM7>
 
International Dairy Journal，7，743
　
<PUBMED>

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/htbin-post/Entrez/query?form=4&db=m&Term=International Dairy Journal，7，743
