文献番号：b-71
タイトル：Surface characteristics of <I>Bacillus cereus</I> and its adhesion to stainless steel
邦訳タイトル：セレウス菌の表面特性とステンレス鋼への付着
著者：Peng J S, Chou C C, Tsai W C
誌名､発行年、巻号頁：International Journal of Food Microbiology 　(2001), <B>65</B>, (1/2), 105-111
菌種：2.<I>Bacillus cereus</I>
　
<ITEM1> \n調査の目的
 
セレウス菌の表面特性とステンレス鋼への付着の関係を調べる。
　
<ITEM2> \n検体名
 
B.certeus株は腐敗乳起源でFood Industry Research and Development Instituteより入手した。胞子形態で保存(グリセロール:TSB培地1:1 v/v中、-18℃)
　
<ITEM3>
 
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<ITEM4> \n検査検体数
 
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<ITEM5>
 
1)栄養細胞の培養。B.certeus保存株をTBS培地で30℃16時間培養を2度繰り返す。培養物を希釈TBS培地で30℃、振とう培養(10,24,48時間)する。栄養細胞を4000xgで 10分間遠心分離で集める。0.85%食塩水で洗浄後PBSに再懸濁する。E+8/mlに濃度調整し以後の試験に供す。
2)胞子の調製。
  (1)B.certeus栄養細胞を4種の胞子形成培地に接種し、30℃で10～18日間培養する。①10ppmMn2+含有TGEA②15%寒天を含む固体化DTSB寒天(DTSA)③1%スクロース添加DTSA(DSSA)④1%乳糖添加DTSA(DLSA)。
  (2)寒天表面より胞子集め食塩水で6回洗浄する。胞子懸濁液を80℃で10分間加熱する。PBS洗浄と遠心分離を繰り返し後、E+8/mlに再懸濁し試験に供す。
3)ステンレス鋼チップへの付着
  (1)ステンレス鋼チップ(304型、2x2cm)はあらかじめエタノール・アセトン混液で浸漬、苛性ソーダ浸漬等で洗浄後、70mlRO水を含む血清瓶中で121℃、15分オートクレーブする。
  (2)栄養細胞及び胞子の懸濁液(E+8CFU/ml)5mlを70mlのPBS,HTST全乳or 1000倍希釈HTST全乳を入れた血清瓶に入れる。 
  (3)滅菌ステンレス鋼チップを入れ、30℃1時間、150rpmで浸とう培養する(4)チップを食塩水ですすぎ後10ml食塩水含む試験管に移し、綿棒でこそぎ落とし、食塩水中の細胞数を計数。
4)栄養細胞と胞子の表面特性の測定。細胞の表面疎水性度を疎水性相互作用クロマトグラフィー(HIC)と静電相互作用クロマトグラフィー(ESIC)で測定する。
  (1)  カラム調製。HICカラム：グラスウールで栓をした5mmφパスツールピペットにオクチルセファロースCL-4BとPBS1:1(v/v)混合物をゲル高70mmに詰める。コントロールはセファロースCL-4Bをパックした。ESICカラム：カチオン樹脂はDEAEセファロースCL6B、アニオン樹脂はCMセファロースCL6B。
  (2)測定。約E+8cfuの細胞又は胞子懸濁液をカラムにのせ、10分の接触後12mlのPBSで流出させる。イニシャルの細胞懸濁液及び流出液の細菌数を計数する。相対疎水度(g/e)はオクチルセファロースCL-4Bカラム(g)結合細菌数をセファロースCL-4Bコントロールカラム(e)から流出したもので割って求めた。相対表面荷電はr/eで表す。r : ESICカラムに保持された細菌数。e :流出液の細菌数。
　
<ITEM6>
 
B.certeusのステンレス鋼への付着は、対数増殖期を通じて低く、定常増殖期に入ると明白に増加した。  B.certeusの表面疎水度は後期定常増殖期が最も高く、次に定常増殖期、対数増殖期となった。栄養細胞の表面荷電は定常増殖期の細胞が最も高く、対数増殖期の細胞が最も低かった。種々の生育期の B.certeusのステンレス鋼への付着は表面疎水性と高い正相関性があった。(R=0.979)。胞子の表面疎水度はDTSA培地とTGEA培地のものが、DLSAとDSSA培地に比べて有意に高かったが、ステンレス鋼への胞子付着数に有意な差はなかった。胞子の表面荷電も上記培地間で広い変動が認められたが、ステンレス鋼への付着数に有意な差はなかった。対数増殖期の栄養細胞は3種の懸濁溶媒(PBS,牛乳、希釈牛乳)中ともステンレス鋼に付着しなかった。一方、後期定常増殖期の栄養細胞および胞子の付着数は、3種の懸濁溶媒で有意差がなかった。
　
<ITEM7>
 
International  Journal of Food Microbiology, 65, 105
　
<PUBMED>

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/htbin-post/Entrez/query?form=4&db=m&Term=International  Journal of Food Microbiology, 65, 105

<LIST1>

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