文献番号:P-5
タイトル：Direct 24-hour presumptive enumeration of <I>Escherichia coli</I> O157:H7 in foods using 
          hydrophobic grid membrane filter followed by serological confirmation: collaborarive 
          study
筆頭著者：Entis,P.
論文，年，Vol，頁（〜）：Journal of AOAC International, 1998, 81, 403-418
調査地　：検査法
 
<ITEM1> \n調査の目的
 
　疎水性網子膜フィルター(Hydrophobic Grid Membrane Filter; ISO-GLID)を用いた大腸菌O157:H7検査法を評価するため、<I>E.coli</I> O157:H7を高濃度（500cfu/g）、中濃度（200cfu/g）および低濃度（50cfu/g）接種した6種類の食品を対象に15機関の検査室間でその方法について検討した。
 
<ITEM2> \n検体名
 
1. 殺菌アップルサイダー　2. 殺菌2%ミルク　3. カッテージチーズ 4. 生挽肉　5. 調理挽肉　6.  冷凍全卵  
 
<ITEM3>
 
　各検体はバルク単位に菌接種され、サンプルバッグに小分け後シールして冷蔵（アップルサイダー、ミルクおよびチーズ）もしくは冷凍（挽肉および卵）された。競合菌として<I>E.coli</I>、<I>E.hermanii</I>および<I>Hafnia alvei</I>のプールした菌液も500cfu/g接種した。
　各菌濃度につき、菌未接種および盲検検体を含む8検体を各検査機関へ送付した。
 
<ITEM4>
 
<I>E.coli</I> O157:H7
 
<ITEM5>
 
　SD-39培地上のISO-GLIDに発育した集落数をMPN の換算してFDAのBAMによる公定法と比較した。
 
　各検体10g(ml)の10倍希釈液を接種したフィルターのSD-39寒天を44?44.5℃/24h培養（冷凍全卵はTSAで36℃4?5h前培養を実施）。希釈はPeptone、PT(0.1%peptone+　1.0%Tween 80)およびそれらにamyloglucosidase、alkaline protease、Papain、cellulaseを加えた希釈液で行った。						 
　公定法では、Butterfield's phosphate bufferで希釈した検体を3濃度3本法のMPNを実施した。1mlをmTSBで35〜37℃/18〜24h増菌後、HC寒天で43℃/18〜24h培養した。
 
<ITEM6>
 
　培地上の集落からO157陽性と判定された割合は、冷凍全卵の85%を除き、いずれの食品も90%より大きかった。これら陽性と推定された検体の生化学性状検査でO157が分離された割合は、いずれの食品も96%以上、全体で98%であった。また、各食品ごとにISO-GLID法と公定法による検出菌数を比較した結果、アップルジュース、カッテージチーズでは差はなく、ミルク、調理済み豚肉、生牛挽肉および冷凍全卵ではISO-GLID法の方が菌数が多かった。
 
<ITEM7>
 
Journal of AOAC International,  81, 403
 
<PUBMED>

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/htbin-post/Entrez/query?form=4&db=m&Term=Journal of AOAC International,  81, 403
