文献番号:D-83
タイトル：模擬卵洗浄水での<I>Listeria monocytogenes</I> と Salmonella typhimuriumの不活性化 
　　　　　モデル
筆頭著者：K.Leclair　
論文，年，Vol，頁（〜）：Food Microbiology, 1994, 11, 345-353
調査地：農場
 
<ITEM1> \n調査の目的
 
合成卵洗浄液における<I>Listeria monocytogenes</I> スコットAとS. typhimurium の不活性化について温度（38℃から46℃まで）,卵固体（0％，2％）,ph（9.5から10.5まで）と様々な塩素濃度（0から10 ppm）条件下で研究した。
 
<ITEM2> \n検体名
 
 
<ITEM3>
 
品種と培養条件
<I>Listeria monocytogenes</I> ScottAとS. typhimuriumNal＋ はCFARから分与を受けたそして0.6％（w/ v）の酵母ｴｷｽ含有のトリプトソイ寒天培地上で4℃を維持していた<I>Listeria monocytogenes</I> とS. Typhimuriumは30℃と35℃それぞれ18から24時間0.6％（w/ v）の酵母ｴｷｽ含有のトリプトソイ寒天培地上で培養した。
 
合成の洗浄水の準備
卵懸濁液はすべて［2％（v / v）］殺菌した蒸留水で作った。
そしてストマッカーを使って均質化した（研究室 Blender 400，Seward，Medical ，ロンドン， UK ）。
懸濁液は滴定によって必要とされるpH（9.5，10，あるいは lO.5 ）にKlenzade洗剤1％溶液により調整された。 (Klenzade Products, Division of Economics Lab Inc．，Beloit，WI，USA）
Klenzade 溶液は O.45μmNalgeneフィルターを使うろ過滅菌だった。
pHはモデル51pH計（放射計，コペンハーゲン，デンマーク）で測られた。
塩素が必要な場合，次亜塩素酸カルシウムの1OOOμgml-1溶液を殺菌した蒸留水で溶かした塩素から作った。（Canadian Tire Corporation，Toronto，Canada）これは細胞接種の前に人口洗浄水に加えた。
 
生存研究
人工の洗浄水懸濁液が1ミリリットルについて107のコロニー形成単位の最初のコロニー(cfu ml-1）を作り出すために　それから<I>L．monocytogenes</I> あるいは S.typhimurium が接種されて循環油浴，で 38C ， 42C ，あるいは 46C に定められた。
洗浄水の温度は連続的にデジタル温度計(Beckman Industial 450 Emerson Electrico.,San Diego CA)を使ってモニターされた。生育可能な細胞を適切な希釈にめっきをして普及によって時折列挙されたTSAYE ．の上に重複で洗浄水の［ 準備した0.1の％（w / v）ペプトン水］プレートは 30℃(<I>L.monocytogenes</I>）又は35℃（S. typhimurium） で48時間培養され、cfu ml-1 はケベックカウンターを使って決定した(American Optical Co．，Model Buffalo 15）
 
塩素決定
1ミリリットルのアリコットを2.0Mの酢酸塩緩衝液（ ph 4.0）と5.0％（w / v）ヨウ化カリウム溶液を洗浄水100mlに加えることによって、洗浄水の最初の塩素濃度が決定された。
2分の後に、塩素が塩素溶接棒がある（Orion，Boston，MA，USA)pH計を使って測られた。（Accumet 925 pH ion meter，Fisher Scientific，Ottowa，Ontario，Canada）電極は 1and 10の ug ml-1 塩素標準溶液を使って2ポイントの目盛を定めることにより標準化された。スタンダードを読みとるためミリボルト (mV）を塩素濃度の対数に対して記入した。そして、製造業者によって記述されるように、テストサンプルでの塩素濃度は図表から決定された。
 
<ITEM4>
 
不明
 
<ITEM5>
 
実験計画法とデータ解析
さらに4つのセンターと一緒の4つの因数のためのフルの階乗（24）デザインがポイントする（17から20まで；表1を走る）STATGRAPHICS プラス（ Manugistics， Rockport 、MD、 USA ）から診断設計手順を使って建設された。
量的なファクターとして温度、pHと塩素が考慮に入れられた。一方、卵が絶対的なファクターとして取り扱われた。
因子の1つが断定的であったときから、フルの反応表面デザインを使用することは可能じゃなかった。
それで二次の効果は決まった。設計のために可変的な反応は、実行可能なログ時間で、4ログの還元のために必要とされる時間の対数だった。
それは線形曲線の線形部分の線形回帰によって決定した。
そのスクリーニングデザインは重要な1番目と2番目がオーダー干渉すると決定するために使われ、そして多数の回帰分析を係数を得るために使用した。
 
<ITEM6>
 
結果
各塩素濃度(0，2.5，5.0，10ppm)における卵洗浄水（ 38℃/PH9.5）での S.typhimurium (10E6)の残存試験では、
0および2.5ppmでは顕著な減少は見られなかったが、5.0ppm4分間処理で10E1の減少が、10ppm1分間で10E6の減少があった。
各塩素濃度(0，5，10、20ppm)における卵洗浄水（ 38℃/PH9.5）での <I>L.monocytogenes</I> (10E(6-7))
の残存試験では、各4分間処理で(0，10E(1-2)、10E(3-4)、10E(6-7))の減少が見られた。

表1 <I>L.monocytogenes</I> と S.typhimuriumが生存した洗浄水の温度，pH，塩素と卵固体容量の影響を評価するための実験計画（24）。
表2 <I>L.monocytogenes</I>が残存した卵洗浄液状態の影響変動に対する分析値
表3 S.typhimuriumが残存した卵洗浄液状態の影響変動に対する分析値
表4 単体又は温度，ph，塩素と卵の相互作用での<I>L.monocytogenes</I> とS.typhimuriumの回帰に対する同等の影響
表5 <I>L.monocytogenes</I> と S.typhimuriumの残存を減らす卵洗浄水の最大限の活用

現在の結果は<I>L．monocytogenes</I> と S.typhimurium が特に卵が入った卵洗浄水溶液組成の変更に対して、異なった応答を示す。それで卵が入った洗浄水でこれらの2つの病原体を排除する環境状態の1つのセットを確証することは（今まで）この研究で可能じゃなかった。温度増加、pHと塩素の上に同じく実用的な限界がある。というのは過激な条件が卵の構造あるいは溶剤に影響を与えるかもしれない。しかしながら，30分以内に<I>L．monocytogenes</I> とS. typhimurium の生存を減らす条件を作ることは可能だ。卵固体がない新しい洗浄水で，温度，pHと塩素添加により制御した病原体を低く保つことができる。
長い時間にわたって卵固体で、必然的に汚染されたようになるリサイクルされた洗浄水が温度とpHの重要な増加がこれらの2つの病原体を排除するだろう。これらの計算で使われた方程式は請求次第ロータススプレッドシートで利用可能だ。
 
<ITEM7>
 
Food Microbiology, 11, 345
 
<PUBMED>

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/htbin-post/Entrez/query?form=4&db=m&Term=Food Microbiology, 11, 345

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