文献番号:D-41
タイトル：Rapid detection of stressed Salmonella sp. In dairy and egg products using
　　　　　 immunomagnetic separation and PCR						
筆頭著者：Nancy Rijpens
論文，年，Vol，頁（～）：International Journal of Food Microbiology, 1999, 46, 37-44
調査地　：検査法
 
<ITEM1> \n調査の目的
 
(1)乳製品，卵製品から免疫磁気ビーズとPCRを使って，迅速にSalmonella sp.を検出する．
 
(2)乳製品，卵製品から免疫磁気ビーズとフィルターで濃縮しPCRを使って，迅速にSalmonella sp.を検出する．
 
<ITEM2> \n検体名
 
(1)アイスクリーム，殺菌卵黄，卵黄粉，チーズ，粉乳，原乳チーズ，全卵、卵白						
 
<ITEM3>
 
(1)乳製品及び卵製品25g
 
(2)S.enteritidis LMG10395のST11-ST15増幅産物から，ST11，ST15プライマーに相補的配列を持つ240bpの内部コントールを作成する．
 
<ITEM4>
 
(1)S.typhimurium，S.panama						
						

(2)S.enteritidis LMG10395
 
<ITEM5>
 
(1)
①食品25gを200mLのbuffered peptone water(一部の全卵と卵白にはクエン酸鉄アンモニウムを添加）に入れ2分間ストマッカーにかけたものに，25mL beffered paptone waterにSalmonellaを接種し，30分間，37℃に置いたものを加え16時間37℃培養する．
②従来の検出法：前培養の0.1mLをrappaport-vassiliadis broth 9.9mLに加え，42℃で培養し，24時間目と48時間目にXLD培地に塗抹，コロニーをPCRで確認．
  迅速法A：前培養液からDynabeads anti-Salmonella又はWhatman No.4で処理し，PCRでSalmonellaを確認．
  迅速法B：前培養液からDynabeads anti-Salmonellaで濃縮したものを，1mL rappaport-vassiliadis brothで42℃，4時間培養後，13000g，5分間遠心した沈渣からPCRでSalmonellaを確認．
						
(2)
反応液に内部コントロールを入れてPCRを行った．						
 
<ITEM6>
 
(1)
アイスクリーム，殺菌卵黄，卵黄粉，粉乳，殺菌乳のチーズは，迅速法Aですべての検体からS.panamaが検出された．迅速法Aでは原乳のチーズから70%しか検出出来なかった．迅速法Bで原乳チーズ全てからSalmonella sp.を検出出来た．迅速法Bによる粉乳のPCR増幅産物は迅速法Aよりも強い．全卵と卵白は従来法でSalmonellaを検出することが出来なかった．鉄添加buffered peptone waterを用いることにより全卵，卵白からSalmonellaを検出することが出来た．
　
(2)
125fgの内部コントロールを含む反応液でPCRをしたところ，102?104 CFU/反応の濃度のSalmonellaが存在する時，429bpと240bpの両方が増幅された．検体によって内部コントロールの至適濃度は異なった．
 
<ITEM7>
 
International Journal of Food Microbiology, 46, 37						
 
<PUBMED>

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/htbin-post/Entrez/query?form=4&db=m&Term=International Journal of Food Microbiology, 46, 37	