文献番号：s-29
タイトル：Growth and enterotoxin production of <I>Staphylococcus aureus</I> during the manufacture
　　　　　and ripening of camembert-type cheeses from raw goat's milk
邦訳タイトル：生山羊乳からのカマンベール型チーズの製造及び熟成中におけるS. aureusの増殖と
　　　　　　　エンテロトキシンの産生
著者：Meyrand A; Boutrand-Loei S; Ray-Gueniot S; Mazuy C; Gaspard CE;
　　　Jaubert G; Perrin G; Lapeyre C; Vernozy-Rozand C
誌名､発行年、巻号頁：Journal of applied microbiology 　(1998), <B>85</B>, (3) p537-544, Sep ,
菌種：1.<I>Staphylococcus aureus</I>
　
<ITEM1> \n調査の目的
 
実験室で製造した生山羊乳カマンベールタイプチーズの製造及び熟成工程における<I>Staphylococcus aureus</I>の増殖とエンテロトキシンAの産生を測定する。
　
<ITEM2> \n検体名
 
-
　
<ITEM3>
 
-
　
 
<ITEM4> \n検査検体数
 
 
　
<ITEM5>
 
1)S. aureus株。S. aureus　4890　1A株：チーズから分離されエンテロトキシンAを≧1000ng/mlと痕跡程度のB, C,Dを産生する。
2)スターターカルチャー。<I>L.lactis</I> subsp. Lactis(40%)、<I>L.lactis</I> subsp. Cremoris(35%)、<I>L.lactis</I> subsp.<I>lactis</I> biovar.<I>diacetylactis</I>(20%)、<I>L.mesenteroides</I> subsp.<I>cremoris</I>(5%)、<I>S.salivarius</I> subsp.<I>thermophilus</I>。
3)熟成カルチャー。P. candidum とG. candidum。
4)チーズの製造。280のカマンベールタイプチーズを製造する。10バッチのチーズを製造する。1バッチ60Lの山羊乳を34℃に加温する。30Lの乳に所定濃度のブドウ球菌懸濁液2ml接種、他の30Lは接種せずコントロールチーズとする。S. aureusの接種レベルは、E+2、E+3、E+4、E+5、E+6cfu/ml乳とし、各2バッチずつ製造する。スターターカルチャーと熟成カルチャーは最終濃度15U/100L, レンネットは最終濃度30ml/100Lに加える。以下チーズ製法は略。
5)菌数の計測。以下の360サンプルについて調べた。(1)菌を接種した生乳。(2)レンネット、乳酸菌スターター、熟成スターター添加後の乳(45分)。　(3)カッチング後のカード(1時間50分)。(4)ホエー排除開始時のカード(2時間15分)。(5)ホエー排除終了時のカード(5時間15分)。(5)ホエー排除終了時のホエー(5時間15分)。(6)加塩前のチーズ（22時間）。(7)加塩中のチーズ（22時間15分）。(7)加塩後のチーズ（6日）。(8)包装後のチーズ(13日及び熟成20、27、34、41日)。チーズの内部と表面は分けて計測した。10g試料を90mlのトリプトン溶液に加え、ストマッカーで3分ホモゲナイズした。10倍段階希釈をつくり平板計数寒天に塗沫し30℃で72時間培養後、好気性中温菌数（AMPC）を測定する。S. aureusの数は上述のようにして測定する。平板は37℃48時間培養しコロニーを数える。
6)エンテロトキシンの測定。(1) 試料調製。チーズ20gを40mlの蒸留水に加え、ホモゲナイズしpHを4にあわせる。4℃、2000gで15分遠心分離する。上清をpH6-8に調製後に遠心分離し、2mlろ過する。30％のポリエチレングリコールに対して、4℃で一夜透析する。透析袋を冷水で洗浄後PBSに入れて濃縮抽出物が1mlになるまで保持する。(2)VidasSET。エンテロトキシンの検出はVidas Staph Enterotoxin Test(SET)により行い、結果は相対蛍光値（RFV）で示した。(3) Lapeyre試験。エンテロトキシン存在の確認はLapeyreらの定量的定性的間接ダブルサンドイッチELISA法で行った。
　
<ITEM6>
 
 製造工程がS. aureusの増殖に及ぼす影響は有意（P＜0.0001）であった。（一般に微生物はカードに濃縮されチーズが加塩されるまで菌数が増加する。加塩後、熟成期間中菌数レベルは安定しているか緩やかに減少する）。本実験においても、S. aureus数は22時間で最高にまで増殖し、41日後には1log減少した。ブドウ球菌の数はチーズ内部と表面とで有意差はなかった。回収されたエンテロトキシンAのレベルは、初期の菌数がE+3-E+6cfu/ml乳で作ったチーズで、1から3.2ng/gで変化した。最も低いS. aureus接種（E+2cfu/ml）のチーズにはエンテロトキシンAは検出されなかった。
　
<ITEM7>
 
Journal of applied microbiology, 85, 537
　
<PUBMED>

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/htbin-post/Entrez/query?form=4&db=m&Term=Journal of applied microbiology, 85, 537

<LIST1>

s-29-1.gif

<LIST2>

s-29-2.gif
