文献番号：s-97
タイトル：Effect of milk proteins on adhesion of bacteria to stainless steel surfaces
邦訳タイトル：細菌のｽﾃﾝﾚｽ鋼表面への接着に及ぼす乳蛋白質の影響
著者：BARNES L‐M, LO M F, ADAMS M R, CHAMBERLA IN A H L
誌名､発行年、巻号頁：Applied and Environmental Microbiology　 (1999), <B>65</B>, (10), 4543‐4548
菌種：1.<I>Staphylococcus aureus</I>
　
<ITEM1> \n調査の目的
 
予め吸着した脱脂乳やその主な構成蛋白質が、細菌のステンレス鋼表面への付着に及ぼす影響を調べる。
　
<ITEM2> \n検体名
 
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<ITEM4> \n検査検体数
 
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<ITEM5>
 
1)菌の保存と増殖法。<I>S.aureus</I> USCC1500、<I>L.monocytogenes</I> N6861、<I>S.marcescens</I> USCC2156、<I>E.coli</I> USCC2879、<I>P.fragi</I>,　NCIMB11082は、プラスチックビーズで-70℃で保管した。培養物調製：ビーズを250mlコニカルフラスコ中50mlの栄養ブロスに入れ、25℃170rpmで一夜培養→培養物をE+3CFU/mlになるよう第2の栄養ブロスに摂取→同一条件で求める増殖期に達するまで培養した。
2)ステンレス鋼片の脱脂乳処理：清浄化したステンレス試料をビーカー内に水平に置く、5mlのUHT脱脂乳（あるいは希釈脱脂乳）を入れ、40rpmで廻しながら20℃で2時間で付着させる。10mlの滅菌RO水で2回すすぐ。個々の乳蛋白構成蛋白質についても同上の処理法で行った。
3)菌の付着：初期定常期の培養物を900gで15分室温で遠心分離し、1/4滅菌リンゲル液に再懸濁、この洗浄操作を2回繰り返す。最終的に1/4滅菌リンゲル液に再懸濁しE+8CFU/mlに調整した。本菌懸濁液10mlを滅菌ボトルに垂直に置いたステンレス鋼試料に加え、20℃で2時間静置後、試料を取り出し1/4滅菌リンゲル液で2回すすぐ。蛋白処理試料あるいは非処理試料とも付着は3連で実施した。
4)着菌数の計測：ステンレス鋼試料を10mlの0.0025%アクリジンオレンジ溶液に入れ30分染色後、10mlのRO水で2回すすぎ風乾し、Leitz Dialux20蛍光顕微鏡で計数した。5) 乳付着ステンレス鋼のXPS（X線光電子分光）分析：VGS 5000Sデータシステムと接続したVG ESCALAB Mk.Ⅱ分光計を使用した。6)表面の粗さの測定：共焦点レーザー走査顕微鏡(CLSM)でRa値を測定した。
　
<ITEM6>
 
脱脂乳で前処理したステンレス鋼片は、<I>S.aureus</I>,<I>L.monocytogenes</I>及び<I>S.marcescens</I>の付着を減少させた。<I>P.fragi</I>と<I>E.coli</I>は清浄表面、前処理表面ともわずかしか付着しなかった。<I>S.aureus</I>の清浄表面への付着は菌懸濁溶媒のイオン強度に依存し、RO水では1/4リンゲル液での付着の1%以下であった。希釈脱脂乳で前処理した場合、<I>S.aureus</I>の付着は脱脂乳濃度が10%、1%までは変わらなかったが、0.1%から急激に増加した。付着した細菌数は表面のXPS分析による相対的窒素原子割合に逆相関した｡磨いたステンレス表面への<I>S.aureus</I>の付着数は、よりラフな2B仕上げ表面より29%少なかった。<I>L.monocytogenes</I>は少数しか付着せず、両表面で差はなかった。
　
<ITEM7>
 
Applied and Environmental Microbiology, 65, 4543
　
<PUBMED>

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/htbin-post/Entrez/query?form=4&db=m&Term=Applied and Environmental Microbiology, 65, 4543

