文献番号：s-71
タイトル：A novel ELISA format for the rapid and sensitive detection of Staphylococcal
　　　　　enterotoxin A
邦訳タイトル：<I>Staphylococcus</I>のエンテロトキシンAの迅速、鋭敏な検知のための
　　　　　　　新規ELISA法
著者：Giletto A, Fyffe J G
誌名､発行年、巻号頁：Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry 　（1998）, <B>62</B>, (11), 2217-2222
菌種：1.<I>Staphylococcus aureus</I>
　
<ITEM1> \n調査の目的
 
迅速かつ鋭敏でディスポーザル、最終的には複数エンテロトキシンの同時検出及び同定を可能にする新規なELISA方法を開発する
　
<ITEM2> \n検体名
 
<I>Staphylococcus</I>のエンテロトキシンA(SEA)を添加したハム、鶏肉、チーズ、もやし
　
<ITEM3>
 
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<ITEM4>　\n検査検体数
 
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<ITEM5>
 
1)微小球の捕捉抗体によるコーティング。500mgのポリスチレン微小球を50mlコニカル遠心細管に入れる。20mlの0.1M Na-borate,pH8.5を加え、分散後に4000rpmで5分間遠心分離し微小球をペレット化する。20mlの0.1M Na-borate,pH8.5で洗う（もう2サイクル）。洗浄ペレットを20mlの0.1M Na-borate,pH8.5に戻し、蒸留水に溶かした0.4mgの抗-SE IgGを加え、室温でゆっくりした攪拌で、一夜インキュベートして抗体を微小球表面に吸着させる。遠心分離で微小球をペレット化し、次いで20mlの10mg/ml　BSA溶液（0.1M Na-borate,pH8.5）中に再懸濁し、室温で30分間インキュベートによりブロックする。 同様の方式を用いて、微小球を正常羊IgGあるいはBSAでコーティングし、ネガティブコントロールとしてMPC法に使用する。
2)微小球のガラス細管への充填。内径1.8mm外径3.0mm長さ6cmのパイレックスガラス管に綿を詰め栓をする。200μlの50mg/ml正常IgGコーティングされた微小球を細管に詰める（ネガティブコントロール部分）。200μlの50mg/ml抗SEAコーティング微小球を詰める（テスト領域）。200μlの正常IgGコーティング微小球を再度詰め綿栓する。細管の構成は①綿栓②ネガティブコントロール部③テスト部④ネガティブコントロール部⑤綿栓となる。
3)MPC(microsphere-packed capilllary)中でのELISA。試料200μlを入れ2分保持する。10mM PBS/0.05% Tween 200μlで洗う。1：200希釈の抗SEAIgG/HRPコンジュゲート200μlを加え、2分保持する。PBSTweenで洗浄後、ME/DABあるいはTMBを200μl加える。数秒以内に発色する。結果はスキャナーで測定した。4)食品のスパイク（SEAの添加）。10gのハム、チーズ、鶏肉に10ngSEA/100μlPBSを加え、室温で1時間放置する。等量のPBSを加えブレンダーで液化する。4000rpmで遠心分離し上清をテストする。
　
<ITEM6>
 
 MPC ELISA法はハム、チーズ、鶏肉すべてで1ng/1g食品のSEAを容易に検出できた。従来の市販キットによる測定は3ないし24時間かかったが、本法は10分で測定できた。MPC ELISA法は一つの細管にネガティブおよびポジティブコントロールを組み込むことができるし、また複数のエンテロトキシン検出部を組み込むことにより、これらの同時検出及び同定ができる可能性を持つ。
　
