文献番号：s-70
タイトル：Determination of influential factors during sample preparation for Staphylococcal
　　　　　enterotoxin detection in dairy products
邦訳タイトル：乳製品のブドウ球菌属のエンテロトキシンの検出のための試料調製に影響する因子の決定
著者：Macaluso L, Lapeyre C, Dragacci S
誌名､発行年、巻号頁：Analusis　(1998),　<B>26</B>,(8), 300-304
菌種：1.<I>Staphylococcus aureus</I>
　
<ITEM1> \n調査の目的
 
実験計画法を用いてチーズ製品中のブドウ球菌のエンテロトキシン（SEA）検出用の試料調製に影響する因子を決定する。
　
<ITEM2> \n検体名
 
人為的にブドウ球菌エンテロトキシン（SEA）を汚染させたチーズスラりー
　
<ITEM3>
 
-
　
 
<ITEM4> \n検査検体数
 
-
　
<ITEM5>
 
1）チーズサンプルの調製。12.5gのチーズを25mlの抽出液に混合しスラリーを作る。人為的にSEA溶液で汚染させ、pHを≦4に調整後に遠心分離する。その上清のpHを7.3±0.2に調整後、遠心分離し、その上清をグラスウールでろ過し、ろ過上清を濃縮する。あるいは濃縮しない（濃縮はチューブに入れ30%PEG溶液に対して、一夜4℃で透析）。濃縮抽出液は回収しPBSで2.5mlに調整する。
2)抽出液中のSEAの検出。SEAの検出は間接サンドイッチEIAで行う。結果はマイクロタイタープレートリーダーを用い、405-630nmで吸光度を測定する。標準曲線よりSEA量を計算した。
3)サンプル調整に影響する7つのパラメーター（予備実験）。
①クロロホルムによるチーズ抽出液の脱脂、
② pH≦4への酸性化によるカゼインの沈殿、
③遠心分離速度、
④遠心分離温度、
⑤遠心分離時間、
⑥抽出溶媒、
⑦抽出液の透析。
4)上記予備実験の結果より以下の5つの要因について、一部実施実験計画法を応用し、 EIAによるSEAの検出濃度で評価した。
①遠心分離速度　　　　　　　　　 　　 3130gと12500g　　　　
②遠心分離温度　　　　　　　　　      　　4℃と20℃　　　　
③遠心分離時間　　 　　　　　　 15分と30分　　　　
④抽出溶媒　　　　　　≦40℃の蒸留水とPBS Tween　　　　
⑤透析による濃縮　　　　　　　　するとしない
　
<ITEM6>
 
 唯一第⑤因子（透析による濃縮）のみが抽出物組成に影響する因子であった。すなわち、SEAの検出レベルを下げるには、サンプルの調製において透析による抽出物の濃縮が必須ステップであることを意味する。他の因子の水準は、使いやすい調製法となるように選ばれた。すなわち、遠心分離速度は12500g、温度は4℃、時間は15分、さらに抽出溶媒は≦40℃の蒸留水である。
　
<ITEM7>
 
Analusis, 26, 300
　
<PUBMED>

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/htbin-post/Entrez/query?form=4&db=m&Term=Analusis, 26, 300
