文献番号：s-69
タイトル：Toroidal coil countercurrent chromatography separation and analysis of Staphylococcal
　　　　　enterotoxin A (SEA) in milk
邦訳タイトル：ミルク中のStaphylococalのエンテロトキシンA(SEA)のトロイダル形コイル向流
　　　　　　　クロマトグラフィー分離と分析
著者：RASOOLY A , ITO Y
誌名､発行年、巻号頁：Journal of liquid chromatography & related technologies　(1999),
　　　　　　　　　　　<B>22</B>, (9), 1285‐1293 
菌種：1.<I>Staphylococcus aureus</I>
　
<ITEM1> \n調査の目的
 
ウエスタンイムノブロッティングの欠点である、試料サイズが小さいこと及び試料に含まれる蛋白質によりSDS-PAGEが妨害を受けるという問題を克服するために、トロイダルコイル向流クロマトグラフィーをウェスタン免疫ブロットと組み合わせて用いる方法について評価する。
　
<ITEM2> \n検体名
 
StaphylococalのエンテロトキシンA(SEA)を添加した牛乳
　
<ITEM3>
 
-
　
　
<ITEM4> \n検査検体数
 
-
　
<ITEM5>
 
1)装置。乳からSEAの向流クロマトグラフィー（CCC）抽出を実行するためにトロイダルコイル遠心分離を採用した。
2)試料調製。低脂肪脱脂粉乳を蒸留水で1：10に薄める、純SEAを濃度100ng/mlに加える。
3)2相溶媒システムと被分析溶液の調製。各12.5%(W/W) のPEG1000とK2HPO4からなるポリマー相システムを室温で分液ロート中で平衡化した。2層が形成されたら各層を分けてガラス瓶に保管する。乳試料に等量の蒸留水を加え、適当な量のPEG1000とK2HPO4を加えて試料中の組成が分離用ポリマー相システムの組成に見合うようにする。1000xgで遠心分離後、下層0.5mlをカラムにアプライする。
4)CCC法。略
5)SDS-PAGEと免疫ブロッティング。　　CCC流出液は90℃で20分加熱し、既報のように12.5%　SDS-PAGEで直ちに分画した。試料濃度：SEAの入った下層は遠心UF濃縮した。
　
<ITEM6>
 
 CCCからの流出液はUV検出器で連続的にモニターし、フラクションコレクターで試験管に集めた。SEAは低濃度のため分光光度計では検出できなかった。画フラクションの一部をSDS-PAGEで分析すると主に画分40-48にSEAが見られ、未処理の試料に見られたようなゲル易動度のゆがみはなかった。SEAを含む画分(40-48)を集めて限外ろ過により濃縮し、ウエスタンイムノブロティングで再チェックした｡その結果、大部分の蛋白質がこの画分から除かれて、ウエスタンイムノブロティングの感度は上昇し、SEAシグナルは約11倍強くなっていた｡
　
