文献番号：s-48
タイトル：Immunoenzymatic detection of staphylococcal enterotoxins :
　　　　　International interlaboratory study
邦訳タイトル：-
著者：Lapeyre　C.
誌名､発行年、巻号頁：Journal of  AOAC International, (1996), <B>79</B>, 1095-1101
菌種：1.<I>Staphylococcus aureus</I>
　
<ITEM1> \n調査の目的
 
食品中のエンテロトキシンA, B, C, D及びEを迅速に検出できる酵素イムノアッセイを公認するため、国際的な13の研究所による室間再現性を検証する。
　
<ITEM2> \n検体名
 
市販の牛乳（LL）、チーズ（Tomme）、肉（調理されたひき肉）、
マッシュルーム（缶詰）、ラビオリ、マヨネーズ
　
<ITEM3>
 
チーズ、マッシュルーム、ラビオリ、マヨネーズ：各々700 gをエンテロトキシンA調製液と合わせホモジナイズ。チーズは50g 2検体、その他は25g 2検体ずつを各研究室へ分配
 
肉：50gをエンテロトキシンA調製液と合わせホモジナイズ。牛乳：10mlをエンテロトキシンA調製液と合わせ各研究室へ分配
　
<ITEM4> \n検査検体数
 
接種濃度は3段階：牛乳及びチーズは0.5, 2並びに5 ng/g
その他は0.2, 0.8並びに2 ng/g
　
<ITEM5>
 
・マッシュルーム、ラビオリ、マヨネーズ及び肉20gまたはチーズ40gに20mLの抽出緩衝液を加えホモジナイズし、3,000rpm,15分遠心後、pH6.5〜7.5に調整しろ過する。
・SEA-E検出には各抗原特異的抗体を用いたサンドイッチEIA法を用いた。
　抽出液100μlにウサギ血清100μlを加え室温30分インキュベートし希釈しする。
　この液500μlをテストチューブにとり15分振とう後、wash bufferで処理後、基質液250μl及びクロモーゲン250μlを加えて30分インキュベーション。その後、500μlのStop solutionを加えて反応を終了させる。
・反応液の吸光度を測定する（波長450nm）。
　
<ITEM6>
 
検出限界（食品タイプにより異なる）
　牛乳：1 ng/mL、チーズ：1.5 ng/g
　肉：0.8 ng/g、マッシュルーム：0.5 ng/g、他およそ0.2 ng/g
低濃度（0.5 ng/g ）においては検出困難と推定された牛乳及びﾁｰｽﾞに関して、検出は可能と判断された（牛乳：23例中18例、チーズ：26例中6例）。
「TRANSIA Kit」によるブドウ球菌性エンテロトキシンのイムノアッセイは、結果を目視で判断でき、また、分光光度計を用いて半定量的に数値化することもできる感度の高い方法である。
　
<ITEM7>
 
Journal of AOAC International, 79, 1095
　
<PUBMED>

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/htbin-post/Entrez/query?form=4&db=m&Term=Journal of AOAC International, 79, 1095

