文献番号：sj-14
タイトル：Detection of <I>Staphylococcus aureus</I> isolated from bovine milk by enzyme‐linked immunosorbent
　　　　　 assay, using　monoclonal antibody
邦訳タイトル：黄色ブドウ球菌に対するモノクローナル抗体の作製及び同抗体を用いたELISA法による牛の
　　　　　　　乳汁由来黄色ブドウ球菌の検出
著者：平井網雄、恒光裕、工藤卓二、米造ユウジ、森清一
誌名､発行年、巻号頁：北海道立新得畜産試験場研究報告　(1998)　<B>NO.22</B>,1-8
菌種：1.<I>Staphylococcus aureus</I>
　
<ITEM1> \n調査の目的
 
S. aureusの標準株の1つであるS. aureusWood46に対するモノクロ一ナル抗体を作製し、この抗体とウサギの免疫血清から作製したポリクローナル抗体を用いたサンドイッチELISA法でウシの乳汁から分離された<I>S.aureus</I>の検出について検討する。
　
<ITEM2> \n検体名
 
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<ITEM4> \n検査検体数

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<ITEM5>
 
1)<I>S.aureus</I> Wood46に対するモノクローナル抗体の作製。<I>S.aureus</I> Wood46に対するモノクローナル抗体産生ハイブリドーマを作製し、それをBALB/cマウス腹腔内に注射後1-2週間で腹水を採取した。ハイドロキシアパタイトを用いた高速液体クロマトグラフィーによりモノクローナル抗体を精製した。
2)モノクローナル抗体及びポリクローナル抗体を用いたサンドイッチELISA法による<I>S.aureus</I>の検出。<I>S.aureus</I> Wood46に対するポリクローナル抗体はYOSHIDAらの方法に準じて作製した。抗<I>S.aureus</I> Wood46ポリクローナル抗体を96ウェルマイクロプレートに分注し4℃一昼夜静置する。PBS Tweenで4回洗浄する。1％ウシ血清アルブミンをウェルに分注し、室温で1時間静置する。PBS Tweenで4回洗浄し、細菌浮遊液を加え、37℃で2時間静置する。PBS Tweenで4回洗浄する。牛プール血清を分注し、室温で1時間静置した。PBS Tweenで4回洗浄し、抗<I>S.aureus</I> Wood46モノクローナル抗体を分注し、37℃で2時間静置した。PBS Tweenで4回洗浄後にペルオキシダーゼ標識抗マウスIgMを分注し、37℃で2時間静置する。気質・発色液を分注し、遮光して室温で30分静置する。マイクロプレートリーダーで吸光度測定する。
　
<ITEM6>
 
作製したモノクローナル抗体は<I>S.aureus</I>Wood46の他、これも標準株の一つである<I>S.aureus</I>CowanIとの反応が認められた。モノクローナル及びポリクローナル抗体を用いたサンドイッチELISA法において、 <I>S.aureus</I>標準株2株はE+8CFU/ml以上の濃度で反応が認められたが、それ以外の細菌の標準株との反応は認められなかったことから、このモノクローナル抗体が認識する抗原は<I>S.aureus</I>に特異的なものである可能性が高い。 同 ELISA法による<I>S.aureus</I>野外株24株の反応では、E+7CFU/ml以上の濃度ですべて反応が認められ、モノクローナル抗体は標準株及び野生株に共通して存在する抗原を認識するものと考えられた。
　
<LIST1>

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