文献番号：s-68
タイトル：Evaluation of an alternative extraction procedure for enterotoxin determination
　　　　　in dairy products
邦訳タイトル：乳製品におけるエンテロトキシン定量の代替抽出手順の評価
著者：Meyrand A,　Bavai C,　Montet M P,　Vernozy-Rozand C,　Atrache V
誌名､発行年、巻号頁：Letters in Applied Microbiology　(1999), <B>28</B>, (6), 411-415
菌種：1.<I>Staphylococcus aureus</I>
　
<ITEM1> \n調査の目的
 
トリクロロ酢酸(TCA)沈殿に基づくエンテロトキシンの新しい抽出プロトコルを評価し、透析濃縮を用いる対照法と比較する。
　
<ITEM2> \n検体名
 
精製エンテロトキシン(A、B、C1、C2、C3、D、E)を添加したカマンベールチーズ及びブドウ球菌食中毒に関与した生山羊乳カマンベールチーズ。
　
<ITEM3>
 
-
　
 
<ITEM4> \n検査検体数
 
-
　
<ITEM5>
 
1)ブドウ球菌エンテロトキシンの抽出手順。(1) 方法1（透析濃縮）：20gチーズに蒸留水40ml加えホモゲナイズし、pH4に調整後、4℃で2000xg、15分遠心分離した。その上清をpH6-8に調整後遠心分離ろ過後、セルロース透析袋（保持分子量>6000-8000）で30%ポリエチレングリコールに対して4℃±2℃で一夜透析する。袋を冷水洗浄後リン酸緩衝液性食塩水(pH7.2)中に、濃縮抽出液が約1mlにもどるまで保持する。VIDAS SET試験に供す。(2)方法2（TCA沈殿）。20gチーズに蒸留水40ml加えホモゲナイズし、pH3.8に調整後、4℃で10000xg、15分遠心分離し、その上清を3mol/lの冷TCA 0.05ml/mlで処理し遠心分離する。沈殿を1mlのトリス緩衝液pH9.0に溶かし、pH7.5に調整する。
2) ブドウ球菌エンテロトキシンの検出手順。本法はポリクロナル抗エンテロトキシン抗体を用いた酵素結合蛍光アッセイを使用している。VIDAS SET試験を妨害する内生のアルカリホスファターゼ活性を阻害するため、非殺菌乳からのろ液を80℃で3分加熱、ろ液0.5mlをVIDAS SETの試薬ストリップのウェルに入れる。自動システムで検出し比蛍光値(RFV)で表す。450以下は陰性とみなす。
　
<ITEM6>
 
VIDAS　SETテストは、どちらの抽出法でも0.5ng/mlレベルで各セロタイプのエンテロトキシンを検出した。TCA沈殿法の方が高いRFVを与え、チーズサンプルをTCAと2時間接触させておいても偽陰性を示すことも無かった。 ブドウ球菌食中毒に関与した生山羊乳カマンベールチーズを用いたテストにおいても、TCA沈殿法は透析濃縮法よりも高いRFVを与え、また偽陰性を示すことも無かった。TCA沈澱法は迅速、簡便且つ確実なエンテロトキシン抽出法であることを示唆した。
　
<ITEM7>
 
Letters in Applied Microbiology, 28, 411
　
<PUBMED>

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/htbin-post/Entrez/query?form=4&db=m&Term=Letters in Applied Microbiology, 28, 411

<LIST1>

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