文献番号：s-45
タイトル：Detection of <I>Staphylococcus aureus</I> in milk by use of polymerase chain reaction analysis
邦訳タイトル：-
著者：Khan,M.A.
誌名､発行年、巻号頁：American Journal of Veterinary Research, (1998), <B>59</B>, (7), 807-813
菌種：1.<I>Staphylococcus aureus</I>
　
<ITEM1> \n調査の目的
 
黄色ブドウ球菌の遺伝子をPCR法で検出可能か検査する。
　
<ITEM2> \n検体名
 
 
　
<ITEM3>
 
(1)黄色ブドウ球菌を接種しない羊乳,牛乳
(2)乳腺炎の羊乳から分離した黄色ブドウ球菌を接種した羊乳,牛乳
(3)黄色ブドウ球菌ATCC21027を接種した羊乳,牛乳
(4)ブドウ球菌を接種した羊乳,牛乳
(5)10%ホルマリン液で固定した羊乳,牛乳と純水に黄色ブドウ球菌を接種
　
<ITEM4> \n検査検体数
 
大学農場の牛から集めた乳100サンプル
地元農場の羊から集めた乳　76サンプル
　
<ITEM5>
 
実験に供した黄色ブドウ球菌のコロニーは、血液寒天培地平板から得た。
細菌DNAの抽出
(1)サンプル乳1.5mlをマイクロチューブで13600xg 1分間遠心分離。沈殿物を1mlPBSSで縣濁し13600xg 1分間遠心分離。これを5回以上繰り返す。
(2)22μl Tris-EDTA NaCl緩衝液と3μlの1MNaOHで縣濁。これを95℃15分加温。
PCR法
(1)61.4μlの純水,11.4μlのPCR緩衝液,還元ヌクレオチド3-リン酸2.3μl,0.02μmolプライマーのPCR反応液にTaqDNAポリメラーゼ2.5unitと検出するDNA1μlを添加。
(2)1サイクルはDNA熱変性94℃1分,プライマーのアーニリング55℃0.5分,伸長反応72℃3.5分でこれを37サイクル行う。
(3)アガロース電気泳動を行う。
　
<ITEM6>
 
(1)黄色ブドウ球菌の核遺伝子はⅠφΧ174DNAマーカーの270/281bpと一致。
(2)PCR法は乳房炎乳から分離した黄色ブドウ球菌と黄色ブドウ球菌ATCC21027に適合した。
(3)黄色ブドウ球菌以外のブドウ球菌ではPCR法で増幅しない。
(4)10%ホルマリン液で固定した乳と純水の場合でもPCR法で黄色ブドウ球菌を検出した（1cfu/ml；ホルマリン固定でやや感度低下）。
　
<ITEM7>
 
American Journal of Veterinary Research,59,807
　
<PUBMED>

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/htbin-post/Entrez/query?form=4&db=m&Term=American Journal of Veterinary Research,59,807
