文献番号：354
タイトル：Competitive　inhibition　of　<I>Clostridium　botulinum</I>　type　Ｅ　by　<I>Bacillus</I>　species　in　a　value-added　seafood　product　packaged　under　a　modified　atmosphere
著者：A.Lyver
論文-年：Food　Research　International　Vol.31　No.4　　1998
個票分類：製造工程における微生物の制御法－②低温度管理による制御法
調査国：カナダ

※このＣＤ-ＲＯＭでは、べき乗を右記の例のように表します。（例）10の9乗 → 10E9

<ITEM1> \n調査目的\n　
　
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<ITEM2> \n検体名\nサンプルサイズ\n及び採集方法\n　
　
すり身500g、蒲鉾600g、エビ加工での残査から調理したスープ175g、エビフレーバー10g、小麦粉40g、油50g、カルボロ5gですり身ナゲットを調製。バッターとパン粉を付けて冷凍保管した。
 
<ITEM3> \n調査対象微生物\n　
　
<I>Clostridium　botulinum</I>　type　Ｅ
 
<ITEM4> \n検査方法\n増菌の有無\n培地\n　
　
ＴＰＧＹＥ培地(Difco)で嫌気チャンバーを、水素１０％、二酸化炭素１０％、窒素ガス８０％の雰囲気で３５℃１０日間培養。
芽胞は４℃２０分間17500×gで遠心分離し、使用するまでpH6.6のゼラチンシン酸緩衝液中で４℃で保管。芽胞数は２×10E5個/ml。ナゲット接種前に６０℃２０分のヒートショックを与えた。
生と調理品に芽胞を接種したナゲットは、バリア性の高いCryovac　bagsに、三菱ガス化学のエージレスを入れて包装し、シールして、４，１２，２５℃に保存した。
乳酸菌はMRS培地(Difco)を用い拡散塗抹で、35℃48時間培養した。
バチルス菌は、75℃15分のヒートショック後、希釈し、PEMBA(Polymyxin　pyruvate　egg　yolk　minnitol　bromothymol　blue)培地に塗抹ｼ､35℃24～48時間培養した。
<I>Cl.　botulinum</I>は抗生物質と卵黄を含む<I>Cl.botulinum</I>分離培地(Difco)で、嫌紀的に25℃72時間培養した。
毒素は、包装サンプルと等量のゼラチンリン酸緩衝液を加え、２分ストマッカーにかけ、、４℃２０分間17500×ｇで遠心分離し、上澄み液をフィルター除菌し、トリプシン処理した。その0.55mlをハツカネズミに注射し、ボツリヌス中毒の兆候を72時間観察した。2/4以上の致死率なら毒素陽性とした。
 
<ITEM5> \n結果\n汚染実態\n汚染菌の性状\n防除対策等\n　
　
サンプルのヘッドスペースの酸素濃度は脱酸素剤をいれたもので１～２日で１％以下に、脱酸素剤を入れないものでも２８日後には１％以下となった。炭酸ガスは増加した。
pHは6.5から4.0～4.9に低下した。
官能検査の結果は、生ナゲットで脱酸素剤がない４℃保存品は２８日間許容可能、１２℃では２８日で、２５℃では２１日で許容できなかった。脱酸素剤を封入したサンプル群は２８日後で許容であった。
調理ナゲットで乳酸菌は検出されなかった。<I>Cl.botulinum</I>は減少した。バチルスは保存温度１２℃、２５℃で10E5，10E6と増加した。
すべてのサンプルから<I>B.subtilis</I>が検出された。他に<I>B.licheniformis、Ｂ.cereus、B.pumilus</I>が分離された。バチルスはパン粉、バッターミックス、スパイスミックス、小麦粉などで10E3レベルいた。バチルスは<I>Cl.botulium</I>タイプＥを抑制した。<I>B.licheniforms</I>は最も効果があった。
乳酸菌<I>Leuconostoc　mesenteroides</I>は、<I>Cl.botulinum</I>に対し生育を阻害しなかった。
１２℃で２８日、２５℃で１４日で毒素陽性となった。
バチルスは、<I>Lysteria　monocytogenes、Streptococcus　faecalis、Staphylococcus　aureus</I>にも抑制効果があった。
 
