文献番号：315
タイトル：Differentiation of <I>Clostridium perfringens</I> and <I>Clostridium botulinum</I> from non-toxigenic clostridia, isolated from prepared and frozen foods by PCR-DNA based methods.
著者：Cordoba M G, (Univ. Extremadura, Badajoz, ESP)
論文-年：Nahrung 45: 125-128 (2001)
個票分類：検査方法の比較
調査国：スペイン

※このＣＤ-ＲＯＭでは、べき乗を右記の例のように表します。（例）10の9乗 → 10E9

<ITEM1> \n調査目的\n　
　
従来の検出法では１−２日間を要するclostridia 検出を迅速化した。病原性の確認にも使用できる。HACCP管理に応用できる。
 
<ITEM2> \n検体名\nサンプルサイズ\n及び採集方法\n　
　
調理および冷凍食品（flamenquin, croquettes hake fish fingersと原料）の加工工程
 
 
 
<ITEM3> \n調査対象微生物\n　
　
<I>Clostridium</I>属
 
<ITEM4> \n検査方法\n増菌の有無\n培地\n　
　
Sodium sulphite, polimyxin, sulphadiazin  agar (SPS), 45℃， 24-48 h嫌気培養。　分離株はNutrient agarでsub-culture　37℃、24時間。API 20Aで同定。その他PCR-DNA分析により同定。DNA採取用培養はTYCPG broth使用。　16s rDNAのPCR増幅。制限酵素TaqIとRsaIで切断し電気泳動上でその切断DNAサイズを検証、同定する。ボツリヌス菌を検証するためには特別なプライマーを使ってPCRを行う。
 
<ITEM5> \n結果\n汚染実態\n汚染菌の性状\n防除対策等\n　
　
検体より、１１株の<I>Clostridium</I> 属菌を分離した。病原性の報告されている<I>C. perfringens</I>も３株検出された。残りの検出株は、<I>C. glyccolicum</I> と <I>C. bifermentans</I>であった。SPS寒天培地から、生物学的方法で同定するには24-48時間が必要だがPCR-DNA分析では、Clostridium 属の決定にはPCR-2種制限酵素での切断ー電気泳動解析によって種のレベルまで8-10時間で同定できる。ただし、ボツリヌス菌の同定には毒素産生遺伝子の検出用プライマーを使ってのPCRを行う必要があることを示した。このためには6-8時間が必要である。このため、DNA-PCR分析で迅速化が図られ、HACCP管理に有用な方法と考える。
 
<ITEM6> \nPubMed\n
　
CORDOBA MG, Nahrung, 45, 125
 
<PUBMED>

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=search&term=CORDOBA+MG,+Nahrung,+45,+125

