論文 No.：129
タイトル：Immunomagnetic separation methods for the isolation of 
　　　　　<I>Campylobacter jejuni</I> from ground poultry meats
筆頭著者：Yu L.. S. L. 
論文、年、Vol、頁（〜）：Journal of Immunological Methods 256: 11-18(2001)
個表分類：検出法
　
<ITEM1> \n調査の目的
 
2種類の免疫磁気ビーズを使用して免疫磁気分離法を行い、鳥肉からの<I>Campylobacter jejuni</I>分離の感度および捕獲率を評価する。
　
<ITEM2> \n検体名
 
鶏または七面鳥挽肉
　
<ITEM3>
 
鶏または七面鳥挽肉に人工的に<I>C. jejuni</I> ATCC 35918株を様々な濃度で接種
　
 
<ITEM4>
 
カンピロバクター
　
<ITEM5>
 
<I>C. jejuni</I> ATCC 35918株はNutrient broth no.2および0.6% yeast extract培養液にて42℃、18-24時間、微好気条件で増菌。鶏または七面鳥挽肉に<I>C. jejuni</I> ATCC 35918株を様々な濃度で接種し、2種の免疫磁気ビーズ(ビオチン標識抗カンピロバクター抗体付着ストレプトアビジンDynabeadsまたは抗カンピロバクター抗体付着tosyl活性 Dynabeads)をそれぞれ加え、ストマッカーで混和し、培養した。接種菌量(10E3-10E7 CFU)、ビーズ数（3.0x10E5-1.2x10E6)および培養時間(60-120分)を変えて最適条件を求めた。
ビーズおよび上清は生菌数測定のためKarmali寒天培地に播種し、42℃で48時間、微好気的に培養した。
　
<ITEM6>
 
これまで様々な特性を持つ免疫磁気ビーズを使用したカンピロバクター分離法が報告されているが、本試験法はポリクローナル抗体を使用しているため特異性は低いものの、感度が高いといえる。
ビーズ濃度10E5-10E6/mlで細胞密度10E2-10E6CFU/gの<I>C. jejuni</I> ATCC 35918株の捕獲を試みた結果、免疫磁気ビーズを用いて鳥挽肉中カンピロバクターを検出するためには10E3 CFU/g以上の菌が必要であった(検出限界)。挽肉の入っていないPBS-菌懸濁液の検出限界はtosyl活性ビーズで10E3 CFU/ml、ストレプトアビジンビーズで103 CFU/mlであった。
tosyl活性ビーズの方がストレプトアビジンビーズよりやや捕獲率が良い(例えば3.0x10E5個のビーズを用いた時、tosyl活性ビーズでは接種菌濃度6.0x10E4CFU/gで捕獲菌数1.0x10E3。ストレプトアビジンビーズでは接種菌濃度3.5x10E4CFU/gでの捕獲菌数2.4x10E2)。ビオチン化に関連して抗体の表面構造が変化したためビオチンとストレプトアビジンビーズ間で競合がおきて、菌への結合効率が低下したのかもしれない。
ビーズによる捕獲菌数よりも捕獲されずに上清に残った菌数が多い傾向があった(つまり見かけ上で回収率が低い)。これはビーズを寒天上で培養すると、1ビーズに1個以上の菌を捕獲しているのに1コロニーしか形成されないなど、CFUが実際より少なく算定されるためと考えられる。
培養条件について、少量のカンピロバクターの分離・検出を行うのでないかぎり、サンプル1mlあたり106個以上のビーズの使用また60分以上の培養時間の設定は不必要である。
　
<ITEM7>
 
Yu, L.S.L, J Immunol Methods, 256, 11
　
<PUBMED>

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/htbin-post/Entrez/query?form=4&db=m&Term=Yu, L.S.L, J Immunol Methods, 256, 11