論文 No.：93
タイトル：Detection of <I>Campylobacter jejuni</I> and <I>C.coli</I> in chicken faecal samples by PCR
筆頭著者：Rasumussen H. N. 
論文、年、Vol、頁（〜）：Letters in Applied Microbiology 23:363 - 366(1996)
個表分類：検出法
　
<ITEM1> \n調査の目的
 
<I>C. jejuni</I>及び<I>C. coli</I>のflaA，flaBの遺伝子断片から選択したPCRプライマーを用いて<I>C. jejuni</I> 及び<I>C. coli</I>のDNA検出
　
<ITEM2> \n検体名
 
鶏クロアカスワブ、輸送カゴ中の鶏糞
　
<ITEM3>
 
クロアカスワブ（鶏舎からのサンプルはｸﾛｱｶｽﾜﾌﾞ30羽分を1検体として15検体）
鶏運搬用かご中に付着している鶏糞
特異性の確認：<I>C. jejuni</I>と<I>C. coli</I> 67株、他のｶﾝﾋﾟﾛﾊﾞｸﾀｰ属菌17株、他菌種95株鶏舎からのサンプル：ｸﾛｱｶｽﾜﾌﾞ30羽分を1検体として15検体運搬かごから採取した鶏糞16検体
　
<ITEM4>
 
カンピロバクター
　
<ITEM5>
 
PCRプライマーとして、<I>C. coli</I> VC167株由来のフラジェリン遺伝子flaA, flaBから得たCA1、CA2のｵﾘｺﾞﾇｸﾚｵﾀｲﾄﾞを使用。PCR産物の検出には、ｱｶﾞﾛｰｽｹﾞﾙ電気泳動及びﾏｲｸﾛﾀｲﾀｰｳｪﾙ内でのﾊｲﾌﾞﾘﾀﾞｲｾﾞｰｼｮﾝによる。泳動では<I>C. jejuni</I> 、<I>C. coli</I> とも、810〜820bp付近に特有のバンドを検出。検出限界は<I>C. coli</I>でﾏｲｸﾛﾀｲﾀｰｱｯｾｲで5〜20CFU、泳動で10〜200CFUであった。
　
<ITEM6>
 
<I>C. jejuni</I>及び<I>C. coli</I>のflaA，flaBの遺伝子断片から選択したPCRプライマーを用いて<I>C. jejuni</I> 及び<I>C. coli</I>のDNA検出を試みた。　PCR産物について、マイクロタイターウェル内で非働化した内部プローブを用いてハイブリダイゼーションを行ったところ、<I>C. jejuni</I>と<I>C. coli</I>の系統にのみ陽性反応を認めた。　
鶏糞便31検体（ｸﾛｱｶｽﾜﾌﾞ15検体、運搬かごから採取した糞便16検体）について検査を実施したところ、栄養添加培地上で培養し、PCR法を実施した結果と、従来の培養法の結果は完全に一致した（ｽﾜﾌﾞ6検体､糞便5検体で陽性）。培養法で陽性を示した11検体で、増菌前の運搬用培地についてPCR法を試みたところ、9検体で陽性を示した。
　
<ITEM7>
 
Rasumussen HN, Lett Appl Microbiol, 23, 363
　
<PUBMED>

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/htbin-post/Entrez/query?form=4&db=m&Term=Rasumussen HN, Lett Appl Microbiol, 23, 363