論文 No.：114
タイトル：Comparison of the nucleic acid amplification system NASBA and agar isolation of 
　　　　　pathogenic campylobacters in naturally contaminated poultry
筆頭著者：Uyttendaele
論文、年、Vol、頁（〜）：J Food Protect 59:683-687(1996)
個表分類：カット工場
調査国：ベルギー
 
<ITEM1> \n調査の目的
 
様々な鶏産物の病原性カンピロバクター検出におけるNASBA核酸増幅法の適性評価と大規模なスクリーニングにおける核酸増幅法と伝統的培養法を比較する
 
<ITEM2> \n検体名
 
160検体
鶏と体　50検体（数カ所の食鳥処理場から採材）、鶏腿部　40検体（2食鳥処理場から採材）、70検体（地方スーパーマーケットから採材　30鶏脚部、20翼部、20七面鳥脚部）
 
<ITEM3>
 
 
 
 
<ITEM4>
 
カンピロバクター
 
<ITEM5>
 
○鶏肉における病原性カンピロバクター（<I>C.jejuni</I>,<I>C.coli</I>,<I>C.lari</I>）の検出10g（皮、肉）を滅菌ストマッカーバッグに入れ、90mlのPreston選択培地を加え、Colworth 400 Stomacherで60秒間ホモジナイズ42℃　24時間　微好気培養選択培地　42℃　24-48時間（modified <I>Campylobacter</I> charcoal desoxycholate agar：mCCDA）常法により同定　
○核酸分離24時間　選択培養後、ホモジナイズしたPreston培地10mlを15ml円錐チューブで遠心分離（1000g　2分間）上清1mlを9mlのguanidinium thiocyanate Triton-X溶液に加え、核酸分離はBoomらの方法により、NASBA酵素抗体ゲル分析法(NASBA-ELGA)を用いた　　　　　　　　　　　　
○プライマーとプローブ　オリゴヌクレオチドプライマー一対（OT1547，OT1118）　カンピロバクター種の16S RNA由来　<I>C.jejuni</I>,<I>C.coli</I>,<I>C.lari</I>由来増幅産物でハイブリダイゼーションしたプローブ（OT1559）
○NASBAUyttendaeleらの方法による。陰性コントロールには2μlのRNAaseフリーのH2Oを、陽性コントロールには<I>C.jejuni</I> LMG6444から得られた核酸2μlを反応液に加えた。　　　　　　　　　　　　　　　
○酵素抗体ゲル分析法（ELGA）種特異オリゴヌクレオチドプローブ（ELGAﾌﾟﾛｰﾌﾞOT1559）、horseradish　peroxidase（HRP）をNASBA産物の同定に使用し、60℃　10分間のハイブリダイゼーション後、余分なELGAと関係ないプローブをアクリルアミドゲルにおける垂直電気泳動で分離し、ハイブリダイゼーションされたゲルにおける増幅産物とELGAﾌﾟﾛｰﾌﾞを比色分析した。単一のハイブリダイゼーション産物はゲル上でその低移動度から、ELGAﾌﾟﾛｰﾌﾞと関係ないもの（陰性-下部青染バンド）の上部に移動した（陽性-上部青染バンド）
 
<ITEM6>
 
 検査した160検体のうち147検体については伝統的培養法（mCCDA）とNASBA-ELGA法とで同様の結果が得られた。
NASBA-ELGA法で9検体偽陽性、mCCDA法で2検体偽陰性、2検体については同定不能であった。
病原性カンピロバクターは92/160（57.5％）検出され、<I>C.jejuni</I>が79（49.37％）、<I>C.coli</I>が6（3.75％）、<I>C.lari</I>が5（3.12％）、分類不能が2であった。
分離率は、鶏と体56％（28/50）、鶏腿部50％（35/70）、七面鳥脚部50％（10/20）で、翼部では95％（19/20）と高率であった。
NASBA-ELGA法は全過程32時間で5〜6日要する伝統的培養法と比較して約4日間分析時間を短縮することができた。
NASBA-ELGA法は病原性カンピロバクターのスクリーニング検査として有益な方法である。
 
<ITEM7>
 
Uyttendaele M, J Food Prot, 59, 683
　
<PUBMED>

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/htbin-post/Entrez/query?form=4&db=m&Term=Uyttendaele M, J Food Prot, 59, 683