論文 No.：50
タイトル：The isolation of <I>Campylobacter jejuni</I> from contaminated surfaces and its survival in diluents.
筆頭著者：Tom Humphrey
論文、年、Vol、頁（～）：International Journal of Food Microbiology 26（1995）295～303
個表分類：（その他）
 
<ITEM1> \n調査の目的
 
汚染表面からのCampylobactersの分離率を、培養前に希釈液に貯蔵する方法と選択培地に直接スワブを置く方法とで比較研究した。
 
<ITEM2> \n検体名
 
 
 
<ITEM3>
 
ブロイラーや人の腸炎から分離した<I>Campylobacter jejuni</I>を実験前に、Robertson's Cooked Meat medium（RCM）で37℃24～48h培養し、血寒で微好気性に37℃で1日おきに継代培養したもの。
 
<ITEM4>
 
カンピロバクター
 
<ITEM5>
 
①37℃48hRCMで培養後、50℃15分もしくは-20℃1～4日さらし、希釈液に接種し、4℃又は20℃で4h又は24h貯蔵され、最後に、0.02％硫酸鉄、ピルビン酸Na、metabisulphite Naを含む血寒で37℃48h平板培養された。最初の汚染レベルでは約1.000Cell/mlで続いて、Buffered Peptone Water（BPW)、Maximum Recovery Diluent（MRD）、Fastidious Anaerobe Broth（FAB)、Swab Resuscitation Medium（SRM)が使われた。
②-20℃か50℃にさらされた<I>C.jejuni</I>は、20℃24h希釈液で保存され、ExeterかPark and Sandersを含んだキャンピロバクタ-培地に1ml接種された。Park and Sanders液は、膜ろ過したスキロー寒天培地に置かれ、Exeter液は37℃か42℃で48h培養し、Exeter寒天培地をしましまにした。全て42℃で48h微好気で培養した。
③汚染の初期段階を、3.5*102～104Cell/mlの範囲になるよう全馬血で覆い、two formica squares に0.02mlづつ滴下し、20℃4h空気にさらし、25mlのExeter液に入れて37℃48h培養した。
④汚染されたFormica squaresは2時間空気にさらして乾燥させるか、液体で残るためにペトリ皿に置かれた。時間後 squaresは、滅菌した25mlスクリューキャップボトルに移しかえられた。BPWを1ml加え、無菌のプラスチックの10μl白金耳でつりあげられ、10本の血寒培地に置かれ、微好気性下で37℃48h培養された。Exeter液は残ったBPWを加え、37℃48h培養した。
⑤汚染表面からの<I>Campylobacter</I>の分離は、2つのプロトコールで研究した。1つは新鮮な鶏肉を小売り店から購入してBPWでリンスし、103～104個/mlになるように4℃で一昼夜保存し、1.500c㎡のsquaresに3mlが塗られ、60squaresに平等に分けられた。formicaは20℃で空気にさらし、30分乾燥させ、squaresは<I>Campylobacter</I>液で濡らした綿棒を使って塗った。60スワブは、ランダムに分配され、20本はExeter培地で37℃48h、20本はExeter培地で42℃48h、20本はPark and Sanders培地で培養し、次に適切な選択培地に置いて42℃48h培養した。2つ目は、スワブを直接Exeter選択液に置くか、選択培地に接種する前に4℃24hSRMかFABに置くかによる分離率の比較実験を実行した。Exeter液は平板培養する前に37℃48h培養した。
⑥人工的な汚染表面と家禽工程機械で0.02％硫酸鉄、メタビシファイトNa、ピルビン酸Naを加えたり、加えなかったりした希釈液10mlが得られ、4℃24h保たれた。4hと24hに1ml希釈液から移し、Exeter培地で42℃48h平板培養した後、Exeter液で37℃48h培養した。BPWはFABとSRMを比較した。
 
<ITEM6>
 
（1）加熱・冷凍の障害によって大きな違いはない。結果は4時間を越えた貯蔵の運搬方法には重大な違いがないことを明らかにした。Cellを4℃24hで保つと明白になり、FABを使うと生存は高まる。(表1）
（2）加熱・冷凍障害の<I>C.jejuni</I>は、強化培養前に希釈液中に20℃24hで保たれ、最も高い分離率はFABから得られた(表2）。3つの分離方法で大きな違いはなかった。
（3）自然的・人工的に汚染したスワブは、抗酸素剤（FBP)の添加の有無で、BPWやFABの汚染率において重大な効果はなかった。しかし剤を加えたSRMからの全てのサンプルは<I>Campylobacter</I>は陰性であった。
（4）乾燥した滴での20℃での<I>C.jejuni</I>の致死率を液体が残ったものと比較した(表3）。<I>C.jejuni</I>は液体の自然環境の中では育成する事はできるが、乾燥には影響を受けやすい。
（5）Exeter培地を使うと分離率は意味ありげに高く、スワブの直接培養によっても増加する(表4）。
（6）<I>Campylobacter</I>の分離率は希釈液を用いたものより、培養培地に直接置いたほうが良い。直接培養はスワブの全ての<I>Campylobacter</I>が培養に利用できるが、希釈液は1ml使用するだけだからである。希釈液は敏感な<I>Campylobacter</I>を選択培地にさらすのを引き延ばすことができる。希釈液を使用するなら、SRMよりもBPWかFABを使用する方がよい。<I>Campylobacter</I>の生育能力は液体が残れば、馬血の影響は受けない。しかし乾燥すると回復しない。
 
<ITEM7>
 
Humphrey TJ, Int J Food Microbiol, 26, 295
　
<PUBMED>

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/htbin-post/Entrez/query?form=4&db=m&Term=Humphrey TJ, Int J Food Microbiol, 26, 295