論文 No.：J7
タイトル：DNAプローブ法による食鳥肉からのカンピロバクターの検出
筆頭著者：石井営次
論文、年、Vol、頁（〜）：食品と微生物-1993年
個表分類：検出法
調査国：日本（大阪市）
　
<ITEM1> \n調査の目的
 
DNA probe法により鶏肉からのC,jejuni/coliの検出のため培養条件の検討を行った．
　
<ITEM2> \n検体名
 
鶏肉（もも肉，胸肉，ササミ，肝臓，ミンチ肉）48検体
　
<ITEM3>
 
　
 
 
<ITEM4>
 
カンピロバクター
 
<ITEM5>
 
SkirrowおよびButzler寒天培地の表面に各鶏肉を直接塗りつけ，微好気下で42℃，2日間培養し菌の分離同定を行った．一方，増菌培養は100ml試験管中で，50mlの各増菌培養液（Skirrow, Butzler, Preston増菌液）と鶏肉約10gを入れ37℃または42℃の浴槽中で1日培養した．培養後DNA probe法による検出用の試料に用いるとともに，SkirrowおよびButzler寒天培地に接種し，菌の分離を行った．増菌培養液はさらに1日培養した後，同様に処理し，増菌培地による2日培養の結果とした．次に，DNA probe法によるカンピロバクターの検出には，前述の増菌培養液および直接塗抹培養した寒天平板上のすべての集落を滅菌綿棒でかき集めて，Brucella broth(2ml)へ懸濁した液を用いた．試料0.2mlを含む試験管中にguanidine isothiocyanate溶液0.7mlとDNA probe液0.1mlを加え，r-RNAと添加したDNA probeとハイブリッドさせる．さらにcapture probeにラベルしたpolydeoxyadenylic acidとpolysterene製のディップスティック上の polydeoxythymidylic acid とを相補的に結合させる．室温で1時間反応後，ディップスティックを取り出し，Tris緩衝液で洗浄する．そして，horseradish peroxidaseを結合させた抗fluorescein抗体液の入った別の試験管にディップスティックを挿入し，室温で20分間反応させる．ディップスティックを取り出し450nmでの吸光度を測定し，陰性対照に対してO.D.が0.11以上を陽性とした．
 
<ITEM6>
 
表1に結果を示す。6店舗から収去された32検体のうち直接塗抹培養で3検体から、3種類の増菌培養液により21検体からC,jejuni/coliが分離された。これらの検体の直接塗抹培養では、その寒天上はほとんど雑菌で覆われていた。この寒天上の菌をかきとり、培養液に縣濁しDNA probe法で調べると10検体が<I>C.jejuni/coli</I>陽性であり、そして、それらの検体はすべて増菌培養で分離された。また、3種類の増菌培養液をDNA probe 法で調べるとすべて陰性であった。また、分離の妨げとなる雑菌の少ない検体の場合、2度にわたって収去された16検体のうち直接塗抹培養法では<I>C.jejuni/coli</I>は11検体から分離され、その集落の菌縣濁液からDNA probe法で10検体が陽性であった。さらに、それらの検体のPreston増菌により12検体から分離され、その培養液からDNA probe法により5検体が陽性であった。
 
<LIST1>

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